The present study was performed to evaluate how cellular and humoral immune responses were perturbed by immunization of mixed periodontal bacterial biofilms. Each group of mice was immunizared with 1) Poqhyromonas gingivalis (P. gingivaliis) grown as a planktonic culture, 2) Fusobacterium nucleatum (F. nucleatum), 3) P. gingivalis grown as a biofilm, or 4) mixed P. gingivalis plus F. nucleatum grown as a biofilm culture, respectively. Immune mouse sera were collected from each mouse. Spleens were harvested to isolate T cells and consequently stimulated with antigen presenting cells and P. gingivalis whole cell antigen to establish P. gingivalis-specific T cell lines. There were no significant differences in the mean anti- gingivalis IgG antibody titers among mouse groups. Immunization of mice with pure P. gingivalis biofilm or mixed P gingivalis plus F. nucleatum biofilm resulted in significant reduction o f antibody avidity and opsonophagocytois function. INF-$\gamma$production by P. gingivalis-specific T cell lines was also substantially recluced in mouse groups immunized with the biofilm. It was concluded that P. gingivalis biofilm perturbs the cellular and humoral immune responses in periodontal disease.
Red ginseng is a medicinal herb widely used in East-Asia for a long time. Recently there have been a lot of studies about the effect of red ginseng on the immune responses. We investigated the differences between Korean red ginseng and Chinese red ginseng in the lymphocyte proliferation and cytokine production. The rats were divided into 3 groups, KRG(Korean Red Ginseng) group, CRG(Chinese Red Ginseng) group, and the Control group. Experimental groups were administered with Korean and Chinese red ginsengs for three months respectively. Then we obtained the lymphatic cells from spleen and compared the ability of KRG on the lymphocyte proliferation and the cytokine production after mitogen-stimulated culture to CRG. The proliferation of lymphocyte and level of $IL-1{\alpha}$ were significantly increased only in KRG group. There were significant increases in the level of $INF-{\gamma}$ in both KRG and CRG groups. There were no significant differences in the level of IL-2 and $TNF-{\alpha}$. These results indicate that KRG can induce infection-relevant immune responses much faster and higher than CRG. Furthermore, functional activation of CD8+ T-cell may be activated by red ginsengs.
Methanol extract prepared from the fruitbody of Phellinus linteus (EPL) showed anti-tumor and immune-stimulating activities. The invasion activity of Bl6-F10 melanoma cells through a reconstituted basement membrane to the collagen-coated lower surface of the filters was inhibited about 67% by EPL (100 $\mu\textrm{g}$/ml). Also, EPL inhibited the expression of the mRNA for MMP-2 and MMP-9. In vivo treatment of C57BL/6 mice (150 mg/kg) with EPL for 14 days, the pulmonary colonization was found to be inhibited about 75%. Using reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RT-PCR) analysis, we found that cytokine IL-12 and INF-${\gamma}$ genes were induced by EPL. Furthermore, EPL stimulated the proliferation of CD4$\^$+/(33.5%) and CD8$\^$+/(17.7%) in mouse splenocytes.
사람 기관지 상피세포에 알러지 환경을 유발 하고자 사이토카인을 처리하여 TARC의 분비를 유도하고, 이 케모카인 분비에 반하(半夏) 약쇄액(藥鎖液)이 미치는 효과를 실험한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 사람의 기관지 상피 세포주에 각각 IL-4, TNF-${\alpha}$, IFN-${\gamma}$ 및 IL-$1{\beta}$를 처리하는 경우와 IL-4와 TNF-${\alpha}$, INF-${\alpha}$와 IFN-${\gamma}$, IFN-${\gamma}$와 IL-$1{\beta}$를 병용 처리할 경우 TARC의 분비량를 측정한 결과 IL-4와 TNF-${\alpha}$와 TNF-${\alpha}$와 IFN-${\gamma}$를 병용 처리하였을 경우 TARC의 분비량이 유의하게 증가하였다. 2. 반하(半夏) 약쇄액(藥鎖液) 처리군의 24시간 및 48시간에서 통계적으로 유의한 감소를 관찰할 수 있었다. 3. 반하(半夏) 약쇄액(藥鎖液)에 의한 TARC 분비억제를 관찰 한 결과 농도의존적인 분비 감소 효과를 관찰 할 수 있었다. 4. MTT assay법을 이용한 세포 독성 측정에선 대조군과 반하(半夏) 약침액(藥鍼液) 처리군간에 유의성이 없었으므로 50, 100 및 200${\mu}g/m{\ell}$의 농도에선 세포독성이 없었음을 관찰할 수 있었다. 이에 반하(半夏) 약광액(藥鑛液)은 TARC 케모카인 억제를 통해 천식에 대한 치료효과를 나타낼 수 있을 것으로 사려된다.
치주질환의 진행이 나이에 의해 영향을 받는다는 사실은 알려져 있으나 노화에 따른 치주조직 세포의 기능적인 변화에 관한 사실은 많이 알려져 있지 않다. 노화에 따른 세포의 노화가 치주질환의 진행에 어떠한 여향을 끼치는가를 아는 것은 중요하다. 염증 상태에서 nitric oxide (NO)는 조직 파괴에 관여하는 인자로 작용하여 치주질환의 진행에 관여하는 것으로 알려져 있다. 따라서 이 연구는 사람의 치은에서 배양된 치은섬유아세포를 이용하여 세포의 노화에 따른 NO와 이의 합성효소인 inducible nitric oxide synthase (iNOS)의 발현을 알아봄으로써 세포의 노화가 치주질환의 진행에 끼치는 영향에 대해 알아보고자 하였다. 10세의 환자와 55세의 환자에서 각각 채취한 치은에서 배양된 세포와 10세의 환자에서 채취한 세포를 계속적인 계대배양을 통해 얻은 실험실 상 노화된 세포를 포함하여 총 3 종류의 치은섬유세포를 실험에 이용하였다. Hot phenol-water extraction을 통해 추출된 Porphyromonas, gingivalis ATCC 33277 lipopolysaccharide (LPS)와 재조합 $IFN-{\gamma}$ 를 세포에 적용시켜 Griess assay를 통해 조건화된 배지에서 NO를 측정하였다. 20세와 55세의 환자에서 채취된 치은 조직과 총 3 종류의 배양된 세포에 NOS-II 항체를 적용시켜 iNOS 단백질 발현을 관찰하였다. Total RNA를 추출하여 RT-PCR를 통해 iNOS mRNA의 발현을 분석하였다. 치은섬유아세포에서 NO는 자발적으로 발생되었고, 이러한 발현은 젊은 세포보다 노화된 세포에서 강하였다. P, gingivalis LPS와 제조합 $IFN-{\gamma}$는 치은섬유아세포에서 NO의 발현을 증가시켰고, 이러한 발현은 젊은 세포보다 노화된 세포에서 강하였다. 면역조직화학 염색에서 iNOS 단백질은 젊은 사람과 노화된 사람의 치은 조직 모두에서 치은섬유아세포와 상피의 기저층 세포와 염증세포에서 발현되었으나 노화에 따른 발현의 차이를 구별할 수는 없었다. 세포의 면역염색에서 iNOS 단백질은 노화된 세포에서 강하게 발현되었고 이러한 발현은 LPS와 $IFN-{\gamma}$ 에 의해 강화되었다. LPS와 $INF-{\gamma}$ 의 조건이 주어지지 않은 상태에서 iNOS mRNA는 젊은 세포에서보다 노화된 세포에서 강하게 발현되었다. 이러한 결과를 통해 세포의 노화가 NO와 iNOS 발현을 증가시킴으로서 치주질환의 진행에 영향을 끼칠 수 있음을 시사하였다.
율무 수침엑스(Co-Ex)가 대식세포내 톡소포자충(Toxoplosmo gondii RH strain)의 번식에 억제 작용이 있다는 보고(Soh et al.., 1994)에 이어 본 연구는 Co-Ex내의 유효성분(effective component)을 추구하기 위하여 이미 탈지조작과 단백질 변성과정을 거친 Co-Ex를 Tris-buffer solution에 녹인 후 원심과정으로 그 상청(WC1) 그리고 WC1을 ammonium sulfate 처리 후 원심한 상청(WC2)과 침사(WC3)를 분리하였고 WC1은 다시 column chromatography에 의하여 WC4 WC5 WC6로 분획하여 시료로 사용하였으며. 대식세포 활성에 기여하는 것으로 이미 알려진 $IFN-{\gamma}$, LPS 등을 참고자료로 하였다. 각 시험자료들의 대식세포 활성화로 인한 반응질소 중간산물(RN1) 생산량. 대식세포의 톡소포자충 감염상 대식세포내 톡소포자충 번식상 등을 비교 조사하였다 10% FCS 첨가 DMEM 배지에 배양하였고 이에 각종 시료(BRM)를 실험목적에 따라 배지에서 24시간 작용시킨 뒤 RNI를 조사하였고 이어 톡소포자충 $1\times10^6$을 30분 감염시킨 뒤 새 배지에 옮겨 48시간 배양한 뒤 Pl, Fl 등을 조사하였다. NO 생산은 각례 대조(시료 비투여)에 비하여 높았고 $IFN-{\gamma}$ 첨가는 생산량(${\mu}M/l$)을 더욱 증가시켰다(예 Control 7.5 Control + $IFN-{\gamma}$ 14.2 WC2 26.2 WC2 + $IFN-{\gamma}$ 57.8). 포자충감염율(%)은 대조에 비하여 낮았고 $IFN-{\gamma}$ 첨가시에는 더욱 낮아졌는데 $IFN-{\gamma}$ 첨가예에서의 감염율은 대조 38.0인데 비하여 WC2 19.2. WC1 + WC2 + WC3 7.2로 나타났다. 세포당감염율도 같은 경향으로 INF-$\gamma$ 첨가시험에서 대조 6.0(감염 대식세포 100개 중의 톡소포자충 평균수) WC2 1.7, WCI + WC2 + WC3 1.4 등으로 나타 났다. 결론적으로 율무엑스 수침엑스 중 WC2, WC1 등은 대식세포를 활성화하나 $IFN-{\gamma}$ 첨가는 더욱 그 활성화를 높이며 그 중 WC2가 활성화에 주역을 하는 것으로 사료되는 바이다.
본 연구에서는 신령버섯의 면역기능 개선 효과를 마우스를 이용한 동물 모델에서 면역기관의 무게와 세포증식, 자연살해세포 활성, 사이토카인 분비능을 측정하고 대식세포 증식과 활성을 측정하여 평가하였다. BALB/c 마우스에 저(4 mg/kg), 중(20 mg/kg), 고(100 mg/kg) 농도의 신령버섯을 21일간 경구로 투여하였다. 마우스를 희생하여 체중 및 면역장기 무게, 비장세포의 증식과 사이토카인 생성, 자연살해세포의 활성을 측정하였다. 그 결과 신령버섯은 마우스의 체중, 간, 비장, 흉선의 무게에 영향을 주지 않았으며, 비장세포의 증식에 유의한 효과가 없었다. 또한 비장세포의 IL-4과 IL-12 생성을 억제하였으며, 마우스 자연살해세포의 활성을 현저하게 증가시켰다. 정상 마우스에서 분리한 비장세포에 신령버섯을 처리한 in vitro 실험에서는 신령버섯 $5{\sim}100{\mu}g/mL$에서 농도 의존적으로 비장세포의 증식과 $IFN-{\gamma}$ 생성을 증가시켰다. 신령버섯은 대식세포인 RAW 264.7 세포의 증식을 $100{\mu}g/mL$ 농도까지 농도 의존적으로 증가시켰으며, 대식세포에 의한 NO의 생성을 농도 의존적으로 증가시켰다. 이상의 결과를 종합해 보면 신령버섯을 마우스에 3주간 투여하면 동물의 체중, 면역장기의 무게와 면역세포의 증식에는 영향을 미치지 않지만 자연살해세포의 활성을 70% 가량 증가시키며 IL-4와 IL-12의 생성을 억제한다. 정상 마우스에서 분리한 비장세포에 신령버섯을 처리하면 세포증식과 $IFN-{\gamma}$ 분비가 증가되고, 대식세포인 RAW 264.7 세포의 증식과 NO 생성이 증가된다. 따라서 신령버섯은 바이러스에 감염된 세포나 암세포를 죽이는 자연살해세포와 대식세포의 활성을 증가시켜 면역반응 조절에 중요한 역할을 할 것으로 기대된다.
Rats were administered zearalenone (ZEA) via gavage at dosages of 0, 1, 5, and 30 mg/kg for 36 days. On treatment day 8, inactivated porcine parvovirus vaccine (Vac) was injected intraperitoneally. Antibody production against porcine parvovirus was then measured as a function of ZEA treatment. Compared to the vaccine alone, ZEA treatment, with or without Vac, decreased the serum level of IgG. The level of IgM decreased in all ZEA groups at day 22, but the decrease was sustained only in the medium-dose ZEA group at day 36. The level of IgA was unchanged in the Vac only and ZEA groups at day 22, but was decreased in the 5 mg/kg ZEA plus Vac group compared to the Vac only group at day 36. The level of IgE was decreased by all doses of ZEA at day 22, but was unaffected in ZEA plus Vac groups compared to the Vac only group. The levels of IL-1 in the thymus and spleen; INF-${\gamma}$ in serum; IL-2, IL-6, and IL-10 in the thymus; and IL-10 and IFN-${\gamma}$ in the spleen decreased after ZEA administration. Furthermore, the levels of IL-$1{\beta}$ in the spleen and mesenteric lymph node, IL-$1{\beta}$ in the thymus, IL-2 in the thymus and spleen, IL-6 in the thymus, IL-10 and IFN-${\gamma}$ in the spleen, and GM-CSF and TNF-${\alpha}$ in the thymus decreased after vaccination in rats exposed to ZEA. In conclusion, these results suggest that ZEA exposure via drinking water can cause an immunosuppressive effect by decreasing immunoglobulins in serum and cytokines in lymphoid organs.
연구배경: 외인성 천식은 TH2세포에 의한 매개체의 주요 원인중 하나임이 밝혀지고 있다. 연구자 등은 증상 악화로 내원한 기관지천식 환자와 만성기관지염 환자 사이에 T 림프구 아형의 변화와 싸어토카인 (cytokine)들의 변화에 차이가 있는지 연구하고자 하였다. 방 법: 기관지 천식으로 치료중인 환자 중에서 천식 악화로 내원한 외인성 천식 15예와 만성기관지염 환자 12예, 그리고 정상인 5예를 대상으로 하였다. 환자의 병력과 임상소견, 피부반응검사, 그리고 특이 IgE 측정을 시행하고 단일항체인 CD62L를 이용하여 flow cytometer로 림프구아형을 분석하고 ELISA kit(Quantikine IL-4, IFN-$\gamma$)를 이용하여 IL-4, IFN-$\gamma$을 측정하였다. 결 과: CD4+ T 림프구는 기관지천식환자에서 $40{\pm}7.2%$ 만성기관지염 환자 $43{\pm}19.8%$, 정상인에서 $41{\pm}14%$로 기관지 천식환자와 다른 군간에 의미있는 차이는 없었다(p=0.49, p=0.75). CD62L(L-selectin) 양성 T 림프구의 세포 백분율은 기관지천식환자(n=7) 에서 $24.8{\pm}23.6%$였고, 만성기관지염환자(n=5) $17.0{\pm}16.9%$, 정상인(n=5) $16.7{\pm}16.4%$으로 기관지천식환자와 다른 군간에 의미있는 차이는 없었다(p=0.32, p=0.22). 혈청 IL-4 의 활성도는 기관지천식환자에서 $3.6{\pm}0.9pg/ml$ 만성기관지염 환자 $2.0{\pm}1.2pg/ml$, 정상인에서 $0.7{\pm}1.1pg/ml$로 기관지 천식환자에서 만성기관지염 환자군에 비하여 증가되어 있었으며 (p=0.02) 정상인보다 증가되어 있었다(p=0.006)(Fig. 4). 혈청 INF-$\gamma$의 활성도는 증가되지 않았다. 결 론: 결론적으로 CD62L 양성 T 림프구의 세포 백분율은 기관지천식환자에서 증가되어 있지 않았으며 혈청 IL-4의 활성도는 기관지천식환자에서 증가되어 있었다.
본 연구에서는 아토피 피부염 동물 모델에 대한 ${\beta}$-1,3/1,6-glucan과 L. plantarum LM1004의 면역조절 효과를 확인하고자 하였다. 가려움증의 횟수와 유출된 evans blue, 그리고 혈청 IgE와 histamine의 농도는 ${\beta}$-1,3/1,6-glucan과 L. plantarum LM1004를 섭취한 그룹에서 아토피 피부염 유발그룹에 비해 유의적으로 감소하는 결과를 나타내었다. 아토피 피부염이 유발되면 전사 수준에서 Th2 및 Th17 세포의 전사인자 및 cytokine은 과발현되며, ${\beta}$-1,3/1,6-glucan과 L. plantarum LM1004를 섭취하였을 때 이를 유의적으로 감소되었다. 또한 ${\beta}$-1,3/1,6-glucan과 L. plantarum LM1004는 Th1 및 Treg 세포의 전사인자(T-bet, GATA-3, $ROR{\gamma}T$, Foxp3) 및 cytokine (INF-${\gamma}$, IL-4, IL-17, TGF-${\beta}$)의 발현을 증가시킴으로써 면역 균형을 조절하는 것으로 나타났다. Galectin-9과 filaggrin은 아토피피부염 유발 처리군에서 유의적으로 가장 낮았으며, ${\beta}$-1,3/1,6-glucan 처리군에서 유의적으로 가장 높게 나타났다. 이와 반대로 TSLP는 아토피 피부염 유발그룹에서 유의적으로 가장 높았으며 ${\beta}$-1,3/1,6-glucan과 L. plantarum LM1004를 섭취한 그룹은 대조군과 유사한 수준이었다. 이러한 결과를 통해 ${\beta}$-1,3/1,6-glucan과 L. plantarum LM1004는 아토피 피부염 동물 모델에서 면역조절 작용 및 아토피 피부염의 개선 효과를 가짐을 알 수 있었다. 따라서 ${\beta}$-1,3/1,6-glucan과 L. plantarum LM1004는 아토피 피부염에 유용한 천연소재로서 사용될 것으로 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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