• 한국자원식물학회지
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• 제27권3호
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• pp.249-255
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• 2014

The rice belonging to Oryza sativa is not only has significant economic importance, for it is the major source of nutrition for about 3 billion all around the world. But also plays a vital role as a model organism, because it has a number of advantages to be a model plant, such as efficient transformation system and small genome size. Many methods and techniques have been conducted to attempt to distinguish different Oryza sativa species, such as amplified fragment length polymorphism (AFLP), random amplified polymorphic DNA (RAPD), simple sequence repeat (SSR) and so on. However, studies using sequence analysis of internal transcribed spacer (ITS), a region of ribosomal RNA has not been reported until now. This study was undertaken with an aim to understand the phylogenetic relationships among sixteen isolates of Oryza sativa collected from abroad and fifteen isolates collected from Korea, using ribosomal RNA (rRNA) internal transcribed spacer (ITS) sequences to compare the phylogeny relationships among different Oryza sativa species. The size variation obtained among sequenced nuclear ribosomal DNA (nrDNA) ITS region ranged from 515bp to 1000bp. The highest interspecific genetic distance (GD) was found between Sfejare 45 (FR12) and Anapuruna (FR15). Taebong isolate showed the least dissimilarity of the ITS region sequence with other thirty isolates. This consequence will help us further understanding molecular diversification in intra-species population and their phylogenetic analysis.

• 한국균학회지
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• 제45권4호
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• pp.345-354
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• 2017

본 연구에서는 소나무(Pinus densiflora)와 아로니아(Aronia melanocarpa)의 잎을 채취하여 표면살균한 후 내생균을 분리하였다. 분리한 균주는 형태적 특징과 internal transcribed spacer (ITS) rDNA 지역과 28S rDNA 지역 그리고 ${\beta}-tubulin$ 유전자의 염기서열을 이용하여 계통분석을 통해 동정하였다. 소나무에서 분리한 두 종의 균주인 Pestalotia lawsoniae와 Zasmidium fructicola, 그리고 아로니아에서 분리한 세 종의 균주인 Pestalotiopsis chamaeropis, Pestalotiopsis jesteri, Stagonosporopsis cucurbitacearum는 국내 미기록 진균으로 보고하고자 한다.

• 원예과학기술지
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• 제33권1호
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• pp.83-92
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• 2015

xBrassicoraphanus line BB#5, a new synthetic intergeneric hybrid between Brassica rapa L. ssp. pekinensis and Raphanus sativus L. var. rafiphera induced by N-methyl-N-nitroso-urethane mutagenesis in microspore culture, shows high seed fertility and morphological uniformity. Dual-color fluorescence in situ hybridization (FISH) using 5S and 45S rDNA probes and genomic in situ hybridization (GISH) using B. rapa genomic DNA probe were carried out to analyze the chromosome composition and the meiosis pairing pattern compared to its parental lines. The somatic chromosome complement is 2n = 38, which consists of 17 metacentric and two submetacentric chromosomes with lengths of 2.18 to $5.01{\mu}m$. FISH karyotype analysis showed five and eight pairs of 5S and 45S rDNA loci. GISH meiosis pairing analysis showed that 19 complete bivalents were most frequent and accounted for 42% of the 100 pollen mother cells examined. Based on chromosome number, size, morphology, rDNA distribution, and meiosis pairing pattern, both parental genomes of B. rapa and R. sativus appear to exist in xBrassicoraphanus line BB#5, demonstrating its genome integrity. Such stable chromosome constitutions and meiotic pairing patterns in somatic and meiotic cells are very rare in natural and synthetic intergeneric hybrids. Chromosomal studies and genetic and phenotypic changes in allopolyploids a re discussed. The results p resented h erein will b e usef ul f or f urther g enomic s tudy o f xBrassicoraphanus lines and their improvement as promising new breeding varieties.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제34권2호
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• pp.101-108
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• 2006

Phytophthora sp.의 균사성장을 특이적으로 저해하는 토양 미생물인 YNB54 균주의 정확한 분류적 위치를 밝히기 위해 Biolog GN2, API 20E와 같은 상업적 생화학 kit, 16S rDNA, DAN-DNA hybridization, GC함량, MIDI 등의 분석을 수행하였다. 다양한 생화학적 kit를 사용한 동정 결과는 이 균주가 다른 어떤 종보다 Enterobacter cloacae와 E. cancerogenus에 보다 더 가까움을 보여주었다. 또한 DAN-DNA hybridization, GC함량, MIDI 분석의 결과들 역시 다른 속 (Citerobacter, Klebsiella, Leclercia)보다 Enterobacter 속에 더 유사함을 암시해 주었다. 그러나 16S rDNA분석에서 이 균주는 Citrobacter freundii(99.4%)와 동일 그룹으로 구분되었지만 Enterobacter, Leclecia, Klebsiella 속 등과도 98%이상의 상동성을 보여주는 polyphyletic 특성을 보였다. 결론적으로 YNB54의 분류 동정을 위한 우리의 조사들은 이 균주가 유전적으로 다양하고 지금까지 아는 것보다 분류학적으로 더 복잡함을 암시해줌에도 불구하고 Enterobacter속임이 가장 유력하다는 것을 보여 주었다.

• Mycobiology
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• 제30권4호
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• pp.197-201
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• 2002

Specific primer sets based on ribosomal DNA(rDNA) internal transcribed specer(ITS) sequences were designed for rapid detection of Phellinus linteus and P. baumii. Polymerase chain reaction(PCR) with these primers produced unique bands for each Phellinus species. The annealing temperature range is from $40^{\circ}C\;to\;55^{\circ}C$. The length of PCR products(P. linteus and P. baumii) using designed combinative primer sets of PL1F, PL2R, PB1F, PB2R, ITS5F and ITS4R, were from 520 by to 730 bp. Fifteen strains of Phellinus species including P. linteus, P. baumii, P. weirianus, P. johnsonianus, P. rhabarberinus, P. pini, P. gilvus, P. igniarius, P. nigricans and P. laevigatus were examined in this study. Five strains, including two isolated strains of P. linteus(MPNU 7001 and MPNU 7002), and two isolated strains of P. baumii(MPNU 7004 and MPNU 7005) were shown to have about 520 bp (PL1F-PL2R), 700 bp (TTS5F-PL2R) and 600 bp (PB1F-ITS4R) -sized PCR single bands respectively. This molecular genetic technique provided a useful method for rapid detection and identification of P. linteus and P. baumii.

• 식물병연구
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• 제18권2호
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• pp.73-79
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• 2012

Phytophthora katsurae는 밤나무 잉크병의 원인이 되는 병원성 균류이다. P. katsurae를 검출하기 위하여 2개의 duplex PCR primer set을 제작하였다(SOPC 1F/1R+KatI 3F/5R, SOPC 1-1F/1-1R+KatI 3F/5R). SOPC 1F/1R과 SOPC 1-1F/1-1R primer pair는 sequence characteristic amplification regions(SCAR)를 이용하여 제작하였고, KatI 3F/5R primer pair는 internal transcribed spacer(ITS) 부위로부터 제작하였다. 추출한 genomic DNA를 1 mg/ml에서 1 ng/ml까지 10배씩 순차적으로 희석하여 균사량에 따른 Duplex PCR의 민감도를 확인한 결과, 2개의 primer set은 각각 1 ${\mu}g/ml$와 100 ng/ml까지 검출이 가능하였다. 유주포자를 $1{\times}10^6$부터 $1{\times}10^2$ cells/ml까지 10배씩 순차적으로 희석하고 genomic DNA를 추출하여 P. katsurae의 유주포자량에 의한 검출 한계를 확인한 결과, 2개의 primer set 모두 $1{\times}10^5$ cells/ml까지 검출할 수 있었다. 각각의 primer set은 PCR 검출을 실시하였을 때 P. katsurae 균주에서만 PCR 산물이 증폭된 반면에, Phytophthora 16종에서는 P. katsurae에 특이적인 PCR 증폭산물이 생성되지 않았다. 따라서, 2개의 primer set을 이용한 Duplex PCR은 P. katsurae의 신속하고 효과적인 검출에 유용하게 활용될 수 있을 것이다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제41권3호
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• pp.174-179
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• 1999

The genetic relationships among six Cordyceps spp. were investigated based on internal transcribed spacer sequences of ribosomal DNA .A portion of the these genes was amplified by PCR. Approximately 590 base pairs were successfully amplified, cloned, sequenced, compared. The nucleotide sequence of the six amplified fragments were aligned by the clustal W program. As a result, Cordyceps militaris shared 87, 96, 98, 90 and 97% sequences homology with Paecilomyces japonica, Paecilomyces sp. J300, Paeciomyces farinosa. Paecilomyces sp. J500 and Cordyceps sinensis, respectively. Paecilomyces japonica also shared 87, 88, 92 and 87% sequence similarity with Paecilomyces sp. J300, Paecilomyces farinosa, Paecilomyces sp. J500 and Cordyceps sinensis, repectively.

• 대한수의학회지
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• 제43권1호
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• pp.139-144
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• 2003

A chitinase cDNA named CHT1 was cloned from the hard tick, Haemaphysalis longicornis, and the enzymatic properties of its recombinant proteins were characterized. The CHT1 cDNA encodes 930 amino-acid (aa) residues including a 22 aa putative signal peptide, with the calculated molecular mass of the putative mature protein 104 kDa. The E coli-expressed rCHT1 exhibited weak chitinolytic activity against $4MU-(GlcNAc)_3$. The rCHT1 protein with higher activity was obtained using recombinant Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus (AcMNPV), which expresses rCHT1 under polyhedrin promoter. These findings suggest that the rCHT1 expressed in baculovirus-mediated Sf 9 cells has a high activity than E coli-expressed rCHT1.

• 식물병연구
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• 제10권1호
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• pp.63-68
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• 2004

벼에서 문제시되는 도열병과 잎집무의마름병을 생물학적으로 방제하기 위해 병원균과 생태학적 지위가 비슷한 벼 뿌리에서 내생하는 S. marcescens 23 균주를 분리하였다. 선발 균주들을 공시하여 R. solani와 P. grisea에 대한 길항능력을 검정하여 R. solani와 P. grisea에 각각 83.9％. 88.3％의 높은 억제율을 보인 RSm220 균주를 선발하였다. 선발된 RSm220은 생리ㆍ생화학적 특성 검정결과 S. marcescens type strain과 높은 상관성을 나타내었고. 16S rDNA sequencing에 의한 계통 분석에 의해 S. marcescens의 16S rDNA sequence에 98.2％ 유사성을 나타내어 S. marcescens로 동정되었다 내생성 S. marcescens RSm220은 벼 도열병과 잎집무늬마름병에 대한 생물학적 방제제로의 사용이 가능할 것으로 사료된다.

• 한국균학회지
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• 제44권4호
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• pp.252-258
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• 2016

본 연구는 제주도 사려니숲과 동백동산에서 편백나무(Chamaecyparis obtusa), 삼나무(Cryptomeria japonica), 비자나무(Torreya nucifera), 꽝꽝나무(Ilex crenata), 동백나무(Camellia japonica) 등 5종의 목본 식물의 잎에서 내생균을 분리하고, 형태 및 분자생물학적 특징 통해 동정하였다. 이를 위해 primer인 ITS1F와 ITS4를 이용하여 internal transcribed spacer (ITS) rDNA영역과 primer LR0R과 LR16을 이용하여 large subunit rDNA 영역을 그리고 primer Bt2a과 Bt2b를 이용하여 ${\beta}$-tubulin 영역의 염기서열을 동시에 분석하였다. 그 결과 Mycosphaerella aleuritidis, Neofusicoccum eucalyptorum, Neofusicoccum parvum, Phyllosticta citrichinensis, Phyllosticta cryptomeriae, Phomopsis cotoneastri, Sphaerulina rhododendricola, Guignardia mangiferae, Lophodermium jiangnanense, Lophodermium minus 등 10종의 미기록 내생균을 동정하였고, 이를 보고하고자 한다.