• 한국수정란이식학회지
• /
• 제14권1호
• /
• pp.39-46
• /
• 1999

To establish the optimal culture systems for production of transferable embryos in Korean Cattle, pregnancy rates of IVF-derived blastocysts according to different culture media, culture method and culture duration were compared. Development of IVF-derived embryos to blastocysts was most effective in YS medium group co-cultre with cumulus cells. Blastocysts cultured for 6 to 8 d in vitro showed higher hatching rate and good quality. Pregnancy rates after transfer of IVF-derived blastocysts cultured for 7 or 8 d were high. Through our experiments, it is considered that improvement of culture media and culture method is necessary for mass production of blastocysts with excellent of good quality in Korean Cattle.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제9권1호
• /
• pp.73-83
• /
• 1994

The objective of this study was to develop an effective in vitro production system capable of obtaining more porcine embryos from immature oocytes. These experiments were thus conducted to examine the effect of oocytes type and maturation time on the in vitro maturation(IVM) and fertilization(IVF) of oocytes and the in vitro development (IVD)of IVF embryos. 1. The degree of oocyte maturation based on cumulus expansion index(GEI) did not differ for A- and B-typed oocytes but the index of oocyte type C was lower(P<0.05) than that of other oocyte types. 2. When the oocytes of type A and B were matured for 36, 42 and 48hrs, the GEl was not different between the 36- and 42-h maturation but the GEl after 48hrs was greatly lower(P<0.05) than that of other maturation times. 3. The highest cleavage rate(48.6%) of IVF oocytes was obtained from A typed oocytes and 42-h maturation but the developmental potential based on cleavage index was the highest when B-typed oocytes were matured for 42hrs.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제26권4호
• /
• pp.287-296
• /
• 2011

Mammalian fertilization is a complex cascade process consisting of sperm migration through the female reproductive tract, physiological changes to sperm such as sperm capacitation and acrosome reaction, and sperm-egg interaction in the oviduct in vivo. On the other hand, in vitro fertilization (IVF) is a process by which egg cells are fertilized by sperm outside the body: in vitro. IVF has been used for a variety of purposes in reproductive biotechnology for human and animals. The discovery of sperm capacitation in 1951 promoted the development of IVF technology. In the initial stage of IVF, sperm capacitation in preincubation medium was shown to be essential to fuse with eggs. Besides, sperms should detour some of the in vivo regulations for IVF. This review introduces a general mammalian fertilization process, including sperm capacitation, removal of cumulus matrix, acrosome reaction, and sperm-egg fusion and focuses on the roles of key biochemical molecules, signal mechanisms, and genes involved during IVF and novel results of sperm-oocyte interaction elucidated in various gene-knockout mice models.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제16권3호
• /
• pp.193-201
• /
• 2001

본 연구에서는 DNA marker가 검정된 한우로부터 생산한 체외수정란을 이식하여 육질 및 육량의 유전적 능력이 우수한 한우를 대량생산하여 고품질 한우 쇠고기 생산 시스템을 구축하기 위한 전단계로서 DNA marker 검정 한우로부터 초음파유도 난포란을 채란하여 체외수성 및 수정란의 체외 발달에 미치는 각종 요인들과 배반포기 수정란의 부화율 개선을 위하여 투명대를 laser로 drilling을 실시하여 부화율을 조사하였다. 초음파유래 체외수정란의 분할률은 swim-up과 percoll 방법이 각각 75.0%(48/64) 및 71.4% (45/63)로써 이들간에 유의적인 차이는 없었고, 도축장유래 체외수정란의 분할율도 각각 69.9% (121/173) 및 62.2%(l12/180)로써 유의적인 차이가 없었다. 배반포기로의 발달율을 초음파유래 체외수정란이 25.0%(swim-up; 12/48) 및 22.2%(percoll; 10/45)로써 정자의 처리방법간에 유의적인 차이가 없었다. 초음파유래 체외수정란도 각각 29.8%와 28.6%로써 차이가 없었다. 초음파유래 난포란을 등급별로 분류하여 체외수정을 실시하였을 때 1(G I), 2(G II) 및 3(G III)등급 난포란의 분할율은 각각 60.0%(3/5), 69.2%(18/26) 및 62.1%(59/95)로써 이들간에 유의적인 차이는 없었으나, 4등급 난포란의 36.2%(25/69) 보다는 유의적(P<0.05)으로 높았다. 배반포기로의 발달율은 1 및 2등급이 33.3% (1/3) 및 38.7%(7/18)로써 3 및 4등급의 16.9% (10/59) 및 4.0%(1/25)보다는 유의적(P<0.05)으로 높았다 초음파유래 난포란을 체외수정 후 TFB, HT 및 HTB 배양액으로 체외배양을 실시하였을 때 분할율은 68.7%(55/80), 65.0%(13/20) 및 68.2% (15/22) 로써 유의적인 차이가 없었으며, 초음파유래 체외수정란의 배반포기로의 발달율은 TFB (25.5%), HT(23.1%) 및 HTB(20.0%)간에 유의적인 차이가 없었다. Laser system 으로 zona drilling을 실시한 EB, ExB 및 ExBO 수정란의 부화율은 각각 65.8%(25/38), 82.9%(29/35) 및 80%(16/20)로써 초음파유래 ExB 수정란이 가장 높게 나타났으며 (P<0.05), zona drilling 을 하지 않은 배반포기 수정란은 각각 25.0%(EB; 12/48) 및 35.7%(ExB; 15/42)로서 이들간에 유의적인 차이가 없었다. 그러나 zona drilling한 배반포기 수정란은 bona drilling을 하지 않은 배반포기 수정란에 비하여 부화율이 유의적(P<0.05)으로 높게 나타났다.

• 대한생식의학회:학술대회논문집
• /
• 대한불임학회 2004년도 제47차 추계학술대회
• /
• pp.91-91
• /
• 2004

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제9권3호
• /
• pp.269-277
• /
• 1994

The objective of this study was to develop an effective in vitro production system capable of obtaining more porcine embryos from immature oocytes These experiments were conducted to examine the effect of sperm factor on the IVF and IVD, and the effect of coculture with somatic cells on the IVD of embryos. Although the concentration of epididymal sperm for IVF did not affect on cleavage rate, but 5 x 105 sperm/mi showed the highest cleavage rate(48.7%) and the developmental potential of IVF oocytes from this concentration was also greatly higher (P$^{\circ}C$-stored sperm for l2hrs and the cleavage rate from fresh sperm was significantly higher (P<0.05) than that from frozen sperm, but the developmental potential after IVF was slightly high from the frozen sperm. The cleavage rate of IVF oocytes cocultured with oviductal epithelial cells and cumulus cells was 76.3% and 72.9%, respectively. There was no difference between two coculture systems but this rate was significantly higher(P<0.05) than that of medium alone(42.0%).

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제16권2호
• /
• pp.73-78
• /
• 2001

본 연구는 한우 체외수정란에 외래 유전자를 미세현미 주입한 후 체외 배발달을 조사하였다. DNA 미세주입은 체외수정 18~20시간 후에 DNA를 미세주입하였으며 체외 배발달율은 7일간 배양 후 조사하였다. 미세현미 주입 후 난할율은 36.3%로 대조구의 난할율 66.4% 보다 유의적으로 낮았으며(p<0.05) DNA가 주입된 수정란 중 상실배와 배반포배까지 발달율은 각각 5.6%와 1.9%로 대조구의 20.5%와 12.8%에 비하여 유의적으로 낮게 나타났다. 체외발달 배양액 내 L-ascorbic acid와 $\alpha$-tocopherol 첨가 배양시 상실배와 배반포배 발달율이 대조구에 비하여 유의적으로 높게 나타났다.(p<0.05) 따라서 미세현미 주입된 수정란의 체외 배발달 배양액에 항산화제의 첨가는 높은 체외 배발달율을 얻을 수 있으며 또한 체외성숙과, 체외 수정된 한우수정란을 이용하여 형질전환 한우 생산이 가능하리라 사료된다.

• 한국가축번식학회지
• /
• 제26권2호
• /
• pp.173-182
• /
• 2002

포유동물의 체외수정란 치적발달조건을 수립하기 위하여 난자의 성숙, 수정 및 배양시 형태학적인 관찰만으로는 불충분하여 각 세포내 구성물 및 핵상 등의 변화를 조사하여 개별 수정란의 품질평가를 통하여 수정란 발달 능력을 향상시키는 방법의 개발이 필요하다. 최근 체외생산된 수정란이 발달율 및 착상율이 현저히 감소되는 원인을 조사한 결과 이러한 수정란에서 할구의 파편화가 보다 더 진행되는 것을 관찰하였다. 이에 본 실험의 목적은 체외수정과 핵치환 유래 소 배반포에서 세포사멸 기전으로 알려진 apoptosis 조절 유전자로써 Bcl-2와 Bax 유전자의 전사체 발현량을 비교 조사함으로써 착상전 수정란 발달과정에서의 역할을 확립하고자 하였다. Apoptosis의 분석은 TUNEL 방법으로 수행하였다 체외수정과 핵치환유래 배반포에서 Bcl-2와 Bax 유전자의 발현량은 RT-PCR로 확인하였다. 핵치환유래 배반포에 있어 TUNEL 표식으로 확인된 비율은 체외수정 된 배반포보다 유의하게 높다 (P<0.001). 체외수정된 배반포의 Bcl-2의 발현량은 핵치환유래 배반포보다 높다. 반대로 체외수정된 배반포의 Bax 발현량은 핵치환 유래 소 배반포보다 낮았다 (P<0.05). 이러한 결과는 체외수정보다 핵치환 유래 소의 배반포에서 좀더 많은 파편화를 초래함을 보여준다. 또한, 핵치환 유래 수정란의 발달 정지의 증가는 apoptosis와 같은 핵의 파편화로써 야기될 수 있다고 사료된다.

• 한국동물번식학회:학술대회논문집
• /
• 한국동물번식학회 2004년도 춘계학술발표대회
• /
• pp.292-292
• /
• 2004

배아의 성별 판별을 위해 할구를 biopsy하여 핵상에서 정밀 분석을 하였다. 이 실험에서는 8-에서 16-세포기 배아의 할구를 배아 성결정의 대표물로 사용하여 IVF소 배아를 분석 평가하였다. 55개의 배아를 PCT후 biopsy하여 분석하였다. PCR에 의한 성판별에서 biopsy한 single blastomere와 blastocyst의 성판별의 일치하는 비율은 80%인 것으로 나타났다. IVF 수정란을 염색체 상태에서 평가하기 위해 8- 16- 세포기의 할구를 Karyotyping 하였다. 할구의 Karyotyping을 위해 metaphase 상태에서 vinblastine sulfate에 계속적으로 노출시켜 metaphse Ⅱ 상태를 유도하였다. (중략)

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제24권1호
• /
• pp.15-19
• /
• 2009

This study was carried out to collect the basic data about gestation lengths and offspring's birth weights and sex ratio of the dairy recipients transferred with Hanwoo IVF embryos. Blastocysts cultured for $7{\sim}8$ days were transferred to 96 and 167 heads for the basic data about gestation length and offspring's birth weight and sex ratio of the dairy recipients, respectively. The gestation lengths of the dairy recipients transferred with Hanwoo IVF embryos were $287.3{\pm}11.2$ ($257{\sim}311$) and $284.1{\sim}7.7$ ($266{\sim}295$) days in male and female of the offspring, respectively. The gestation lengths of the recipients were $290.7{\pm}10.4$, $285.8{\pm}3.4$, $280.0{\pm}9.3$ and $286.1{\pm}7.9$ days in spring, summer, autumn and winter of the calving season, respectively, and were significantly different among the calving season (p<0.05). The birth weights of male and female calves were $25.5{\pm}2.4$ ($21{\sim}30$) and $26.3{\pm}3.9$ ($21{\sim}40$ kg in offsprings of the dairy recipients transferred with Hanwoo IVF embryos, respectively. The sex ratio was 90.7 in the offsprings of the dairy recipients transferred with Hanwoo IVF embryos.