• 한국어병학회지
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• 제7권1호
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• pp.7-11
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• 1994

무지개송어(Salmo gairdneri)의 바이러스성 출혈성 패혈증에 관하여 연구하였다. 병어의 hematocrit값은 정상어보다 매우 낮게 나타났으며, GOT와 GPT값은 정상어보다 병어에서 약간 높게 나타났다. 병어의 혈청과 장기의 마쇄액을 CHSE-214세포에 감염시켜 세포변성 효과를 조사한 결과 감염 24시간 후에 세포변성이 나타났다.

• 한국어병학회지
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• 제11권2호
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• pp.129-136
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• 1998

1997년 3월 전라남도 및 경상남도의 해산어 육상 및 가두리 양식장에서 양성 중이던 넙치가 HRV(hirame rhabdovirus, Rhabdovirus olivaceus) 감염증과 유사한 증상을 나타내어 그 원인을 조사한 결과 새로운 rhabdovirus가 분리 되었다. 분리 바이러스(DF-9708)는 RTG-2 및 EPC 세포주에서 $15^{\circ}C$로 배양하였을 때 랩도바이러스 특유의 세포변성효과(CPE)를 나타내었으나 CHSE-214에서는 증식되지 않았다. 투과전자현미경으로 감염 세포내의 바이러스 입자 형태를 관찰해본 결과 bullet-shape의 크기 $70nm{\times}100\sim150nm$으로 인벨롭을 가진 바이러스였다. 분리바이러스는 pH 3 및 diethyl ether의 처리 조건에서는 감염성을 상실하였고, 열($50^{\circ}C$ 5 min, $60^{\circ}C$ 1 min)에도 약한 성상을 나타내었다. DNA 저해제인 IUdR $10^{-4}$M 처리에 의해서는 바이러스 감염가에 영향을 받지 않았다. 분리 바이러스는 Anti-HRV(8401-H) rabbit serum에 의해서만 중화 되었고, 전염성 조혈기 괴사증 바이러스(IHNV), 연어과 레오바이러스(CSV), 바이러스성 선회병 바이러스(RVS) 및 전염성 췌장괴사증 바이러스(IPNV) 등의 국내에서 분리되어지는 바이러스 항체로는 중화되지 않았다. 초원심법으로 정제한 분리 바이러스를 전기영동 한 결과 polymerase(L), glycoprotein(G), nucleoprotein(N) 및 2개의 matrix proteins(M1 및 M2)으로 구성되어져 있었으며, 각 단백질의 분자량은 L, 160 kDa; G, 55 kDa; N, 45 kDa; M1, 26 kDa; M2, 22 kDa의 크기로 계산되었다. 새롭게 분리된 바이러스는 외부증상으로는 기존의 HRV 감염과 유사한 점을 나타내었으나 그 바이러스학적 특성에 있어 약간의 차이점이 있어 본 분리바이러스를 우선 Nubchi rhabdovirus(NRV)(HRV-like)로 부르기로 한다.

• 한국수산과학회지
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• 제30권6호
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• pp.948-955
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• 1997

Immunomagnetic separation of virus coupled with .reverse transcription-polymerase chain reaction (IMS-PCR) was performed with infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV). A DNA fragment of expected size was synthesized in the RT-PCR with total RNA extracted from IHNV inoculated CHSE-214. In a SDS-PAGE analysis, a protein band of over 70kDa was detected from non-infected cells and cells inoculated with IHNV and infectious pancreatic necrosis virus (IPNV). This protein was detected in the Western blot analysis probably because of non-specific reaction to monoclonal antibody against IHNV nucleocapsid protein. In the immunomagnetic separation, magnetic beads coated with monoclonal antibody against the IHNV nucleocapsid protein was incubated with supernatant from IHNV inoculated CHSE-214 cells. During this process, the non-specifically reacting protein could be removed by washing the magnetic bead with PBS in the presence of an external magnetic field, and viral proteins were detected from the remaining, cleaned magnetic beads. It was necessary to extract viral RNA from the captured virus particles before RT-PCR, and no DNA product was detected when the captured virus was only heated 5 min at $95^{\circ}C$. A PCR-product of expected size was synthesized from IMS-PCR with magnetic beads double coated either by goat anti-mouse IgG antibody -monoclonal antibody or streptavidin - biotin conjugated monoclonal antibody.

• Journal of Microbiology
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• 제38권4호
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• pp.260-264
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• 2000

Reverse transcription (RT)-PCR and nested PCR methods (2-step PCR) were tested for their ability to detect marine birnavirus (MBV) in cultured rockfish, Sebastes schlegeli. One set of primers for RT-PCR was designed, based on a gene of infectious pancreatic necrosis virus (IPNV), and another set of primers for nested PCR was designed based on the VP2/NS junction region of MBV. This 2-step PCR method was specific for MBV and sensitivity was heightened when nested PCR was combined to RT-PCR. This 2-step PCR method was useful for detecting MBV not only in diseased fish, but also in asymptomatic fish. These results indicate that this 2-step PCR method is useful for detecting MBV in rockfish.

• 한국어병학회지
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• 제22권3호
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• pp.211-218
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• 2009

경북 울진 지역에서 채집된 양식 강도다리와 충남 태안 및 부산 지역 넙치 시료로부터 분리한 MABV에 대한 유전자 비교를 위해 VP2-NSPhylogenetic VP3 region (432 bp)을 phylogenetic 분석에 이용했다. Sequence 확인 결과 MABV (08-KU)는 일본 방어에서 최초 분리 보고된 YTAV와 98%의 nucleotide 유사성이 나타났으며, 이전 보고된 다 른 여러 strain들과는 76%이상 유사한 것으로 확인되었다. 그리고 MABV (06-KP)와 MABV (08-KC)도 YTAV와 97-98%의 높은 sequence 유사성을 보였다. 또한 다양한 MABV strain들과의 비교를 위해 충남태안 및 부산지역 넙치 시료에서 분리한 MABV (08-KC)와 MABV (06-KP)에 대한 phylogenetic 분석도 실시하였다. 그 결과 분석에 사용된 MABV (08-KU0, MABV (06-KP), MABV (08-KC)는 모두 일본 방어에서 분리된 MABV Y6와 동일한 genogroup VII에 포함 되었다.

• 한국어병학회지
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• 제32권2호
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• pp.59-67
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• 2019

본 연구에서는 넙치(Paralichthys olivaceus)로부터 분리한 바이러스성출혈성패혈증바이러스(viral hemorrhagic septicemia virus, VHSV, genotype IVa)에 대한 단클론 항체(monoclonal antibody, MAb)를 개발하였다. VHSV에 대한 항체를 생산하는 총 5개의 hybridoma clone을 생산하였다. 4개의 MAbs (2C10, 18H4, 23H6, 30B7)는 glycoprotein을 인식하였고, MAb 15E10은 nucleocapsid protein을 인식하였다. 5개의 MAbs는 western blot 상에서 VHSV에 감염된 세포와 넙치시료에 반응하였으나, 정상 세포와 넙치시료에는 반응하지 않았다. 또한 ELISA상에서 VHSV에만 반응하였고 6종의 어류바이러스(IHNV, HIRRV, SVCV, IPNV, MABV, NNV)에는 반응하지 않았다. 이상의 결과, 본 연구에서 제작된 MAbs는 VHSV에만 특이적으로 반응하는 것이 확인되어 VHSV를 검사하는데 사용될 수 있을 것으로 사료된다.

• 대한바이러스학회지
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• 제27권2호
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• pp.239-255
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• 1997

전염성 췌장괴저바이러스 (Infectious pancreatic necrosis virus) DRT 주의 VP1유전자를 대 장균 발현운반체와 Baculovirus에 삽입하여 대장균과 진핵세로에서 VP1단백질의 발현을 연구하였다. 재조합체 pMal-pol 클론 [7]에서 2.7 Kb 단편인 VP1 유전자를 제한효소 XbaI으로 절단하여 Baculovirus 운반체인 pBacPAK9에 클로닝하여 pBacVP1이라 명명하였다. 이 pBacVP1에 클로닝된 VP1유전자를 제한효소 SacI과 PstI으로 절단하여 대장균 발현 운반체인 pQE-30에 클로닝하여 pQEVP1이라 명명하였다. 또한 VP1 단백질의 C-말단에 6개의 히스티딘 $6{\times}His$이 붙어 있는 단백질을 만들기 위하여, pQEVP1 클론의 His부위를 EcoRI으로 절단하고, 또한 pBacVP1을 EcoRI으로 절단하여 생긴 부위에His-EcoRI DNA 단편을 교체시켜 재클로닝하여 pBacHis-VP1을 만들었다. pBacHis-VP1 DNA와 Bsu36I로 처리된 LacZ-Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus (LacZ-HcNPV)를 함께 lipofectin을 이용하여 곤충세포 (Spodoptera frugiperda cell)에 동시 감염을 시켜서 재조합 바이러스를 선발하여, VP1-HcNPV-1이라 명명하였다. pQEVP1 클론은 6개의 히스티딘 단편이 부착된 VP1단백질을 Ni-NTA resin 크로마토그래피법으로 정제하여 SDS-PAGE와 Western blot으로 확인하였고, 단백질의 활성과 구조에 영향을 주지 않는 6개의 히스티딘 단편 ($6\;{\times}\;His$)이 부착된 94 kDa의 VP1단백질을 정제할 수 있었다. 또한 재조합 바이러스에 감염된 곤충세포에서 VP1 단백질이 발현된 것을 전기영동과 Western blot으로 검색을 한 결과 95 kDa VP1 단백질이 발현이 되었음을 확인하였다.