Hyaluronic acid (HA) microbeads were synthesized by dropping 0.5 wt% of sodium hyaluronate dissolved in NaOH into 0.2 vol% of divinyl sulfone dissolved in 2-methyl-1propanol at a speed of 0.005 ml/min. HA microbeads were collected from a divinyl sulfone crosslinker solution stirred at 200 to 400 rpm for 5 h at temperatures from room temperature to $60^{\circ}C$ at intervals of $10^{\circ}C$. The crosslinked microbeads were then cleaned thoroughly using distilled water and ethanol. SEM results revealed that the microbeads were white-colored spheres. The 3-D porous network structure of the microbeads became dense with an increase in the crosslinking temperature; however, no dependence of the crosslinking temperature on the microbead size was detected. The extent of swelling decreased from 970% to 670% with an increase in the crosslinking temperature from room temperature to $60^{\circ}C$, most likely due to the increase in the degree of crosslinking.
Although several suspension biomaterials have been considered to be relatively safe and convenient, varying degrees of resorption have required repeated percutaneous injection. In the previous animal study the authors have reported that cultured human fibroblasts suspended in $Restylane^{(R)}$, which is modified hyaluronic acid, could produce human dermal matrices and prolong the effect of this gel. This study was undertaken to evaluate the clinical efficacy of this method. A total of 11 patients ranging from 25 to 57 years of age were included in this study between January of 2002 and December of 2003. All the patients were treated for the purpose of augmentation rhinoplasty. $1{\times}10^7/ml$ or $1.5{\times}10^7/ml$ cultured fibroblasts were suspended in 0.7 to 1.4 ml of $Restylane^{(R)}$. The implants were transferred to a 1-ml syringe and injected subcutaneously to the nose of the patients. Among 11 patients, long term follow-up for more than 1 year was possible in 6 patients. The injected implants remained in site without evidence of resorption or loss of correction. All the patients were satisfied with long term results of this method. There was no complication during the follow-up period.
Numerous efforts are being made to develop an ideal dermal filler that should be bio-compatibility, non-immunogenicity, long-lasting and biodegradable without a toxic secretion. Biomaterials of dermal fillers are hyaluronic acid filler, calcium filler, PMMA filler and collagen filler depending on the ingredient. Although hyaluronic acid (HA) is most widely used, it has shortages such as short shelf life and low mechanical strength compare to extracellular matrix (ECM). The cartilage ECM composed of collagen type II, proteoglycans, glycosaminoglycans (GAGs) and in a minor part with glycoproteins. In this study, we developed a cartilage ECM injectable filler capable of improving biocompatibility and longevity compared with hyaluronic acid (HA) fillers. The ECM hydrogel was cross-linked by the reaction of N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC)/N-hydroxysuccinimide (NHS) for mechanical enhancement. Prepared ECM filler was compared with cross-linked HA by butanediol diglycidyle ether (BDDE), which is the most widely used natural polymers for dermal filler. In the results, the articular cartilage ECM hydrogel has great potential as a dermal filler to improve the biophysical and biological performance.
Objective: Density gradient centrifugation (DGC) is frequently used to isolate high-motility fractions of spermatozoa. We compared the efficacy of four DGC media in terms of the percentage of morphologically normal spermatozoa, DNA fragmentation level, and hyaluronic acid (HA) binding ability. Methods: Thirty men with a total motile spermatozoa count > 80 million participated. Semen samples were divided into four aliquots, which were processed using PureSperm, PureCeption, Sidney, and SpermGrad media, respectively. The DNA fragmentation level was measured using the Halosperm assay kit and HA binding ability was measured using the HBA assay kit. Results: The mean percentage of morphologically normal spermatozoa was significantly enhanced after DGC using all four media (10.3%, 9.9%, 9.8%, and 10.7%, respectively; p< 0.05 for each when compared with 6.9% in raw semen). The DNA fragmentation level was significantly reduced after DGC using PureSperm, PureCeption, and SpermGrad media (6.0%, 6.5%, and 4.9%, respectively; p< 0.05 for each when compared with 11.2% in raw semen), but not after DGC using Sidney media (8.5%, p> 0.05). HA binding ability did not change after DGC using any of the four media. Conclusion: The four media were equally effective for obtaining a sperm fraction with highly motile, morphologically normal sperm. PureSperm, PureCeption, and SpermGrad media were equally effective for acquiring a sperm fraction with less DNA fragmentation.
Background and objective: Aronia melanocarpa, called black chokeberry, is a natural product belonging to the family rosaceae, and is known to contain polyphenolic antioxidants including cyanidin-3-galactoside, cyanidin-3-arabinoside, cyanidin-3-xyloside, and cyanidin-3-glucoside Because of the abundance of anthocyanins, Aronia has been studied to be used in various industries. Methods: Aronia melanocarpa extract was treated 24 hours a day to RAW 264.7 cells with inflammations induced by LPS. After extracting total RNA, the amount of inflammatory cytokine expression was measured using RT-PCR. After processing the Aronia liposome using Aronia extract and the layer-by-layer electrostatic deposition method in keratinocyte cells at the same time, we checked the synthesis of Hyaluronic acid enhanced through the formation of Aronia liposome using ELISA. Results: The treatment of Aronia extract in inflammation-induced RAW 264.7 cells conducted to check the anti-inflammatory efficacy of Aronia extract inhibited inflammatory cytokines including TLR4, TNF-α, IL-1β, COX-2, and iNOS and increased the mRNA expression of HAS2 genes related to moisturizing. Based on the anti-inflammatory and moisturizing effect of Aronia extract, the Aronia liposome technology was introduced to Aronia extract to produce Aronia liposome. Conclusion: The liposome formation of Aronia extract is expected to be used as a functional material in treating various inflammatory skin diseases by controlling the moisture content of the corneocytes by increasing the expression rate of genes associated with the synthesis of hyaluronic acid, while retaining the efficacy of its components.
Soft tissue filler injection is the second most common nonsurgical cosmetic procedure. Despite the safety of fillers, as use has grown, so has the number of patients affected by adverse events. Ophthalmoplegia following cosmetic filler injection is a rare complication, mostly occurring after injection to the glabella, nasolabial fold, periorbital, and lateral nasal site. In all cases where ophthalmoplegia has been reported following fillers, patients have simultaneously experienced vision loss and other ocular symptoms. We report a case of isolated acute ophthalmoplegia following hyaluronic acid injection solely in the temple region. A 40-year-old woman, 3 hours after the procedure, presented to our hospital with left eye ophthalmoplegia, ptosis, and hypotropia. Treatment started with hyaluronidase, steroids, and anticoagulants. After 4 weeks, left eye ophthalmoplegia remained unchanged, and through a 10-week follow-up, all left ocular movements improved, and only mild hypotropia and ptosis persisted. This case report shows that ophthalmoplegia may also happen with temple region filler injections. We also review available prevention techniques and treatments to avoid such complications when performing soft tissue fillers for gaunt appearance correction.
Hyaluronic acid(HA) is a naturally occurring mucopolysaccharide composed of the repeating disaccharide unit of D-glucuronic acid and N-acetyl-D-glucosamine. HA exists as a high molecular weight polymer in the extracellular matrix of many tissues in the body. HA has been widely used not only for osteoarthritis and ophthalmology but also for cosmetics for skin care. Recently HA has drawin much attention for use in health foods. Bioland Corporation started production of HA t1y biotechnological process in 1990 for cosmetical use. At present Bioland produces HA for cosmetic and food use. We have done many researches to evaluate the helpful effect for skin and safety of HA as food. In order to evaluate the effect of HA on the skin after its oral intake, we measured its bioavailability, skin-care effects on anti-wrinkle, moisturization elasticity and desquamation by clinical trial. The results showed that HA is very safe and could bs helpful to improve anti-wrinkling, moisturization, elasticity, and desquamation on the skin.
Hyaluronic acid (HA) is a natural polymer consisting of disaccharide units of D-glucuronic acid and N-acetyl-D-glucosamine. It has a great potential and success in cosmetic and biomedical applications. However, native HA is highly soluble and easily metabolized by enzymes such as hyaluronidase. Thus, various studies have been reported on modifying the physicochemical properties of HA, while maintaining its biocompatibility. For controlled drug delivery, many trials for fabricating HA microspheres were achieved under chemical reaction. The HA microspheres fabricated to improve the physical stability of HA using adipic acid dihydrazide (ADH) by cross-linking reaction has been reported earlier, however it lacks the desired physical stability and rapidly decomposes by swelling or enzymes. Therefore, we prepared double cross-linked HA microspheres (DC-HA microspheres) and alginate containing HA microspheres (AC-HA microspheres) to enhance its physicochemical properties. DC-HA microspheres were prepared using trisodium trimetaphosphate (STMP) under crosslinking reaction after ADH cross-linking reaction. AC-HA microspheres were prepared by adding alginate as a networking polymer. These microspheres were characterized by morphology, particle size, zeta potential, stability against hyaluronidase. Results showed that the DC-HA and AC-HA microspheres are more stable than that of HA microspheres.
Objective : Hyaluronidase (HAse), a degrading enzyme of hyaluronic acid (HA), is highly expressed in patients with malignant glioma. The purpose of this study was to verify whether HAse is related to the invasion of glioma cells. We also investigated if glioma cells with higher mobility in 2-dimensioal (2-D) method have also higher mobility at 3-dimensional (3-D) environment. Methods : Malignant glioma cell lines (U87MG, U251MG, U343MG-A, and U373MG) were used, and their HAse expressions were evaluated by HA zymography. The migration ability was evaluated by simple scratch technique. The invasiveness of each cell lines was evaluated by Matrigel invasion assay and HA hydrogel invasion assay. In HA hydrogel invasion assay, colonies larger than $150\;{\mu}m$ were regarded as positive ones and counted. Statistical analysis of migration ability and invasion properties of each cell lines was performed using t-test. Results : In scratch test to examine migration ability of each cell lines, U87MG cells were most motile than others, and U343MG-A least motile. The HAse was expressed in U251MG and U343MG-A cell lines. However, U87MG and U373MG cell lines did not express HAse activity. In Matrigel invasion assay, the cell lines expressing HAse (U251MG and U343MG-A) were more invasive in the presence of HA than HAse deficient cell lines (U87MG and U373MG). In HA hydrogel invasion assay, the HAse-expressing cell lines formed colonies more invasively than HAse-deficient ones. Conclusion : Malignant Glioma cells expressing HAse were more invasive than HAse-deficient ones in 3-dimensional environment. Therefore, it might be suggested that invasion of malignant gliomas is suppressed by inhibition of HAse expression or HA secretion. Additionally, the ability of 2-D migration and 3-D invasion might not be always coincident to each other in malignant glioma cells.
이온교환수지를 이용하여 말단기에 이중결합 생성이나 고리열림반응 없이 저분자 히알루론산(oligo HA)을 제조하였다. 제조된 oligo HA의 화장품소재로서의 활용 가능성 및 그 효능을 평가하기 위하여 fibroblast, keratinocyte 및 SIRC cell을 이용하여 독성을 평가하였고, Caco-2 cell과 인공피부를 이용하여 피부 투과도를 평가하였다. Oligo HA는 fibroblast와 keratinocyte cell에서 각각 300 ${\mu}g/mL$ 및 1,000 ${\mu}g/mL$까지의 농도에서 독성이 없었으며 in vitro ocular test에서도 2,000 ${\mu}g/mL$의 높은 농도에서까지 자극에 의한 세포독성이 관찰되지 않았다. Caco-2 cell을 이용한 세포 투과실험에서는 HA는 거의 투과되지 않는 것에 비해 oligo HA은 16.0 %까지 투과되었고, 인공피부를 이용한 세포투과 실험에서도 약 90 %의 상당히 높은 투과도를 보였다. 사람 피부에서 보습효과를 확인하기 위하여 oligo HA를 함유한 제형을 피부에 도포한 후 피부 수분량과 경피수분 손실량을 측정한 결과 HA와 비슷하게 우수한 보습 효과를 확인할 수 있었다. 인체 피부 누적 첩포 실험 결과, 특별한 피부 자극이 확인되지 않았다. Oligo HA는 HA의 우수한 보습력을 유지하면서 높은 피부 투과도를 갖는 보습소재로써 화장품에 유용하게 활용될 수 있음을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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