Each of the recombinant structural genes of Helicobacter pylori urease, ureA and ureB, was cloned and overexpressed as inclusion bodies. Solubilization and renaturation of the inclusion bodies were carried out, to accelerate the pairing of sulfhydryl groups and the incorporation of nickel ions, which would lead to the native structure with high enzyme activity. Rates of urea hydrolysis were monitored as an indication of in vitro activation of renatured ureases. The activation of the apoprotein using 1 mM nickel ion, 100 mM sodium bicarbonate and a 10:1 ratio of reducing power resulted in a weak urease activity (about 11% of the native urease activity encoded by pTZ 19R/ure-l). When a sparse matrix screen method originally discovered for the crystallization of proteins was used, the activity increased higher than that obtained using glutathione. The effect of polyethylene glycol (PEG) on the activity was noticeable, giving two-fold increase in the specific activity (about 11 U/mg of protein corresponding to 22% of the native urease activity encoded by pTZ19R/ure-1).
An inclusion complex of phenytoin (PT) with ${\beta}-cyclodextrin\;({\beta}-CyD)$ in molar ratio of 1 : 1 was prepared, and the interaction between host and guest molecules was confirmed by infrared spectrometry, differential scanning calorimetry and X-ray diffractometry. Suppositories were prepared by the fusion method. PT and $PT-{\beta}-CyD$ complex were added to PEG 1540 and Witepsol H-15 under the vigorous stirring at $40^{\circ}C$. Content uniformity was tested for different formulations of the PT suppositories. The release rates were dependent on the K.P. V dissolution apparatus and the dialyzing tubing method. Then, the release rates were increased in the following order: $PT-{\beta}-CyD$ complex in PEG 1540>PT in PEG 1540>$PT-{\beta}-CyD$ complex in Witepsol H-15>PT in Witepsol H-15. The area under the curve and maximum blood concentration after rectal administration were increased in the following order: $PT-{\beta}-CyD$ complex in PEG 1540>PT in PEG 1540>$PT-{\beta}-CyD$ complex in Witepsol H-15>PT in Witepsol-15.
Cellulose acetate (CA) fiber mats containing inclusion complexes of asiaticoside (AC) in 2-hydroxypropyl-${\beta}$-cyclodextrin ($HP{\beta}CD$) for potential usage as wound dressings were developed. The AC/$HP{\beta}CD$ complex-loaded CA fibers at various $HP{\beta}CD$ to AC molar ratios of 0.5, 1, and 2 were prepared in 90:10 v/v mixture of 80% (v/v) acetic acid and N,N-dimethylacetamide (DMAc) via electrospinning. The maximum released amounts of AC depended on the $HP{\beta}CD$ content and were much greater than those released from the AC-loaded CA fiber mat. In the in vitro study, indirect cytotoxic evaluation with human dermal fibroblasts (HDFa) showed that these materials released no substances in the levels that were harmful to the cells and the cells appeared to attach and proliferate well on these substrates. However, only the CA fiber mats containing AC/$HP{\beta}CD$ complexes at the $HP{\beta}CD$ to AC molar ratio of 0.5 was effective in upregulating the production of collagen of the cultured cells.
Chiral separation of arylalcohols such as 1-phenyl-1-propanol, 1-phenyl-2-propanol, and 2-phenyl-1-propanol by capillary electrophoresis was studied using sulfonated $\beta$-cyclodextrin (CD) as a chiral selector and Ag colloids as an additive. The optimum separation condition of arylalcohols was found to be the chiral selector concentration of 6.5 mM, applied voltage of 15 kV, and pH of 7.0. In order to improve chiral separation, an Ag colloid was mixed with a running buffer. The resolution in the Ag colloid-mixed running buffer was considerably superior to that obtained with the sulfonated $\beta$-CD alone. The molar ratio of sulfonated $\beta$-CD to Ag colloid, which is one of critical parameters affecting resolution, was found to be optimum at 65 : 1. In order to elucidate the resolution mechanism, an inclusion-complex of the arylalcohols with sulfonated $\beta$-CD was prepared by mixing and shaking in solution, and then characterized by cyclic voltammetry (CV). The inclusion mechanism was also discussed using experimental results.
Supramolecular hydrogels were instantaneously fabricated by mixing aqueous solutions of $\alpha$-cyclodextrins ($\alpha$-CDs) and amphiphilic methoxy (polyethylene glycol) (MPEG)-$\varepsilon$-caprolactone (CL) oligomer, which was synthesized via the ring-opening polymerization of the CL monomer using low-molecular-weight MPEG ($M_n$ of MPEG=2,000 g/mol) as an initiator. The supramolecular structure of the hydrogels was revealed by X-ray diffraction (XRD) analyses. Rheological studies of the hydrogels revealed an elastic character when the number of CL units in the oligomer was more than 2, and the obtained hydrogels showed high storage modulus but relatively low shearing viscosity due to the low-molecular-weight character of the oligomer, which was more preferable for use as an injectable delivery system. The physical properties of the hydrogels could be modulated by controlling the chain morphology and concentration of the oligomers, as well as the feed molar ratio of the oligomer to $\alpha$-CD. The components of the supramolecular hydrogels are biocompatible and can readily be eliminated from the body. These features render the supramolecular hydro gels suitable as drug delivery systems and tissue engineering scaffolds.
This study strives to highlight the importance of considering the vertical ground motions (VGM) in the seismic evaluation of RC buildings. To this aim, IDA (Incremental Dynamic Analysis) is conducted on three code-based designed high-rise RC frame-core wall buildings using a suite of earthquake records comprising of significant VGMs. To unravel the significance of the VGM inclusion on the performance of the buildings, IDAs are conducted in two states (with and without the vertical component), and subsequently based on each analysis, fragility curves are developed. Non-simulated collapse criteria are used to determine the collapse state drift ratio and the area under the velocity spectrum (SIm) is taken into account as the intensity measure. The outcome of this study delineates that the inclusion of VGM leads to the increase in the collapse vulnerability of the structures as well as to the change in the pattern of inter-story drifts and failure mode of the buildings. The results suggested that it would be more conservative if the VGM is included in the seismic assessment and the fragility analysis of RC buildings.
The partitioning of recombinant human interleukin-2(rhII-2) in PEG 8000-dextran 38800 aqueous two-phase system has been investigated using three different sources of rhIL-2. In the case of pure rhIL-2, the solubility in a PEG-dextran two-phase system was low and most of rhIL-2 was partitioned into the bottom phase. For the recovery of rhIL-2 from insoluble protein aggregates, the inclusion bodies of recombinant E. coli were solubilized by the treatment with sodium dodecyl sulfate (SDS). The addition of SDS significantly enhanced not only the solubility of rhIL-2 but also the partitioning of rhIL-2 to the top phase. When the ratio of SDS to rhIL-2 was 2.0, the partition coefficient(K) and the recovery yield(Y) at the top phase were 4.5 and 88%, respectively, at pH 6.8. In order to reduce the recovery steps further, SDS was directly added to the intact recombinant E. coli cells and then partitioned into the PEG/dextran aqueous two-phase system. The observed partition coefficient ($K{\cong{3.0$) and recovery yield ($Y{\geq}80%$ )of this method were comparable to the rhIL-2 recovery from insoluble protein aggregates. The results obtained in this work indicate that PEG-dextran two-phase partitioning might provide a simple way for the recovery and partial purification of recombinant proteins which are produced as inclusion bodies.
Chae, B.J.;Choi, S.C.;Cho, W.T.;Han, In K.;Sohn, K.S.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.13
no.10
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pp.1440-1444
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2000
Two feeding trials were conducted to evaluate the effects of inclusion levels of dietary vitamin and trace mineral (VTM) premixes on growth and nutrient digestibility in growing pigs. A total of 112 pigs ($24.82{\pm}3.22kg$) were employed for 49 days (exp. 1), and 168 pigs ($21.64{\pm}1.41kg$) for 40 days (exp. 2) in completely randomized block designs. Treatments were: 1) 100%, 2) 150%, 3) 200% and 4) 250% NRC (1998) requirement of VTM in exp. 1, and the ratio of vitamins to trace minerals at 1) 100:100%, 2) 100:150%, 3) 150:100% and 4) 150:150% of NRC (1998) requirement in exp. 2. Basal diets for feeding trials were formulated to contain 3,310 kcal ME/kg and 18% crude protein, and contained 0.25% chromic oxide as an indigestible marker for digestibility trials. Increasing dietary VTM premix in growing pigs had linear and quadratic effects (p<0.05) on ADG, and feed conversion ratio was also improved (p<0.05) as VTM premix was increased by 150-250% of NRC (1998) requirements in exp. 1. Adding vitamin to trace mineral premixes at 150% NRC (1998) over the control improved (p<0.05) ADG and feed efficiency in growing pigs, but performances were not improved by vitamin nor by trace mineral premixes alone (p>0.15) (exp. 2). There were no differences (p>0.05) in the digestibilities of energy, crude protein and fat among dietary treatments. However, increasing dietary VTM premix in growing pigs had a linear effect (p<0.05) on the digestibilities of calcium and phosphorus. The 200 or 250% fed group showed improved (p<0.05) calcium digestibility, and 250% fed group also showed improved (p<0.05) phosphorus digestibility as compared to 100% or 150% fed group (exp. 1). The digestibilities of Ca and P were higher (p<0.05) in 150% addition of vitamins than in 150% addition of trace minerals in the diet (exp. 2).
Cast in situ and grouted concrete helical piles with 150-200 mm diameter half cylindrical ribs have become an economical and effective choice in Shanghai, China for uplift piles in deep soft soils. Though this type of pile has been successful used in practice, the reinforcing mechanism and the contribution of the ribs to the total resistance is not clear, and there is no clear guideline for the design of such piles. To study the inclusion of ribs to the contribution of shear resistance, the shear behaviour between silty sand and concrete slabs with parallel ribs at different spacing and angles were tested in a large direct shear box ($600mm{\times}400mm{\times}200mm$). The front panels of the shear box are detachable to observe the soil deformation after the test. The tests were modelled with three-dimensional finite element method in ABAQUS. It was found that, passive zones can be developed ahead of the ribs to form undulated failure surfaces. The shear resistance and failure mode are affected by the ratio of rib spacing to rib diameter. Based on the shape and continuity of the failure zones at the interface, the failure modes at the interface can be classified as "punching", "local" or "general" shear failure respectively. With the inclusion of the ribs, the pull out resistance can increase up to 17%. The optimum rib spacing to rib diameter ratio was found to be around 7 based on the observed experimental results and the numerical modelling.
A study was conducted to evaluate dietary valine (Val) requirement for Pacific white shrimp (Penaeus vannamei). Five isonitrogenous (353 g/kg) and isocaloric (4.08 kcal/g) semi-purified diets containing graded levels of Val (2.7, 5.1, 8.7, 12.1 or 16.0 g/kg) were formulated. Quadruplicate groups of 12 shrimp (average body weight: 0.46 ± 0.00 g) were fed one of the experimental diets (2%-5% of total body weight) for 8 weeks. Maximum weight gain was observed in 8.7 g/kg Val group. However, the growth performance was reduced when Val concentration in diets were higher than 12.1 g/kg. Feed conversion ratio was significantly increased with 2.7 and 16.0 g/kg Val inclusion. Shrimp fed the diets containing 2.7 g/kg Val showed significantly lower protein efficiency ratio, whole-body crude protein and Val concentrations. Dietary inclusion of Val significantly improved the relative expression of insulin-like growth factor binding protein and immune-related genes (prophenoloxidase, lysozyme and crustin) in the hepatopancreas and 8.7 g/kg Val group showed highest expression among all the groups. The dietary requirement of Val for maximum growth of juvenile P. vannamei, estimated using polynomial regression analysis on growth, was 9.54 g/kg of Val (27.2 g/kg based on protein level) and maximum growth occurred at 9.27 g/kg of Val (26.2 g/kg based on protein level) based on broken-line regression analysis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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