• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제13권2호
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• pp.131-138
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• 2009

The binding of interleukin-6 (IL-6) cytokine family ligands to the gp130 receptor complex activates the Janus kinase (JAK)/ signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3) signal transduction pathway, where STA T3 plays an important role in cell survival and tumorigenesis. Constitutive activation of STAT3 has been frequently observed in many cancer tissues, and thus, blocking of the gp130 signaling pathway, at the JAK level, might be a useful therapeutic approach for the suppression of STAT3 activity, as anticancer therapy. AG490 is a tyrphostin tyrosine kinase inhibitor that has been extensively used for inhibiting JAK2 in vitro and in vivo. In this study, we demonstrate a novel mechanism associated with AG490 that inhibits the JAK/STAT3 pathway. AG490 induced downregulation of gp130, a common receptor for the IL-6 cytokine family compounds, but not JAK2 or STAT3, within three hours of exposure. The downregulation of gp130 was not caused by enhanced degradation of gp130 or by inhibition of mRNA transcription. It most likely occurred by translation inhibition of gp130 in association with phosphorylation of the eukaryotic initiation factor-2 a. The inhibition of protein synthesis of gp130 by AG490 led to immediate loss of mature gp130 in cell membranes, due to its short half-life, thereby resulting in reduction in the STAT3 response to IL-6. Taken together, these results suggest that AG490 blocks the STAT3 activation pathway via a novel pathway.

• KSBB Journal
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• 제11권2호
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• pp.165-172
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• 1996

자신의 3차구조를 가진 인체 프로인슐린을 얻기 위하여 Staphylococcal 프로테인 A(SPA)의 신호 랩타이드를 이용하여 대장균내에서 분비 발현을 시도하였다. 분비 발현을 위해 T7 프로모터, SPA 리보좀 바인팅 부위, SPA 신호 랩타이드, 프로인슐린 유전자를 연속적으로 연결하여 분비 벡터를 구성하였다. 이 벡터를 대장균에 넣은후 발현을 유도했으 나 면역적으로 반응하는 인체 프로인슐린은 배양액이나 페리프라스믹 공간에서 거의 존재하지 않았으며 세포 내에도 존재하지 않았다. 그러나 말현 유도시 세포 내에 프로인슐린 RNA가 급격히 증가하였으며 구성한 벡터는 실험실적으로 프로인슐린을 전 사(transcription) , 번역 (translation) 할 수 있었다. 이는 프로인슐린이 번역 후 급히 세포내에서 분 해됨을 의미하며 이로 인해 분비된 프로인슐린을 거의 얻을 수 없게 된 것으로 생각된다. 그러나 프로인 슐린의 세포내 안정성을 위해 말토즈 바인딩 프로테인을 융합짝으로 프로인슐린에 연결한 경우 과량의 분비된 인체 프로인슐린을 검출할 수 있었다.

• BMB Reports
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• 제29권4호
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• pp.359-364
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• 1996

By both in vitro hydroxylamine mutagenesis of the wild type 3-phosphoglycerate kinase gene (PGK) promoter DNA and insertion of the leu2-d gene, we have created yeast expression vectors potentially useful for production of eukaryotic genes in yeast. The guanine (G) to adenine (A) change at the -3 position from the ATG start codon of the PGK promoter-based vector rendered a 6~7 times elevated expression of the adjacent eukaryotic gene, and insertion of the leu2-d gene in the vector containing the mutated PGK promoter further enhanced the expression of the gene. When expression of the AIDS virus HIV1-gagP17 gene in a lacZ fusion form was examined with this new vector, a 15 times higher level of expression than that from the original PGK promoter was observed. Northern and Southern analysis showed that this elevated expression is due to the production of a high copy number of mRNA by leu2-d gene functioning and by efficient translation of the produced mRNA. Thus, the vector that contained the A at the -3 position from the ATG start codon in the promoter region and the leu2-d gene shows increased expression capability and will be potentially useful for production of eukaryotic genes in yeast.

• 전기학회논문지
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• 제60권7호
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• pp.1417-1426
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• 2011

Radiofrequency ablation through cardiac catheterization is one of minimally invasive intervention procedures used in drug resistant arrhythmia treatment. To facilitate more accurate and precise catheter navigation, systems for robotic cardiac catheter navigation have been developed and commercialized. The authors have been developing a novel robotic catheter navigation system. The system is a network-based master-slave configuration 3-DOF (Degree-Of-Freedom) robotic manipulator for operation with conventional cardiac ablation catheter. The catheter manipulation motion is composed of the translation (forward/backward) and the roll movements of the catheter and knob rotation for the catheter tip articulation. The master manipulator comprises an operator handle compartment for the knob and the roll movement input, and a base platform for the translation movement input. The slave manipulator implements a robotic catheter platform in which conventional cardiac catheter is mounted and the 3-DOF motions of the catheter are controlled. The system software that runs on a realtime OS based PC, implements the master-slave motion synchronization control in the robot system. The master-slave motion synchronization performance tested with step, sinusoidal and arbitrarily varying motion commands showed satisfactory results with acceptable level of steady state error. The developed system will be further improved through evaluation of safety and performance in in vitro and in vivo tests.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제34권3호
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• pp.735-742
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• 2013

Peptide nucleic acids (PNAs) that bind to complementary nucleic acid sequences with extraordinarily high affinity and sequence specificity can be used as antisense oligonucleotides against microRNAs, namely antagomir PNAs. However, methods for efficient cellular delivery must be developed for effective use of PNAs as therapeutic agents. Here, we demonstrate that antagomir PNAs can be delivered to hepatic cells by complementary DNA oligonucleotide and cationic liposomes containing galactosylated ceramide and a novel cationic lipid, DMKE (O,O'-dimyristyl-N-lysyl glutamate), through glycoprotein-mediated endocytosis. An antagomir PNA was designed to target miR-122, which is required for translation of the hepatitis C virus (HCV) genome in hepatocytes, and was hybridized to a DNA oligonucleotide for complexation with cationic liposome. The PNA-DNA hybrid molecules were efficiently internalized into hepatic cells by complexing with the galactosylated cationic liposome in vitro. Galactosylation of liposome significantly enhanced both lipoplex cell binding and PNA delivery to the hepatic cells. After 4-h incubation with galactosylated lipoplexes, PNAs were efficiently delivered into hepatic cells and HCV genome translation was suppressed more than 70% through sequestration of miR-122 in cytoplasm. PNAs were readily released from the PNA-DNA hybrid in the low pH environment of the endosome. The present study indicates that transfection of PNA-DNA hybrid molecules using galactosylated cationic liposomes can be used as an efficient non-viral carrier for antagomir PNAs targeted to hepatocytes.

• 한국약용작물학회지
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• 제15권1호
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• pp.46-50
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• 2007

하늘타리 (Trichosanthes kirilowii)로부터 조직배양 기법을 이용하여 약리작용을 나타내는 생리활성물질인 trichosantin을 생산하기 위한 연구로 Agrobacterium rhizogenes ATCC15834 의 감염을 통하여 기내 배양된 유묘의 잎절편으로부터 형질전환 모상근을 유도하였다. 유도된 모상근 clones으로부터 성장속도와 분지화 정도가 빠르며 단백질 합성능이 가장 우수한 TR-03 clones을 선발하였으며, 이를 사용하여 생체량과 배지내 가용성 단백질의 생산을 최대로 높일 수 있는 최적 배양조건을 조사하였다. TR-03 clone을 4% sucrose가 첨가된 MS 배지에 초기 접종농도 2 g (생중량)을 접종하여 100 rpm으로 배양시 생중량과 배지내 가용성 총단백질의 함량이 플라스크당 약 2.4 g (건중량)과 $28.3ug/\ell$으로 최대치를 나타내었다. 한편, 배지내 가용성 단백질에 대한 RIP활성 검정에서 배양 4주 후 21.3 unit로 최대치를 보였다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제37권1호
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• pp.89-95
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• 2010

Dihydroflavonol 4-reductase(DFR)는 flavonoid 생합성 경로의 가장 중심부에 작용하는 효소로 2R,3R-trans-dihydroflavonols로부터 leucoanthocyanidins 으로의 변환을 촉매한다. 본 연구에서는 색소유전자의 전이를 통하여 새로운 색소발현체계를 가진 품종을 육종하기 위한 기초연구로 안개초 (Gypsophila paniculata L.)의 꽃봉오리로부터 cDNAlibrary를 합성하였고 카네이션의 DFR 유전자를 probe로 사용하여 anthocyanin 합성경로의 중요 효소의 하나인 DFR 유전자를 분리하였다. 염기서열분석을 수행하여 분리유전자의 크기가 1279 bp이며 이 중 coding region은 1063 bp임을 확인하였다. 이미 밝혀진 다른 식물체의 DFR 유전자와 서로 염기서열의 일치성을 비교해 본 결과 Cheddar pink, 카네이션, 양배추, 개나리, 페튜니아, cup flower, 장미, 과꽃 및 거베라에서 각각 62% 이상을 나타내었다. 분리유전자의 발현을 확인하기 위하여 Northern blot 분석 및 인위적으로 기내에서의 transcription과 translation을 수행하였고, 분리한 유전자의 효소활성을 측정해 본 결과 leucopelargonidin의 작은 peak를 확인하였다. Southern blot 분석 결과 안개초의 DFR 유전자는 다른 대부분의 식물체와 유사하게 한 개가 존재함을 확인하였다.

• 생명과학회지
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• 제23권11호
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• pp.1311-1316
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• 2013

hnRNP L은 pre-mRNA에 결합하는 단백질들 중에서 핵심이 되는 단백질이다. hnRNP L은 양이 아주 많은 핵 단백질로서 핵과 세포질을 왕복하는 특성을 지니고 있다. 이 단백질은 염색질 변형(chromatin modification), pre-mRNA 스플라이싱, 인트론이 없는 유전자들에서 유래한 mRNA들의 세포질로의 반출(export), IRES-매개성 번역, mRNA의 안정성 조절, 정자형성과정 등, 세포 내의 여러 가지 과정에 관여하고 있는 것으로 알려져 있다. 이 논문에서는 hnRNP L과 결합하는 세포 내 단백질을 찾아내기 위하여 사람의 간세포 cDNA library를 사용하여 이스트 two-hybrid 탐색 실험을 수행하였다. 그 결과 사람의 간세포에서 IGFBP-4가 hnRNP L과 상호결합하는 새로운 파트너라는 것을 발견하였다. 본 연구를 통하여 hnRNP L이 이스트 two-hybrid 시스템에서 IGFBP-4와 특이적으로 상호 결합한다는 것을 처음으로 발견하였다. 본 연구에서는 또한 이스트 two-hybrid 시스템에서 hnRNP L이 IGFBP-4와 상호결합한다는 점을 in vitro pull-down 실험을 통하여 재확인하였다.

• 한국균학회지
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• 제21권1호
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• pp.28-37
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• 1993

섬유소 분해균인 P. verrculosum의 배양 여액으로부터 endo형 cellulase 인 CMCase IV를 정제하였다. CMCase IV는 13%의 탄수화물과 4.0의 pl값을 가진 산성, 당단백질이었다. CMCase IV의 SDSPAGE 상에서 분자량은 52 KDa이었으며, 효소 활성을 위한 최적 pH 및 온도는 5.0과 $50^{\circ}C$ 였다. CMCase IV를 CMC에 반응시 대부분 glucose와 cellobiose가 생산되었으며, 또한 동시에 transglycosylation 작용을 함께 갖는 것으로 사료되었다. Cellulase 활성 염색법(zymogram)을 통해서 P. verruculosum의 cellulase component가 배지 내에서 aggregation 되어있지 않음을 알 수 있었다. P. verruculosum mRNA의 in vitro 번역을 통하여 CMCase IV를 coding하는 번역산물이 동정 되었다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제16권11호
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• pp.1690-1694
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• 2003

The large and rapid changes of glucose utilization in lactating mammary tissue in response to changes in nutritional state must be largely related by external signal of insulin. This also must be related with the quantity and composition of the diet in vivo. To characterize the mode of growth factors and gut regulatory peptides with insulin, in vitro experiment was conducted with HC11 cells. All the growth factor alone and the combinations of growth factors significantly (p<0.05) increased in glucose uptake. Insulin, EGF and IGF-1 exhibited a stimulation of glucose uptake for at least 24 h. Furthermore, the highest (p<0.05) synergistic effect was shown in EGF plus IGF-1 and the second synergistic effect in insulin plus EGF while no synergistic effect was found between insulin and IGF-1. However, the gut regulatory peptides neither potentiated nor inhibited the action of insulin on glucose uptake. Although growth factors did not modulates glucose uptake via increasing the rate of translation of the GLUT1 protein, RT-PCR analysis indicated that the growth factors significantly (p<0.05) increased the expression of GLUT1. The growth factors are therefore shown to be capable of modulating glucose uptake by transcription level with insulin in HC 11 cells.