생체내 중요한 면역조절물질의 하나인 IL-l은 주로 Macrophage로부터 분비되어 각종 면역반응에 관여하는 것으로 알려져 있는데 이러한 Macrophage에 의한 IL-I 생성에 미치는 Histamine의 효과를 검토하고자 Mac-rophage-like cell line인 $P388D^1$세포에 의한 IL-1생성에 미치는 Histamine의 첨가효과는 $10^-^8M~10^-^3M$에 이르기까지 전 범위에서 농도의존적으로 IL,-1생성을 촉진시켰으며 첨가후 배양시간에 있어서는 24~36시간이 가장 크게 상승되었다. Histamine에 의한 Macropahge로 부터의 IL-1생성은 EGTA 및 $Co^2^+$의 첨가로 인하여 농도의존적으로 저하되었으며 이 결과는 Histamine의 IL-1 생성촉진작용이 세포내로의 $Ca^2^+uptake가 signal 역할을 하고 있음을 시사한다. $P388D_1$세포로의 $Ca^2^+$uptake양을 동정한 결과는 Histamine의 $10^-^7M$에서 $10^-^3M$까지 농도의존적으로 $Ca^2^+3M$유입이 촉진되는 결과를 나타내었다.
Similar to the other known structures of Bacillus thuringiensis Cry $\delta$-endotoxins, the crystal structure of the 65-kDa activated Cry4Ba toxin comprises three domains which are, from the N- to C-terminus, a bundle of $\alpha$-helices, a three-$\beta$-sheet domain, and a $\beta$-sandwich. To investigate the properties of the C-terminal domain III in isolation from the rest of the toxin, the cloned Cry4Ba-domain III was over-expressed as a 21-kDa soluble protein in Escherichia coli, which cross-reacted with anti-Cry4Ba domain III monoclonal antibody. A highly-purified domain III was obtained in a monomeric form by ion-exchange and size-exclusion FPLC. Circular dichroism spectroscopy indicated that the isolated domain III fragment distinctly exists as a $\beta$-sheet structure, corresponding to the domain III structure embodied in the Cry4Ba crystal structure. In vitro binding analysis via immuno-histochemical assay revealed that the Cry4Ba-domain III protein was able to bind to the apical microvilli of the susceptible Stegomyia aegypti larval midguts, albeit at lower-binding activity when compared with the full-length active toxin. These results demonstrate for the first time that the C-terminal domain III of the Cry4Ba mosquito-larvicidal protein, which can be isolated as a native folded monomer, conceivably participates in toxin-receptor recognition.
Objectives: The purpose of this study was to investigate the effects of Gardeniae Fructus Water Extract (GF) on the production of inflammatory mediators in RAW 264.7 cell treated with lipopolysaccharide (LPS). Methods: Gradeniae Fructus was extracted with distilled water (2,000 ml) for 2 hours. In order to evaluate cytotoxicity of GF, 3 - (4,5-dimethylthiazol-2-yl) - 2,5 - diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay was performed. To investigate antiinflammatory effects, the concentration of nitric oxide (NO) was measured with No assay, calcium (Ca) was measured with Fluo-4 Ca assay, and cytokine was measured by Bio-Plex cytokine assay in RAW 264.7 cell. And when p-value is below 0.05, it is judged to have the significant difference statistically. Results: 1. GF did not show any cytotoxicity. 2. GF suppressed the production of NO and Ca at the concentration of 25, 50, 100 and $200{\mu}g/ml$. 3. GF suppressed the production of interleukin (IL)-$1{\beta}$, IL-10, IL-12p40, macrophage-colony stimulating factor (M-CSF), macrophage inflammatory protein (MIP)-$1{\beta}$ and keratinocyte chemoattractant(KC) at the concentration of 25, 50, 100 and $200{\mu}g/ml$. 4. GF suppressed the production of vascular endothelial growth factor (VEGF), granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) and monocyte cheomattractant protein (MCP)-1 at the concentration of 25, 50 and $100{\mu}g/ml$. 5. GF suppressed the production of granulocyte macrophage-colony stimulating factor (GM-CSF) and regulated on activation, normal T cell expressed and secreted (RANTES) at the concentration of 25 and $50{\mu}g/ml$. 6. GF suppressed the production of MIP-2 at the concentration of 50 and $100{\mu}g/ml$, and tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$ at the concentration of 50 and $200{\mu}g/ml$. Conclusions: These results suggest that GF has anti-inflammatory effect and immuno-modulating activity.
Shirazinia, Reza;Rahimi, Vafa Baradaran;Kehkhaie, Ashrafali Rezaie;Sahebkar, Amirhossein;Rakhshandeh, Hassan;Askari, Vahid Reza
대한약침학회지
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제22권1호
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pp.16-27
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2019
Generative and vegetative parts of the cactuses have had a long-lasting position in folk medicine and their effects could partly be confirmed in scientific experiments. Nowadays, the cactus, fruits, and cladodes are the focus of many studies because of their desirable properties. Therefore, the summarized reports of valuable properties of medicinal plants may be a good way to familiarize researches with a new source of drugs with lower side effects and higher efficacy. Opuntia dillenii, a well-known member of the Cactaceae family, is used as a medicinal plant in various countries and grows in the desert, semi-desert, tropical and sub-tropical areas. It shows diverse pharmacological activities such as: antioxidant, anti-inflammatory, anti-tumor, neuroprotective, hepatoprotective, hypotensive etc. OD fruit also possesses valuable constitutes for instance: betalains, ascorbic acid, total phenol, protein as well as essential elements which suggest the significant potential of this plant as a complementary therapy against several pathological conditions. This review describes experimental evidence about pharmacological and therapeutic potential of OD in order to give the basis of its application in the prevention and treatment of some chronic diseases. More studies on OD can help better understanding of its pharmacological mechanism of action to explain its traditional uses and to identify its potential new therapeutic applications.
Objectives : Hwangnyeonhaedok-tang (Huanglian Jiedu Tang; HHT) has been widely used for purging' 'fire' and lessening virulence of any pathogenic organism. However it has been rarely conducted to evaluate the immuno-biological activity. In this study, we evaluated anti-inflammatory effects of HHT in LPS-activated Raw264.7 cells. Methods : Cells were treated with $1\;{\mu}g/ml$ of LPS 1 h prior to the addition of HHT. Cell viability was measured by MTT assay. The production of NO was determined by reacting cultured medium with Griess reagent. PGE2 and proinflammatory cytokines were detected by ELISA. Expression of iNOS, COX-2, $I{\kappa}B{\alpha}$ and NF-${\kappa}B$ were analyzed by immunoblot analysis. Results : All three doses of HHT (0.03, 0.10 and 0.30 mg/ml) had no significant cytotoxicity during the entire experimental period. The levels of NO and PGE2 were dramatically augmented by LPS compared to control. However, HHT extract dose-dependently reduced these increases. Expression of iNOS and COX-2 protein were also decreased by treatment with HHT extract. Furthermore, HHT extract significantly reduced the nuclear translocation of NF-${\kappa}B$ which is critical in regulating inflammation through transcription of iNOS and COX-2. In addition, HHT extract reduced the elevated production of inflammatory cytokines including TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$ and IL-6. Conclusions : The results in this study demonstrate that HHT extract exerts anti-inflammatory activities through the inhibition of NO, PGE2 and proinflammatory cytokines production via the suppression of NF-${\kappa}B$.
This study aimed to evaluate the utilization of low fish meal (LFM) diet and black soldier fly (BSF) Hermetia illucens meal supplementation in LFM diet as a fish meal (FM) replacer or functional additive for juvenile olive flounder Paralichthys olivaceus. Three LFM diets were prepared to contain 30, 25, and 20% FM, respectively (designated as F30, F25, and F20). Three BSF diets were prepared by adding 2.0, 2.5, and 3.0% BSF in the LFM diets, respectively (designated as F30B2.0, F25B2.5, and F20B3.0). A total of 540 fish (initial mean body weight: 22.3±0.01g) were randomly distributed into 18 tanks (240 L) in triplicate groups and fed the experimental diets twice daily for 12 weeks. Results showed that there were no significant differences in the growth performance, feed utilization and survival among all the groups. Lysozyme activity significantly increased in F30B2.0 and F25B2.5 groups compared to their respective LFM groups. Total immunoglobulin was significantly higher in F30 group than in F20 group. Anti-protease and myeloperoxidase activities were significantly higher in F30B2.0 group than in F20 group. Innate immunity gradually decreased with decreasing FM level in all the groups. BSF supplementation significantly improved immunity compared to their respective LFM diets. Therefore, BSF could be used as an immuno-stimulant supplement in LFM diets for P. olivaceus.
다당이 갖는 각종 생물 활성은 그 구조의 특성 및 분자량 분포에 의해 달라지므로 특정 다당을 분리하기 위한 정제과정은 다당 연구에 있어 필수적으로 요청된다. 본 연구에서는 서로 다른 특성을 소유한 다당을 분획하기 위한 간편하고 신속한 분리법을 개발하기 위해 한국산 감잎으로부터 조제한 다당 혼합물을 이용, 본 분리법을 최적화하였다. 감잎은 pectinase 처리 후 에탄올 침전법을 통해 조다당 획분인 PLE로 조제되었으며, PLE는 재차 농도별로 연속 희석된 에탄올 용액(EtOH : DIW=4:1, 2:1, 1.5:1, 1:1 및 0.5:1)을 이용하여 총 10개 획분(5개 침전물 획분: PLE-4~PLE-0.5, 5개 상등액 획분: PLE-4S~PLE-0.5S)으로 분획하였다. HPLC 분석 결과 PLE-4, PLE-2 획분은 저분자와 고분자 획분이 혼합된 다당이, PLE-1.5~0.5 획분에는 고분자 다당이 주로 검출되었다. 또한 PLE-4~PLE-1 획분은 구성당 분석 결과 RG(rhamnogalacturonan)-I과 RG-II 다당의 지표 구성당인 총 13종의 서로 다른 당으로 구성되어 있음이 확인되었으며, ${\beta}$-arabino-3,6-galactan 잔기를 함유하고 있는 것으로 확인되었다. 하지만 PLE-0.5 획분에서는 RG-II 및 ${\beta}$-arabino-3,6-galactan 잔기를 함유하고 있지 않았다. 한편 PLE-1.5S~PLE-1S 획분을 처리한 마우스 복강 대식세포에서는 농도 의존적인 IL-6의 생산 증가가 관찰된 반면, 저분자 다당으로 구성된 PLE-4S 및 PLE-2S 획분에서는 활성이 매우 낮음이 확인되었다. 이상의 결과로부터 본 분리 방법이 다양한 특성을 갖는 다당의 혼합물로부터 생물 활성을 갖는 RG류를 신속하고 간편하게 분리하는 데 있어 유용한 방법임을 확인할 수 있었다.
인간 정상 폐세포인 HEL299을 이용한 세포 독성을 살펴본 결과, 각 추출물은 1.0 $mg/m{\ell}$의 농도에서 최고 19.5%의 세포독성을 나타내었다. 또한 항암활성 효과를 살펴보기 위하여 2가지의 암세포를 이용하였는데, AGS, A549, MCF-7, Hep3B에서 수피 추출물의 경우 1.0 $mg/m{\ell}$의 농도에서 55% 이상의 높은 억제활성을 나타내었고, 또한 암세포의 생육활성에 대한 정상 세포의 세포독성 비로 나타낸 선택적 사멸도는 고농도에서는 모두 3이상으로 나타났다. B cell과 T cell을 이용한 면역세포의 생육 촉진 실험에서는, BT cell 은 배양 5일째 수피 추출물이 각각 $7.5{\times}10^4cells/m{\ell}$, $8.2{\times}10^4cells/m{\ell}$로 가장 높은 세포농도를 나타냈다. 면역세포를 이용한 cytokine의 분비량 측정실험에서는 수피 추출물이 배양 시간에 따른 cytokine의 분비가 가장 높게 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 각 세포의 $TNF-{\alpha}$의 분비량은 6일째 최고의 분비량을 나타내었고, 수피 추출물의 경우 대조군에 비해 7-8 배가량 정도 더 높은 분비량을 나타낸 것을 확인하였다. IL-6의 경우 6일째 최고의 분비량을 나타내었고, 수피 추출물에서 가장 높은 분비량을 나타내었다. 또한 우산고로쇠 수피 추출물을 첨가한 배지에 의한 NK cell의 면역활성을 측정하였으며, 모든 추출물에서 배양 시간에 따라 유의적으로 증가하는 것을 확인하였다. 그 중 우산고로쇠 수피 추출물에서 B cell의 경우 $18.0{\times}10^4cells/m{\ell}$, T cell의 경우 $17.2{\times}10^4cells/m{\ell}$으로 가장 높은 생육 활성을 나타내었다. 본 실험 결과를 통하여 고로쇠와 우산고로쇠의 기능성 소재로서의 가능성을 확인하였으며, 유용성분 분리와 생리활성에 대한 연구가 보다 다각적으로 가져야 할 것으로 생각된다.
뽕잎으로부터 분리한 H. pylori 억제물질이 건강기능식품으로 산업화되기 위하여 이들 유용성분이 생체 내에서 약리성을 가지는지 여부를 검토하였다. 청목노상으로부터 분리한 혼합물은 $200{\mu}g/100{\mu}L$의 농도에서 H. pylori에 대한 저해 clear zone을 형성하여 항균활성을 나타내었고, C57BL/6종 mouse에 H. pylori의 감염을 유도 한 결과 6주 이상이 되어야 H. pylori의 감염이 되는 것을 확인하였으며, 이 때 감염균수는 평균 $8{\times}10^5$ CFU/mL이었다. 경구투여를 통해 청목노상뽕잎에서 추출한 유효성분의 혼합물이 H. pylori 감염에 있어 예방 및 치료 효과를 갖는지 시험한 결과, 절개된 위속의 H. pylori colony 수가 약물투여 군에서 대조군에 비해 감소한 것을 확인하였다. 마우스의 혈청을 분리하여 immunoglobulin isotype을 측정한 결과, 대조군 보다 IgG1, IgA 등이 높게 생성되는 것이 확인되었고, 시료 혼합물에 의해 항체생성이 증가되어 H. pylori 감염을 억제하는 것으로 판단되었다. 이러한 결과로 뽕잎에서 추출한 유용성분인 caffeic acid, rosemarinic acid와 chlorogenic acid가 H. pylori의 감염에 있어서 예방 또는 치료효과가 있는 것으로 확인되었다. 따라서 H. pylori에 의해 유발되고 감염률이 증가되고 있는 위염, 위궤양, 위암의 예방과 치료가 가능할 것으로 판단되었다.
본 연구는 부패 생마로부터 저온성 부패균을 분리, 동정하고 분리균의 생육특성과 다양한 효소의 부패관련성을 조사하여, 생마 저온 장기저장 및 생마 가공식품 개발을 위한 기초자료를 제시할 목적으로 수행되었다. 저온 장기저장중의 부패생마로부터 서로 다른 13종의 저온세균을 분리, 동정하였으며, 다양한 온도에서 생마 절편을 이용한 부패력 측정 결과 분리균주 중 YAM-10및 YAM-12균주가 저온부패에 직접적으로 관련됨을 확인하였으며, 이들은 각각 Pseudomonas cepacia 및 Pseudomonas rhodesiae 동정되었다. 이들 균주는 20$^{\circ}C$에서도 우수한 amylase, CMCase, xylanase 활성을 나타내었으며 , 특히 amylase 활성은 생마 부패에 중요한 역할을 하는 것으로 판단되었다. YAM-10 및 YAM-12균주는 양파절편을 부패시키지는 못하였으며, 4$\sim$12$^{\circ}C$의 온도에서도 생육가능하며, pH 5 이하 및 pH 10 이상에서는 생육이 급격히 억제되었다. 현재 생마의 저온 장기저장 및 부패억제를 위한 저온성 Pseudomonas sp.의 제어와 생마부패에 관련되는 효소들의 특성과 저해에 대한 연구 및 저장성, 관능성이 강화된 산장, 염장 등을 통한 생마 가공식품 개발이 진행 중이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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