세포막의 정보전달기전중 phosphoinositide system은 정보가 전달될때 phospholipase C 효소의 작용으로 phosphatidyl inositol bisphosphate로부터 inositol triphosphate($IP_3$)와 diacylglycerol이 생성되며 $IP_3$는 다시 $IP_3$kinase에 의해 inositol tetrakisphosphate($IP_4$)로 되어 이차전령 물로서 작용한다. 본 연구는 $IP_3$kinase효소가 $Ca^{2+}$와 calmodulin에 의해 활성화되는 성질을 이용하여 calmodulin을 정제하고 $IP_3$kinase효소와의 친화도를 비교 관찰하였다. Calmodulin정제는 phenyl-Sepharose resin을 이용하여 column chromatography를 시행하여 정제확인하였으며 분자량이 17,000임을 SDS-polyacrylamide gel 전기영동으로 확인하였다. 정제된 calmodulin을 affigel column에 결합시킨 gel에 소의 뇌로부터 분리한 $IP_3$kinase효소가 담긴 시료를 calmodulin-affigel column에 적용하여 결합 및 유출정도를 비교하였으며 $Ca^{2+}$이 든 buffer에서 친화도가 가장 컸으며 유출은 EGTA용액에서 일부 유출되었으며 calmodulin/$Ca^{2+}$이 든 buffer에선 강한 유출정도를 관찰하였다. 그러나 calmodulin/$Ca^{2+}$는 $IP_3$kinase효소의 활성을 증가시키며 calmodulin이 단백질이어서 정제면에서 효소와의 분리가 쉽지않아 여러 다른 detergent를 적용하였으나 0.2% chaps buffer에서 집중된 유출을 관찰하였다.
Jo, You-Young;Kim, Sun-Hee;Yang, Young-Yell;Kang, Choong-Min;Sohng, Jae-Kyung;Suh, Joo-Won
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제13권6호
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pp.906-911
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2003
The function of genes related to spectinomycin biosynthesis (spcD, speA, speB, spcS2) from Streptomyces spectabilis ATCC 27741, a spectinomycin producer, was analyzed. Each gene was subcloned from a spectinomycin biosynthetic gene cluster and overexpressed in E. coli BL21 (DE3) using pET vector. After incubating each purified protein with its possible substrates, the final products were analyzed using high-performance liquid chromatography (HPLC). From these results, spcD, speA, and speB have been identified to be dTDP-glucose synthase, myo-inositol monophosphatase, and myo-inositol dehydrogenase, respectively. In addition, the results suggest that the spcS2 gene product functions downstream of the speB gene product in the biosynthetic pathway of spectinomycin. Taken together, the present study elucidates the early steps of the biosynthetic pathway for 6-deoxyhexose (6-DOH) part (actinospectose) and aminocyclitol part (actinamine) of spectinomycin.
미오-이노시톨과 라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산 및 올레산등 5종의 지방산 메틸에스테르를 디메틸술폭시드 용매내에서 에스테르교환반응을 행하였다. 에스테르교환반응생성물은 얇은막 크로마토그래피, 관 크로마토그래피에 의하여 각각의 에스테르를 분리할 수 있고 미오-이노시톨 모노에스테르는 향류분배 방법에 의하여 잘 분리할 수 있다. 모노에스테르의 수용액에 대한 표면장력, 기포력, 유화력등을 측정하고 색소법에 의한 임계미셀농도를 추정하고 HLB값을 산정하였다. 이 결과로 미오-이노시톨모노에스테르는 계면활성을 나타낸다는 사실을 알았다.
Membrane inositol glycerophospholipid (IGP) is metabolized to phosphatidylinositol-4-phosphate (PIP), phosphatidylinositol-4, 5-bisphosphate ($PIP_2$), and inositol triphosphate ($IP_3$) in signaling transduction. This study was carried out to determine the subclasses of IGP involved in signaling pathway. The acyl chain moieties of the phospholipids are easily modulated by dietary fatty acids. We analyzed acyl chain composition of IGP 3-subclasses, PIP and $PIP_2$ from rat brain after feeding sunflower seed oil enriched with linoleic acid or fish oil high in eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid. Long chain polyunsaturated fatty acids (LCPUFA) as eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid were not incorporated into ether-linked IGP (alkenylacylglycerophosphoinositol and alkylacyl-glycerophosphoinositol), PIP and $PIP_2$, while diacyl-glycerophosphoinositol (GPI) contained high LCPUFA. These results suggest that PIP might be phosphorylated from only the ether-linked IGP (alkenylacyl- and alkylacyl species) but not from diacyl subclass for signals to intracellular responses in the plasma membrane of rat brain.
Phytase(myo-inositol hexakisphosphate phosphohydro-lase;EC 3.1.38)활성은 소화기관인 소장 점막에서나 나타났고, 그 외 다른 장기에서는 alkaline phosphatase활성만을 측정할 수 있었다. 그리고 anti-90kDa phytase항혈청을 이용한 면역조직학적 조사 결과 소장 이외의 장기에서는 본 효소의 단백질 밴드가 검출되지 않았다. 이와 같은 결과 phytase는 소장에만 특이적으로 존재하며, 소장 특이적 효소의 생리적 역할로서 Phytic acid(inositol=hexakisphos-phate)를 가수분해한다. 흰쥐의 성장 발육과 더불어 phytase의 활성은 증가한다. 출생 후부터 이유기 전까지는 70kDa phytase외에도 90kDa phy-tase가 출현한다. 이 90kDa phy-tase는 이유기에 합성되는 것으로 추정된다.
Six-week-old Sprague Dawley rats were fed the diets of 20% casein or soy protein. Two weeks after the feeding, hepatocellular chemical carcinogenesis was initiated by diethylnitrosamine(DEN), and promoted by the diet containing 0.01% 2-acetylamino-fluorene(AAF) and two-thirds partial hepatectomy(PH). The animals were sacrificed at 8 weeks after the DEN injection. The area of placetal glutathione S-trnasferase(GST-P) positive foci, the activities of several enzymes in cellualr antioxidant enzyme systems and glucose 6-phosphatase were determined to investigate the mechanism of the anticarcinogenic effect by the dietary proteins. In another set of experiments, the drinking water of rats fed casein was supplemented with 1.5% inositol hexaphosphate(InsP6) to elucidate whether it has the comparable anticancer action of soy protein. The area and number of GST-P positive foci in the soy protein group were significantly(p<0.05) lower than those inthe casein group. The livers of rats fed casein showed moderate fattydegeneration and larger hyperplastic nodules than those of rats fed soy protein. In another set of experiments, the area and number of GST-P positive foci in the rats fed casein supplemented with InsP6 were not significantly different from those in the rats fed casein or soy protein. The lipid peroxidation of rats fed different protein sources showed no significant difference. Glutathione S-transferase(GST) activities were increased significantly(p<0.05) by carcinogen treatment in all dietary groups. Glucose 6-phosphatase(G6Pase) activities were decreased by carcinogen treatment, and hence showed a reverse relationship(r=-0.695, p<0.01) to the GST-P positive foci. Therefore, the activities in the rats fed casein were lower than those in the rats fed soy protein. These results suggest that the soy protein seems to be more anti-carcinogenic than casein by decreasing the preneoplastic lesion and by increasing the membrane stability but inositol hexaphosphate, a component of soy protein, may not be protective against hepatocarcinogenesis.
To assess the effect of pinitol supplementation and strength training for two weeks on the anaerobic capacity during and after exercise, and improvement of glucose metabolism during the recovery period of muscular fatigue with repeated acute bouts of cycling exercise, a total of 24 healthy young men were recruited and randomly and equally divided into three groups; pinitol supplementation group (PSG), placebo group (PLG), and control group (CON). Using a randomized double-blinded design, subjects in PSG were provided pinitol supplement, consumed orally 1.2 g/day, and participated in the resistance exercise program and cycling exercise for two weeks. Subjects in PLG underwent the same protocol as those in PSG but consumed the same amount of placebo. No supplementation and exercise program was given to CON. Before and after the intervention, all subjects were tested for their anaerobic capacities evaluated by Wingate test twice separated by 30 min. During the test, peak anaerobic power (PP), mean anaerobic power, total work, and fatigue index were evaluated During resting and recovery, blood samples were drawn and plasma pinitol, myo-inositol, chiro-inositol, insulin, free fatty acid, glucose, and lactate levels were analyzed After two weeks, PP and relative PP of the second biking were improved from the first biking in PSG only (p<0.05). No changes were found in all other variables of Wingate test in all groups. No statistical differences between groups and pre- and post-intervention were observed in concentrations of pinitol, myo-inositol, and chiro-inositol, but pinitol concentration was higher during recovery compared to the baseline in all groups and testings (p<0.05). Lactate level during recovery was higher than the resting level, but no other blood parameters were significantly changed. In conclusion, two weeks of pinitol supplementation in conjunction with short duration of anaerobic training in healthy young men did not induce any obvious benefits in terms of anaerobic capacity and energy metabolism Individual and/or population susceptibility may be one factor responsible for adopting pinitol supplementation.
Phytases are hydrolytic enzymes that catalyze the sequential hydrolysis of phytic acid (myo-inositol-1,2,3,4,5,6-hexakisphosphate) to myo-inositols with lower numbers of phosphate groups. Two types of phytases have been identified which initiate hydrolysis of the phytic acid at either the 3- or 6- position of the inositol ring. In the present investigation, a mathematical model was proposed and computed to estimate maximum enzyme reaction rate constants which fit the experimental data obtained by other authors. Although the data points were scattered to some extent, good agreement was found between the model and the experiment data. It appears that the maximum rate constants of removal of the first, second, and third phosphate groups were not equal. Also there was neither a steady trend upward or downward in the rate constants with the stepwise hydrolysis reactions.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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