성숙 중 자두 과실의 당함량 및 invertase활성 변화와 효소학적 성질에 대하여 조사한 결과는 다음과 같다. 자두과실에 함유되어 있는 soluble sugar의 대부분은 sucrose, glucose 및 fructose이었다. 성숙 중 sucrose의 함량은 초기에는 서서히 증가하다가 그 이후 약간 감소하며 성숙말기에는 급격히 증가하였다. Glucose와 fructose는 성숙초기에는 완만히 증가하였으나, 그 이후 glucose는 감소, fructose는 증가하는 경향이었다. Invertase의 활성은 성숙함에 따라 증가하여 색깔의 변화가 일어나는 시기에 최고의 활성을 나타냈으며, 그 이후 급격히 감소하였다. 효소의 최적 pH와 온도는 각각 5.0과 $65^{\circ}C$였다. pH와 열안정성은 pH 5.0부근에서 안정하였으며, $70^{\circ}C$, 15분간에서 약 75% 잔존활성을 가졌다. 효소 활성은$Ca^{{+}{+}}$, $Cu^{{+}{+}}$에 의해 증가되었으나 $Hg^{{+}{+}}$에 크게 저해되었다.
Using a flue-cured tobacco variety, BU 109, effect of growth regulators(Fatty Alcohol and C-MH) on the change of invertase activity and sugar metabolites were investigated. Invertase activity in untreated leaf tissue was decreased along with maturation of leaf, However, a momentary increase of the activity was observed in leaves by the dual treatment of fatty alcohol and C-MH regardless of leaf position while sole C-MH treatment resulted in activity increase by 14 days after the treatment. Similar tendency was observed in stalk. Sugar content in leaf was increased immediately after the treatment but no significant increase at large resulted until 14 days after treatment. After harvest, reducing sugar was increased by the growth regulators. Nevertheless, in case of dual treatment, the total sugar content was not different with that of untreated control. R/T ratio was gradually increased after topping stage and reached maximum at 14 days after treatment of growth regulators. It decreased a little after harvest but the RR ratio was relatively higher due to increase of reducing sugar resulted by the treatment of the chemicals. Upon treatment of growth regulators, reducing sugar content was increased in lugs and leaves compared to untreated control and the content of sugar metabolites was increased by the use of the chemicals either at lower or higher than recommended dose. Key words : MH, FA, invertase activity, total sugar, reducing sugar
Invertase (${\beta}$-D-fructofuranosidase; EC 3.2.1.26) catalyzes the conversion of sucrose into glucose and fructose and is involved in an array of important processes, including phloem unloading, carbon partitioning, the response to pathogens, and the control of cell differentiation and development. Its importance may have caused the invertases to evolve into a multigene family whose members are regulated by a variety of different mechanisms, such as pH, sucrose levels, and inhibitor proteins. Although putative invertase inhibitors in the Arabidopsis genome are easy to locate, few studies have been conducted to elucidate their individual functions in vivo in plant growth and development because of their high redundancy. In this study we assessed the functional role of the putative invertase inhibitors in Arabidopsis by generating transgenic plants harboring a putative invertase inhibitor gene under the control of the CaMV35S promoter. A transgenic plant that expressed high levels of the putative invertase inhibitor transcript when grown under normal conditions was chosen for the current study. To our surprise, the stability of the invertase inhibitor transcripts was shown to be down-regulated by the phytohormone ABA (abscisic acid). It is well established that ABA enhances invertase activity in vivo but the underlying mechanisms are still poorly understood. Our results thus suggest that one way ABA regulates invertase activity is by down-regulating its inhibitor.
저온처리($4^{\circ}C$)하에서 보리(Hordeum vulgare L. cv. Chalssal) 유식물 잎의 당함량과 sucrosephosphate synthase, sucrose synthease, invertase의 활성의 변화를 측정하고, 또한 acid invertase의 성질을 조사하였다. 저온처리 3일만에 보리유식물의 환원당과 설탕의 함량은 1.3배 및 2.4배로 각각 증가하였다. 그리고 sucrosephosphate synthase, sucrose synthase 및 alkaline invertase의 활성에는 별다른 변화가 없었으나 acid invertase의 활성은 크게 저하하였다. Ammonium sulfate 분획과 DEAE-Sephacel 컬럼으로 부분정제한 acid invertase에서, 설탕에 대한 Km은 9.5mM이고 최적 pH는 5.5, 최적온도는 $35^{\circ}C$로 측정되었다. 여러 가지 기질에 대한 특이성을 조사한 결과 본 효소는 ${\beta}-fructosidase로$ 추정할 수 있었으며, 효소의 분자량은 Sephadex G-200 컬럼 크로마토그래피로 산출하였을 때 63 Kd이었다.
Kim, Soyeon;Park, Eunsuk;Lee, Tack-Kyun;Lee, Sukchan
한국식물병리학회:학술대회논문집
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한국식물병리학회 2003년도 정기총회 및 추계학술발표회
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pp.74.2-74
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2003
Arabidopsis infected with beet curly top virus (BCTV) has the systemic symptoms like stunting of Plant growth, curling of leaves and shoot tips, and callus induction. The regulation of sucrose metabolism by BCTV infection is essential for obtaining the energy source in the process of virus replication and symptom development. Sucrose metabolism-associated gene expression and biochemical enzyme activity were analyzed with the rossette leaves and inflorescencestems of BCTV infected Arabidopsis by the time course of 1, 7, 14, 21 day postinoculation. The expression of invertase and sucrose synthase genes ( encoding sucrose-cleaving enzymes )was increased and reversely the level of Atkin10a ( sucrose non-fermenting gene ) was decreased, resulting by semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction. The biochemical analysis of invertase and sucrose synthase activity was performed. The activity of neutral invertase in the inflorescence stems was elevated remarkably. The photosynthetic response in the source of sucrose metabolism was consistent with the down-regulation of ribulose 1,5 bisphosphate carboxylase gene, and lower activity than mock-inoculated plants. The levels of genes pertaining to the cell cycle, hormone, and biotic stress-related pathway showed an increase or a decrease dependent on viral symptoms. Therefore, sucrose sensing by BCTV infection can regulate the expression of sucrose metabolism-related key enzymes such as invertase and Atkin10a, and these gene products might influence to symptom development.
The purpose of this study was to investigate. the effects of the lactation of human or bovine milk and the method of using nursing bottles on the salivary invertase test scores and deciduous caries experience of children. 328 preschool children (boys 178, girls 150) in Iksan city were selected for this study. The parents of the children were asked to answer the questionnaire about the lactation of human or bovine milk and the time of using nursing bottles. The data were obtained from the salvary invertase activity score,(Resazurin Disc Test) deciduous caries experience and the questionnaire. The result were as follows. The invertase activity and caries experience of the human milk higher than that of the bovine milk group(P<0.05). There were significant positive relationships between the lactation period and the invertase activity and between the lactation period and the caries experience(P<0.05). Caries experience had a tendency to increase as the time of using nursing bottles increase (P>0.05).
The internal invertase of Rhodosporidium toruloids mating type a cells was purified to a single band on SDS-PAGE from cell-free extract by acid precipitation, ion exchange chromatogaphy andgel filtration. The determined molecular weight of he purified enzyme was about 95,000 by gel filtration and 100,000 daltons on SDS-polyacryamide gel electrophoresis. This enzyme didn't show any activity change by several metal ions except 15.4% decrease by {TEX}$Mn^{2+}${/TEX} and was strongly inhibited by 2-mercaptoethanol and SDS. The invertase maintained its activity at high level until 70℃, but inactivated at 80℃ almost completely. The optimal temperature and pH of the enzyme were about 60℃ and pH 5.0, respectively. The stable pH range of invertase was narrow from pH 3.0 to 6.0. The Km value and isoelectric point of enzyme were 3.4×{TEX}$10^{3}${/TEX} M, pH 4.4, respectively.
유전자의 재조합 균주의 생산성을 향상시키기 위한 발효시스템 개발을 목적으로 regulated promoter 인 SUC2 gene 갖는 유전자 재조합 S. cerebisiae를 모델로하여 유전자 산물인 Invertase 발현에 미치는 글루코오스 농도의 영향, 발효 중 플라스미드의 불안정성, 생육특성 및 continuous fed batch system을 연구하였다. 유전자 재조합 균주는 biphasic growth 현상을 보였으며 글루코오스 농도가 0.9g/$\ell$에서 2.2g/L로 증가함에 따라 비증식 속도는 0.224 h$^{-1}$에서 0.226 h$^{-1}$로 증가했으며 숙주효모보다 낮은 값을 나타내었다. 유전자 재조합 균주의 invertase 생산은 발효조내의 글루코오스 농도에 크게 영향을 받아 글루코오스 농도가 0.25~0.4g/L로 감소될 때 invertase 생산이 시작되었으며 회분발효중 플라스미드의 분리는 글루코오스 자화기간 동안에 빈번히 일어났으나 에탄을 자화기간에는 완만해지는 경향을 보였다. 또한 통기를 해주지 않고 배지의 용존산소만으로 배양시킨 결과 통기를 한 경우에 비하여 invertase의 비활성과 총활성이 각각 1.5 및 1.3 배 증가되었다. 균체의 증식단계와 유전자의 발현단계로 구분하여 발효시키기 위하여 영양분을 함유한 글루코오스 용액을 48m1/h(0.096g 글루코오스/48L의 유량으로 12시간 연속적으로 공급하여 fed batch 배양한 결과 invertase의 비활성과 총활성이 비통기적 회분배양 보다 각각 1.74, 2.74배 증가되었다.
건시제조 중 invertase의 활성 변화를 조사하고 정제된 invertase의 효소적 특성에 관하여 실험한 바 그 결과는 다음과 같다. 건조가 진행됨에 따라 invertase의 활성은 증가하여 건조 10일째 최고 활성을 나타내었으며 그 이후는 감소하였다. 건시에서 invertase를 250 mM potassium phosphate(pH 7.4)로 추출하여 $(NH_4)_2SO_4$염석, DEAE-cellulose 및 sephadex G-200 column chromatography의 과정으로 정제한 결과 정제도는 조효소액보다 약 27배 증가되었으며 회수율은 약 11%였다. 최적 pH는 sucrose, raffinose에 대하여 각각 5.0과 6.0으로 나타났으며 최적온도는 $40^{\circ}C$였다. 열과 pH 안정성은 $50^{\circ}C$까지 그리고 pH 5 부근에서 안정하였다. Sucrose에 대한 $K_m$값은 2.5 mM이었으며, 정제된 invertase는 polyacrylamide gel 전기영동상에서 하나의 band를 나타내었다.
세포내 및 세포벽 뿐만 아니라, 세포외에도 invertase를 구성적으로 생산하는 효모 Rh.glutinis K-24로 부터 세포외 invertase를 disc 전기 영동상으로 단일한 상태로까지 정제하였다. 정제 효소의 효소화학적 성질을 밝힌 후 이미 보고한 바 있는 세포내 및 세포벽 invertase와 그 개락적 성질을 비교 검토하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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