최근 외국에서 Virus성 연화병을 발견하였으며 본병으로 인한 피해는 다를 연화병보다 매우 심하였음을 밝혔다. 그러나 우리나라에서는 거의 발병여부조차 밝혀지지 못하고 있는 것이다. 그리므로 본 연구에서 Virus성 연화병이 발생하는가를 생물학적검정과 전자현미경 관찰로 구명하였고 가잠을 어떠한 불량조건으로 사육하였을 때에 유발현상이 나타나는가를 조사하였다. 그러고 연화병의 Virus와 연화병 잠체에 분리한 Bacillus spp의 세균과의 기동작용 및 Virus의 잠좌내감염방지에 대하여 실험을 하였다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1) 우리나라에서 Virus성 연화병이 발생하였으며 그 병원체인 Virus 입자는 구형이고 직경이 26~30m$\mu$이었음을 동정하였다. 2) 누에를 식상불족으로 인한 영양장해를 입히게 하거나 3~4 영기의 고온다습환경에서 사육하면 광의의 유발현상이 뚜렷이 나타냈음을 인정하였다. 3) Virus 또는 세균을 단독접종한 경우보다 혼합접종한 경우는 잠복기간이 짧고 발병율이 높은 결과를 얻어 Virus에 세균과의 기동작용이 이루워졌음을 인정하였다. 4) Virus의 잠좌내감염방지에는 소석회를 사용함이 효과적방법이 였음을 인정하였다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제6권1호
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pp.27-31
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2003
Infectious flacherie of silkworm Bombyx mori is caused by B. mori infectious flacherie virus (BmIFV) and causes severe crop loss to sericulturists. In the present study, a colloidal textile dye-based dipstick immunoassay is developed for the detection of infectious flacherie in silkworms. Colloidal textile dye (blue D2R) with Aλ$_{max}$ at 620 nm was sensitised with 500 $\mu\textrm{g}$/ml of purified anti-BmIFV IgG. The dye-antibody reagent detects purified antigen up to 10 ng/ml and BmIFV infection in diseased larval extracts $(up to a dilution of {10^-5})$ and faecal matter extracts $(up to a dilution of {10^-2})$ by forming clear blue dot within 30 min. It was observed to be stable for three months period at $4^{\circ}C$. The efficacy of textile dye-based dipstick immunoassay was on pay with HRP-based dipstick immunoassay and fluorescent antibody test, and better than latex agglutination and ouchterlony tests in the detection of BmIFV The dye-based dipstick immunoassay method provides a simple, sensitive and less expensive test for the detection of BmIFV infection in silkworms.s.
현장려잠품종에 대하여 FV 및 이나주바이러스의 2령기잠 경구접종에 의한 품종간저항성을 비교검정한 결과는 다음과 같다. 1. FV 에 대한 품종별 저항성은 한생 1 호 $\times$ 한생 2 호가 가장 강하였고 무등$\times$선호가 가장 약했다. 2. 이나주 바이러스에 대한 저항성은 잠 117$\times$잠118, 경추$\times$소일, 무등$\times$선호, 한생 1호$\times$한생 2호 및 한생 3호$\times$4호 등 5개 품종은 완전저항성을 나타냈으며 잠 115$\times$잠116이 가장 약했다.
Sen, Ratna;Nataraju, B.;Balavenkatasubbaiah, M.;Premalatha, V.;Thiagarajan, V.;Datta, R.K.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제9권1호
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pp.35-40
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2004
Bombyx mori densonucleosis virus type 1 (BmDNV1)- a non occluded virus causes flacherie disease in the susceptible stocks of the silkworm, Bombyx mori. However, some stocks are non-susceptible. Non-susceptibility to BmDNV1 in B. mori is a unique case where the virus infection is completely inhibited by a single gene of the host. A survey conducted by this institute in some parts of Karnataka state has revealed that, 43.05% of the total incidence of flacherie disease caused by non-occluded viruses, are due to the synergistic infection of B. mori densonucleosis and infectious flacherie virus. Earlier study indicated that rearing of BmDNV1 resistant silkworm stock is effective in protecting silkworm against BmIFV also. In the present study the response of 78 silkworm stocks which include 42 of non-diapausing and 36 of diapausing groups, to BmDNV1 is investigated. Newly ecdysed third instar larvae were inoculated per-os with 10% inoculum of BmDNV1 extracted from the mid-gut of infected silkworm. One non-diapausing and three diapausing silkworm stocks were found to be resistant to BmDNV1. Eleven silkworm stocks were found to possess moderate resistance whereas rest sixty three were found to be susceptible to BmDNV1. Genetic analysis has shown that the resistance to BmDNV1 is autosomally inherited and controlled by a major dominant or a major recessive gene in different silkworm stocks. These resistant stocks can be utilized as the resource material to develop BmDNV1 resistant commercial hybrids. The selection strategies, depending upon the mode of inheritance of resistance in the resource material chosen, are discussed.
단클론항체의 높은 반응특이성을 이용하여, DNV-II의 유전자클로닝에 사용할 목적으로 세포융합법으로 단클론항체를 만들었다. 그 결과 최종적으로 유용하다고 판정된 4개의 단클론항체(C4, Fl, H2, M9)는 매우 높은 반응특이성을 가지고 있어, DNV-I 및 IFV와는 전혀 반응하지 않았으며, 항원으로 사용한 DNV-II와만 특이적으로 반응하였다. 또한 이들 단클론항체들 중 C4, Fl, M9는 DNV의 53KDa 구조단백질과 반응하였고, H2는 46.5KDa 구조단백질과 반응하였다.
누에병 중에 피해가 막대한 전염성 연화병을 방제하기 위하여 바이러스 증식을 특이적으로 억제하는 guanidine 유도체중에서 그 억제효과가 큰 guanidine hydrochloride(GH)를 도입하여 전염성 연화병 바이러스의 증식억제효과에 관하여 조사하였다. 1. 누에에 대한 GH의 약해시험 결과에서는 GH농도 0.01% 수준 이하에서는 약해가 전혀 없었다. 2. FV 감염잠 혼입에 따른 피해조사에서는 화용비율은 무처리(대조) 89.2% (100)에 대하여 1% 감염잠혼입구 70.7%(79), 5% 감염잠 혼입구 38.4%(43)이었으며 1만두수견양은 대조구 21.3kg(100)에 대하여 1% 혼입구 16.7kg(77), 5% 혼입구 8.8kg(41)으로서 전자와 같은 경향으로 나타났다. 3. FV에 대한 GH의 발병억제효과는 GH 0.01% 농도에서 대조구에 비하여 약 10배의 억제효과가 있었다. 4. GH의 투여회수와 발병억제효과에서는 FV접종후 계속 투여하는 것이 가장 효과적이었다. 5. FV 접종후 GH투여시간에 대한 발병억제 효과는 접종과 동시에 투여는 것이 가장 효과적이었다. 6. FV의 GH에 의한 시험관내 불활화조사에서는 GH가 시험관내에서 FV를 불활화시키는 작용이 인정되지 않았다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제12권2호
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pp.95-100
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2006
Central Sericultural Research and Training Institute, Mysore have evolved several highly productive bivoltine hybrids which can produce international grade raw silk. Among them $CSR2{\times}CSR4,\;CSR2{\times}CSR5,\;CSR3{\times}CSR6,\;CSR17{\times}CSR16,\;CSR18{\times}CSR19$ and $CSR12{\times}CSR6$ are being popularized in the field. There is a minimum difference in their economic characters but they appear to differ in survival. Though they are productive under high input management conditions, they are very susceptible to different diseases under normal rearing practices. No systematic attempts have been made to test their susceptibility status / resistance. Thus the present study is a modest attempt to screen the above six productive bivoltine hybrids to two important pathogens viz., Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus (BmNPV) and Bombyx mori Infectious Flacherie Virus (BmIFV) along with existing hybrid, $KA{\times}NB4D2$ to assess their susceptibility / resistance. The results shows that the productive hybrid $CSR2{\times}CSR4$ is the most resistant to BmNPV and it is suggested by its highest $LC_{50}$ value followed by $CSR12{\times}CSR6,\;KA{\times}NB4D2,\;CSR3{\times}CSR6,\;CSR17{\times}CSR16,\;CSR18{\times}CSR19,\;CSR2{\times}CSR5$. Based on the $LC_{50}$ value and $LT_{50}$ values for BmIFV, the hybrid $KA{\times}NB4D2$ was found to be the most resistant (1st position) one followed by $CSR3{\times}CSR6$ (2nd position) $CSR2{\times}CSR$ (3rd position) and $CSR12{\times}CSR6$ (4th position) $CSR17{\times}CSR16$, $CSR18{\times}CSR19$ (5th position) and $CSR2{\times}CSR5$ being the least. The response of 7 bivoltine hybrids to both the pathogens BmNPV and BmIFV indicates that, the hybrids $CSR2{\times}CSR4$, $CSR12{\times}CSR6$ and $KA{\times}NB4D2$ were found to be the most resistant when compared to others. Further, $KA{\times}NB4D2$ being less productive hybrid with a shell ratio of 20.08%, the other two hybrids $CSR2{\times}CSR4$ (Cocoon shell ratio, 21.44%) and $CSR12{\times}CSR6$ (cocoon shell ratio, 23.45%) can be considered to be most productive with superior quality cocoon and resistant to both BmNPV and BmIFV pathogens. The overall study indicated that the hybrid $CSR2{\times}CSR5$ is the most susceptible hybrid to both the pathogens.
Kar, Mithilesh;Rao, P. Sudhakara;Kishore, S.;Kumar, T. Selva;Gopal, Nisha;Nayaka, A.R. Narasimha;Chandrasekaran, K.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제18권1호
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pp.8-12
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2009
A study has been made to know the effect of a phytoecdysteroid 'Sampoorna' on uniform maturation of silkworms during spinning and its effect on diseased silkworms infected by major silkworm disease viruses, Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV) and Bombyx mori infectious flacherie virus (BmIFV). In the present investigation, the effect of the phytoecdysteroid "Sampoorna" on Grasserie disease caused by BmNPV have shown an average cocoon melting of 11.91% with a disease incidence of 5.83%. The values of 't' test for different treatments of BmNPV indicated low survival rate and cocoon traits were drastically reduced. Another major disease Flacherie caused by BmIFV has shown considerable levels of larval disease incidence (22-32%) and cocoon melting (3-7.67%) with an average melting of 12.95% and 20.24% disease incidence. There is a drastic reduction in survival rate, cocoon yield and other economic traits. The control batches were indicated negligible values for disease incidence and cocoon melting with Sapoorna application and without the inoculation of the two disease-causing viruses. The application of Sampoorna on already infected batches with major pathogens triggered high mortality and disease incidence and melting percentage was also significantly increased with reduced economic traits. Hence, it is suggested that application of Sampoorna in infected batches should be done only in the extreme conditions of rearing. Application of Sampoorna on healthy batches led to uniform maturation and improvement in productivity with the added advantage of better quality cocoons and labour saving.
가잠에 있어서 피해가 많은 전염성 연화병(Flacherie Virus; FV)과 농핵병 바이러스(Densonucleosis virus; DNV)의 증식에 관한 연구를 행하기 위하여 서당밀도 구배 초원심분리법에 의한 양바이러스의 정제 및 전자현미경에 의한 관찰, 바이러스 감염잠의 중장과 체액에서의 핵산과 단백질의 변동 및 감염중장 피막세포의 전자현미경에 의한 병리조직학적 관찰 등, 일연의 조사를 통하여 다음과 같은 연구결과를 얻었다. 1. 서당밀도구배에 의한 초원심분리법을 이용하여 FV 및 DNV를 분획한 결과, base line이 낮고 좌우상칭의 단일 peak를 나타내는 전형적인 바이러스 분획을 얻었으며, 또한 이들 바이러스의 negative 염색에 의한 전자현미경 관찰에서 FV는 27nm, DNV는 21nm의 균일한 구형입자임이 확인되었다. 2. 두 바이러스 감염잠의 체중은 바이러스 접종 6일 후부터, 중장중은 바이러스 접종 3일 후부터 건전잠에 비해 뚜렷한 감소를 나타냈다. 3. DNA의 양적 변화는 FV 및 DNV 감염잠에서 공히 중장에서는 전기간을 통해 건전잠에서 보다 높았고, 체액에서는 바이러스 접종 초ㆍ중기에는 큰 변화가 없고 바이러스 접종 7일 이후에는 건전잠에서 보다 훨씬 낮았다. 4. RNA의 양적 변화는 FV 및 DNV 감염잠에서 다같이 바이러스 접종 초기에 중장에서는 건전잠에 비해 높았고, 체액에서는 건전잠에 비해 매우 낮았으나, 바이러스 접종 말기에는 중장 및 체액의 경우 공히 건전잠에서 보다 현저히 낮았으며 그 정도는 DNV 감염잠에서 더 심했다. 5. FV 및 DNV 감염잠에서 중장과 체액의 단백질은 바이러스 접종 중기까지는 건전잠에 비해 큰 변화가 없었으나, 접종 말기에서는 건전잠에서 보다 월등히 낮았다. 6. 바이러스 접종 8일 후의 FV 및 DNV 감염잠 중장 RNA 전기영동상은 건전잠의 중장 RNA인 26S, 17S, 5S 및 4S의 4종 band와 동일했다. 7. FV 및 DNV 감염잠의 중장 단백질 전기영동상은 바이러스 접종 1일과 5일 후에는 건전잠의 것과 큰 차이가 없고, 접종 8일 후에는 건전잠에 존재하는 이동도가 낮은 L band가 양 바이러스 감염잠에서는 공히 소실되는 반면, 건전잠에서 볼 수 없는 이동도가 중간인 M band가 새로이 나타났으며 비교적 이동도가 높은 건전잠의 N band는 양 바이러스 감염잠에서는 2개로 분리되었다. 8. 체액단백질의 전기영동상은 FV 및 DNV감염잠 공히 건전잠의 것과 유사하나, 바이러스 접종 8일 후에는 양적인 감소를 나타내어 건전잠의 약 40%에 지나지 않았다. 9. FV 감염중장조직을 pyronin-methyl green 2종 염색을 하여 광학현미경으로 관찰한 결과, 바이러스 접종 8일 후의 중장원동세포내에서 A형 및 B형 봉입체가 형성되었음을 확인하였다. 10. FV감염 중장조직세포의 전자현미경 관찰에서는 바이러스 접종 5일 후에 배상세포의 'cytoplasmic wall'이 비대해지고 그 내부에 virus-specific vesicle이 형성되었으며, 바이러스 접종 8일 후에는 virus-specific vesicle, 바이러스 입자, linear structure, tubular structure 및 전자밀도가 높은 matrix 등의 바이러스 감염에 대한 특이적인 구조물이 배상세포의 세포질에서 관찰되었으며, microvilli내에서 바이러스 입자의 존재도 확정되었다. 특히 virus-specific vesicle 주위에서는 전자밀도가 높은 구형의 바이러스 입자 유사체가 관찰되었는데, 이것은 virus-specific vesicle 주위에서 바이러스 조립이 일어나는 것을 추정된다. 한편 원통세포 내에서 봉입체 관찰되고, 변형소구화된 배상세포가 중장강으로 탈락되는 것이 관찰되었다. 11. DNV감염 중장조직을 acridine orange 염색을 하여 형광현미경으로 관찰한 결과, DNV접종 5일 후에 본 바이러스 증식 장소인 원동세포핵의 비대가 뚜렷이 관찰되었다. 12. 전자현미경에 의해 DNV감염 중장조직세포를 관찰한 결과, 바이러스 접종 5일 후에 원동세포 핵내의 인이 소형 과립으로 붕괴되어 산재되었고, 접종 8일후에는 전자밀도가 높은 virogenic stroma가 출현하였으며, 감염 말기로 추정되는 핵내의 전자밀도가 전자보다 낮고 더욱 확대되어 핵의 대부분을 차지하는 virogenic stroma도 관찰되었다. 또한 이들 virogenic stroma내에서 바이러스 입자유사체가 관찰되는 것으로 보아 이 virogenic stroma는 바이러스 전구물질의 합성 및 바이러스 조립장소임을 시사하고 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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