• 한국수정란이식학회지
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• 제17권1호
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• pp.33-44
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• 2002

본 연구는 기존의 수정란 이식기술을 다각적으로 분석하고 개선하여 한우 체내수정란의 생산 및 이식기술 체계를 확립하기 위하여 수행하였다 수정란의 생산 및 이식은 농협중앙회 가축개량사업소 한우개량부에서 사육하고 있는 공란우 232두와 수란우 434두를 이용하여 실시하였다. 본 연구에서 얻어진 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 수란우의 황체 위치와 등급에 따라 수정란이식을 실시한 결과는 오른쪽 난소의 A등급 황체, 왼쪽 난소의 B등급 황체가 존재할 경우가 유의적(P<0.1)으로 높은 수태율을 나타냈다. 2. 동결수정란을 이식했을 때의 수태율을 35.0% 로서 신선수정란의 수태율 56.2%에 비하여 유의(P<0.01)하게 낮았다. 3. 수란우의 발정일차(6.0∼9.0일)에 따라 수정란을 이식한 격과는 신선수정란에서 45.4∼65.7%, 동결수정란에서 22.0∼50.0%의 임신율을 나타내서 처리간에 유의성이 인정되지 않았다. 4. 수란우의 황체등급과 수정란의 동결 여부에 따른 임신율을 신선 및 동결수정란 모두에서 A등급의 황체일 경우가 40.8∼67.9%로 B 및 C등급 황체의 25.0∼56.0%보다 양호할 성적을 나타냈다. 5. 수정란의 발육단계 및 등급에 따라서 이식한 결과는 상실배의 이식이 수정란의 등급에 관계없이 평균 46.3%의 임신율을 나타내 어서 배반포배 이식의 34.1%보다 높게 나타났다.

• 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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• 한국수정란이식학회 2006년도 The 6th Intermational Symposium on Developmental Biotechnology
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• pp.60-61
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• 2006

• 한국수정란이식학회지
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• 제29권1호
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• pp.91-99
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• 2014

Oxygen consumption is a useful parameter for evaluating mammalian embryo quality, since individual bovine embryos was noninvasively quantified by scanning electrochemical microscopy (SECM). Recently, several approaches have been used to measure the oxygen consumption rates of individual embryos, but relationship between oxygen consumption and pregnancy rates of Hanwoo following embryo transfer has not yet been reported. In this study, we measured to investigate the correlation between oxygen consumption rate and pregnancy rates of Hanwoo embryo using a SECM. In addition to, the expression of pluripotent gene and anti-oxidant enzyme was determined using real-time PCR by extracting RNA according to the oxygen consumption of in vivo embryo. First, we found that the oxygen consumption significantly increased in blastocyst-stage embryos (blastocyst) compared to early blastocyst stage embryos, indicating that oxygen consumption reflects the embryo quality (Grade I). Oxygen consumption of blastocyst was measured using a SECM and total cell number of in vitro blastocyst was enumerated by counting cells stained by propidium iodide. The oxygen consumption or GI blastocysts were significantly higher than those of GII blastocysts ($10.2{\times}10^{15}/mols^{-1}$ versus $6.4{\times}10^{15}/mols^{-1}$, p<0.05). Total cell numbers of in vitro blastocysts were 74.8, 90.7 and 110.2 in the oxygen consumption of below 10.0, 10.0~12.0 and over $12.0{\sim}10^{15}/mols^{-1}$, respectively. Pregnant rate in recipient cow was 0, 60 and 80% in the transplantation of embryo with the oxygen consumption of below 10.0, 10.0~12.0 and over $12.0{\times}10^{15}/mols^{-1}$, respectively. GPX1 and SOD1 were significantly increased in over -10.0 group than below 10.0 groups but in catalase gene, there was no significant difference. On the other hand, In OCT-4 and Sox2, pluripotent gene, there was a significant difference (p<0.05) between the below-10.0 ($0.98{\pm}0.1$) and over 10.0 ($1.79{\pm}0.2$). In conclusion, these results suggest that measurement of oxygen consumption maybe help increase the pregnant rate of Hanwoo embryos.

• 한국수정란이식학회지
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• 제10권3호
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• pp.209-217
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• 1995

The present study was carried out to develop a cloning technology of mouse embryos by nuclear transplantation with electrofusion and to produce cloned offsprings by transfer of reconstituted embryos. A single nucleus from two- and eight-cell embryos was transplanted into the enucleated two-cell embryos by rnicromanipulation. The fusion of nucleus with recipient cytoplasm and the subsequent development of reconstituted embryos in vitro as well as in vivo to term were examined to determine the optimal electrofusion parameters for nuclear transplantation in mouse embryos. The successful enucleation of donor embryos was 84.9 and 83.3% in two- and eight-cell stage, respectively, and the successful injection of nucleus from two- and eight-cell donor embryos into the perivitelline space of enucleated two-cell embryos were 85.1 and 84.7%, respectively. No significant differences were found in enucleation or injection rate between the cell stages of donor embryos. When the blastomeres of intact two-cell mouse embryos were electrofused in 0.3 M mannitol medium(100 $\mu$sec., 3 pulses), the fusion rate was similarly 93.2, 92.2 and 92.0% in 1.0, 1.5 and 2.0 kV /crn, respectively, but in vitro development to blastocyst of the fused two-cell embryos was significantly(P<0.05) lower in 2.0 kV/cm (63.4%) than in 1.0 kV/cm (91.7%) or 1.5 kV/cm (82.4%). The development in vitro to eight-cell stage of the reconstituted embryos with nucleus from two-cell stage(45.5%) was significantly(P<0.05) higher than that from eight-cell stage blastomeres (16.7%). The number of blastomeres of the intact embryos at blastocyst stage was 50i0.6 and 55$\pm$2.4 in in vitro and in vivo cultured mouse embryos, respectively, but significantly(P<0.05) decreased to 35$\pm$0.7 in nuclear transplanted blastocyst embryos. The conception rate of mice following embryo transfer was 32.1% in the reconstituted two-cell embryos using two-cell donor nuclei, which was comparable to the fresh two-cell embryos(40.6%). However, the rate of development in vivo to term following embryo transfer of the reconstituted two-cell embryos using two-cell donor nuclei (23.5%) was significantly(P<0.05) lower compared with the percentage of two-cell fresh embryos(31.5%).

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제23권9호
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• pp.1152-1158
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• 2010

In differentiating human embryonic stem (d-hES) cells there are a number of types of cells which may secrete various nutrients and helpful materials for pre-implantation embryonic development. This study examined whether the d-hES could function as a feeder cell in vitro to support mouse embryonic development. By RT-PCR analysis, the d-hES cells revealed high expression of three germ-layered differentiation markers while having markedly reduced expression of stem cell markers. Also, in d-hES cells, LIF expression in embryo implantation-related material was confirmed at a similar level to undifferentiated ES cells. When mouse 2PN embryos were cultured in control M16 medium, co-culture control CR1aa medium or co-cultured with d-hES cells, their blastocyst development rate at embryonic day 4 (83.9%) were significantly better in the d-hES cell group than in the CR1aa group (66.0%), while not better than in the M16 group (90.7%)(p<0.05). However, at embryonic days 5 and 6, embryo hatching and hatched-out rates of the dhES cell group (53.6 and 48.2%, respectively) were superior to those of the M16 group (40.7 and 40.7%, respectively). At embryonic day 4, blastocysts of the d-hES cell group were transferred into pseudo-pregnant recipients, and pregnancy rate (75.0%) was very high compared to the other groups (M16, 57.1%; CR1aa, 37.5%). In addition, embryo implantation (55.9%) and live fetus rate (38.2%) of the d-hES cell group were also better than those of the other groups (M16, 36.7 and 18.3%, respectively; CR1aa, 23.2 and 8.7%, respectively). These results demonstrated that d-hES cells can be used as a feeder cell for enhancing in vitro and in vivo developmental potential of mouse pre-implantation embryos.

• 한국수정란이식학회지
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• 제21권3호
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• pp.191-198
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• 2006

본 연구는 $2001{\sim}2005$년(5년간) 제주도에서 사육중인 제주 한우와 흑우를 체내 수정란의 생산과 수정란 이식 기술을 통하여 조기 증식하고자 실시하였다. 한우 고등 등록우 286두와 흑우 경산우 69두(총 355두)에 대하여 발정 주기에 관계없이 CIDR를 질내에 삽입 후 7일째부터 성선 자극 호르몬($Folltropin^{(R)}-V$) 400 mg을 50 mg씩 균등하게 나누어 4일간 12시간 간격으로 근육주사하였다. 투여 6회째에 CIDR를 제거하였으며, 동시에 $PGF_{2{\alpha}}$ 25mg을 근육 주사하여 과배란을 유기하였다. 공란우의 인공수정은 $PGF_{2{\alpha}}$투여 후 발정을 확인하고 12 시간 간격으로 3회 인공 수정하였으며, 2회 인공 수정시 GnRH $250{\mu}g$을 근육 주사하였다. 수정란 회수는 1차 인공 수정 후 $7{\sim}8$일째에 비외과적 방법으로 채란하였다. 수란우는 CIDR를 7일간 삽입하였다가 제거하는 동시에 $PGF_{2{\alpha}}$ 25 mg을 근육 주사하여 공란우와 발정을 동기화 시켰다. 수정란 이식은 발정이 동기화된 수란우 1,219두에 대하여 6명의 수정란 이식 시술자가 비외과적 방법으로 황체가 존재하는 자궁각에 이식하였다. 한우 및 흑우 공란우의 평균 회수 총 난자수 및 이식 가능 수정란 수는 각각 7.4개 및 4.7개 였으며, 회수 총 난자수는 2 품종간에 차이가 없었으나, 이식 가능 수정란 수는 한우(5.0개)가 흑우(3.5개)에 비해 많았다(p<0.05). 공란우의 반복 과배란 처리에 따라 흑우에서는 과배란처리 두수 대비 수정란 채란우 비율이 감소되었으며(p<0.05), 한우에서는 회수 총 난자수 및 이식 가능 수정란 수의 감소가 나타났다(p<0.05). 과배란 처리 계절에 따른 수정란 회수 성적은 여름(5.6개)이 겨울(2.9개)에 비해 이식 가능 수정란의 수가 많았다(p<0.01). 수정란 이식 후 수태율은 평균 40%를 나타내었으며, 공란우의 품종간 차이가 없었으며, 이식년도가 2001년에서 2004년으로 경과될 때 수태율이 증가하였으며(p<0.05), 수정란 이식 시술자에 따른 수태율의 차이가($33.0{\sim}45.9%$) 인정되었다(p<0.01). 본 연구의 결과는 제주 한우 및 흑우에서 CIDR를 이용한 과배란 처리 및 수란우의 발정동기화 처리는 한우 체내 수정란의 안정적인 생산과 수란우의 준비가 가능함을 보여 주었다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제30권4호
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• pp.315-317
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• 2015

In vitro culture of murine embryos is an important step for in vitro production systems including in vitro fertilization and generations of genetically engineered mice. M16 is widely used commercialized culture media for the murine embryos. Compared to other media such as potassium simplex optimization medium, commercial M16 (Sigma) media lacks of amino acid, glutamine and antibiotics. In the present study, we optimized M16 based embryo culture system using commercialized antibiotics-glutamine or amino acids supplements. In vivo derived murine zygote were M16 media were supplemented with commercial Penicillin-Streptomycin-Glutamine solution (PSG; Gibco) or MEM Non-Essential Amino Acids solution (NEAA; Gibco) as experimental design. Addition of PSG did not improved cleavage and blastocyst rates. On the other hand, cleavage rate is not different between control and NEAA treated group, however, blastocyst formation is significantly (P<0.05) improved in NEAA treated group. Developmental competence between PSG and NEAA treated groups were also compared. Between two groups, cleavage rate was similar. However, blastocyst formation rate is significantly improved in NEAA treated group. Taken together, beneficial effect of NEAA on murine embryos development was confirmed. Effect of antibiotics and glutamine addition to M16 media is still not clear in the study.

• 한국수정란이식학회지
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• 제25권2호
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• pp.127-131
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• 2010

The objective of this study was to determine the mRNA expression patterns of several putative imprinted genes in in vivo and in vitro fertilized, parthenogenetic, and cloned porcine preimplantation embryos. Both maternally (Dlk1, IGF2, Peg1/Mest and Ndn) and paternally (IGF2r, H19 and Xist) imprinted genes were selected. We have used reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) to investigate gene expression patterns in the porcine embryos. IGF2 transcripts were detected in the most of embryos. In nuclear transfer (NT), Peg1/MEST transcripts showed fluctuating pattern. Dlk1 was only expressed partially from the morula and blastocyst stage of NT embryos. Ndn gene expression was started somewhat early for in vivo embryos. However, the expressions of maternally imprinted genes were similar in all types of blastocysts (NT, in vivo and in vitro fertilized, and parthenogenetic embryos). The IGF2R gene expression level was somewhat irregular and varied among samples. However, for the majority samples of all types of embryos, IGF2R expression was diminished after one- to two-cell stages and reappeared at the morulae or blastocyst stage embryos. H19 gene was only expressed early in parthenogenetic and in vivo embryos. For NT embryos, H19 was only expressed in blastocysts. Xist expression was detected in all blastocysts with the earliest being in vivo 8-cell stage embryos and the last one being NT blastocysts. These putative imprinted genes appeared to have stage specific expression patterns with a fluctuating pattern for some genes (Peg/Mest, IGF2r, H19). These results suggest that stage specific presence of imprinted genes can affect the embryo implantation and fetal development.

• 한국수정란이식학회지
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• 제19권3호
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• pp.239-244
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• 2004

본 연구는 체내, 체외 및 복제를 통하여 각각 생산된 배반포를 이식하여, 수란우의 수태율, 임신기간 및 유산율과 더불어 송아지의 생시 체중과 이후 생존율을 조사하였다. 그 결과, 수태 을은 체내수정란이 56.3%로서 복제 수정란의 19.4%에 비하여 유의하게 높았으나 (p<0.05), 체외수정란의 30.0%와는 유의성이 인정되지 않았다 유산율과 임신기간은 처리군 간에 유사한 경향이었다(유산을 0, 22.2 및 16.7%; 임신기간 278.8, 289.4 및 281.4일). 한편 송아지의 체중은 복제수정란에서 유래된 송아지의 평균 39.9kg은 체내수정란에서 유래된 송아지의 평균 25.5kg에 비하여 유의하게 높았다.(p<0.05). 체내수정란이 수태된 수란우(n=9)는 모두 정상 분만하였으며, 그 송아지 는 생후 60일령까지 모두 생존하였다. 한편 체외수정란이 수태된 수란우(n=7)도 모두 정상 분만하였으나, 그 송아지 가운데 1두는 생후 48일에 사망하였다. 복제 수정란이 수태된 수란우(n=5)는 정상 분만 3두 및 제왕절개 2두를 하였다. 정상 분만된 복제송아지(n=3) 중에서 2두는 분만 직후 사망하였으나, 제왕절개로 태어난 송아지는 생후 60일까지 모두 생존하였다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제31권1호
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• pp.47-52
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• 2016

본 연구는 희소한우의 증식을 위해 성 감별 처리된 정자를 체내수정란 생산 및 이식 기술에 적용하고자 정자의 농도별 수정란 회수 결과를 조사하고, 생산된 수정란은 이식을 통해 후대 생산 기술을 정립하고자 실시하였다. 가축유전자원센터에서 보유 중인 칡소 암소를 선발하여 공란우로 공시하였으며, 과배란처리는 발정주기에 관계없이 CIDR-Plus(Intravaginal Progesterone Releasing Device)를 질 내에 삽입하고, 4일 후부터 FSH(Antorin)를 12시간 간격으로 4일간 총 28AU(Amour unit) 절감 주사하고, FSH 주사 3일째 CIDR-Plus을 제거함과 동시에 $PGF_{2{\alpha}}$(Lutalyse) 3.0 ml를 주사해 과배란을 유기하였다. 인공수정은 발정이 확인된 후 12시간 간격으로 3회 실시하였다. 대조구의 경우, 보편적으로 사용하는 인공수정용 스트로우인 2,000만 농도의 칡소 동결정액 스트로우를 이용하였으며, 성감별 처리구의 경우, 스트로우 당 400만과 1,000만의 두 실험군으로 인공수정을 실시하였다. 수정란의 회수는 인공수정 후 7일째 되는 날 실시하였으며, 이식가능 수정란은 IETS의 기준에 따라 판정하였다. 대조구에서 체내수정란 회수 결과는 이식가능 수정란이 두 당 $6.20{\pm}2.28$개로 전체 회수 수정란의 67.39%로 나타났으나, 성감별 정자처리구에서는 $4{\times}10^6$ 농도에서 $4.33{\pm}5.39$개(26.53%), $10{\times}10^6$ 농도에서 $1.57{\pm}1.72$개(24.44%)로, 대조구에 비해 유의적으로 낮은 이식가능 수정란 결과를 나타냈다. 미수정란의 비율은 성감별 처리구가 각각 52.04%와 57.78%로 대조구의 8.70%에 비해 유의적으로 매우 높았다(p<0.05). 이식가능 수정란의 발달 단계에 대한 조사 결과, 대조구의 경우 초기배반포배 단계의 수정란이 30.43%로 가장 높은 비율을 차지했으며, 그 다음이 확장배반포배(19.57%), 상실배(17.39%) 단계였다. 반면에 처리구의 경우, 두 처리구 모두 상실배 단계의 수정란이 15.31%와 24.44%로 가장 높은 비율을 나타냈다. 생산된 체내수정란을 한우 수란우에 이식한 결과, 대조구의 경우 35.00%, 처리구의 경우 12.50%의 수태율을 나타내었다. 성감별 정자 유래 암송아지의 염색체 핵형분석 결과, 2n=60으로 일반 한우와 다르지 않은 염색체 분포 양상을 나타내었으며, 29개의 상동염색체와 XX 성 염색체를 가진 정상 암컷 개체임을 확인하였다.