We have used cDNA microarray hybridization to identify gene regulated in response to gamma-irradiation in U-937 cell. The cDNA-chip was composed entirely of 1,000 human cancer related gene including apoptosis and angiogenesis etc. In gamma-irradiated U-937 cell, highly charged protein, ribosomal protein L32, four and a half LIM domains 3, lipocalin 2 (oncogene 24p3) and interleukin 15, ataxia telangiectasia mutated (includes complementation groups A, C and D) genes showed increased level of its transcription, and cell division cycle 25A, dihydrofolate reductase, topoisomerase (DNA) II beta(180kD), kinase suppressor of ras and strarigin genes showed reduced level of its transcription compared to untreated U-937 cell. The significant change of level of transcription was not found in well-known ionizing radiation(IR)-responsive gene, such as transcription factor TP53 and p53 related gene, except ataxia telangiectasia mutated gene.
Kim, Heui-Soo;Choi, Joo-Young;Lee, Joo-Mi;Jeon, Seung-Heui;Lee, Young-Choon;Lee, Won-Ho;Jang, Kyung-Lib
Journal of Life Science
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제10권2호
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pp.45-49
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2000
Long terminal repeat (LTR) of human endogenous retrovirus K family (HERV-K) has been found to be coexpressed with sequences of closely located genes. We examined the transcribed HERV-K LTR elements in human liver and kidney tissues. Using the cDNA synthesized from mRNA of human liver and kidney, we performed PCR amplification and identified six HERV-K LTR elements. Those LTR elements showed a high degree of sequence similarity (93.3∼96.6%) with human-specific LTR. A phylogenetic tree obtained by the neighbor-joining method revealed that HERV-K LTR elements (Liv-1, 2, 3 and Kid-1, 2, 3) were belonged to group I. Our data suggests that HERV-K LTR elements are active on human liver and kidney tissues and may represent a source of genetic variation connected to human disease.
인체 암세포계(MG-63 골육암 세포, HT-29 인체 결장암세포, K-562 백혈암세포)를 이용하여 느릅나무 근피 메탄올 추출물, 열탕 추출물 및 즙액에 의한 암세포 성장에 미치는 효과를 검토하였다. 느릅나무 근피 메탄올 추출물, 열탕 추출물 및 즙액은 낮은 농도에서부터 인체 골육암 세포의 증식을 억제시켰다. 인체 결장암세포와 백혈암세포에서도 느릅나무 근피 메탄올 추출물, 열탕 추출물 및 즙액은 낮은 농도인 1 mg/ml에서부터 활성을 나타내어 40% 이상으로 암세포 증식 억제효과를 나타내어 앞서의 MG-63 골육암 세포에서 보다 그 증식 억제효과가 높은 것으로 나타났다. 느릅나무 근피 메탄올 추출물, 열탕 추출물 및 즙액을 골육암과 결장암세포에 투여한 2일 후에 세포내의 DNA 합성에 미치는 영향을 측정한 결과, 농도 의존적으로 암세포의 DNA 합성을 저해하는 것을 살펴 볼 수가 있었다. 따라서 느릅나무 근피 추출물은 인체 암세포 증식을 크게 억제하였으며 열탕 추출물에서도 항암활성 효과를 보여 느릅나무 근피 유래 생리활성 물질은 열에 안정한 것으로 여겨진다.
Park, Jong-Hwa;Back, Jung-Ho;Hahm, Soo-Hyun;Shim, Hye-Young;Park, Min-Ju;Ko, Sung-Il;Han, Ye-Sun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제17권10호
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pp.1607-1615
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2007
We investigated the applicability of the TEM-l ${\beta}$-lactamase fragment complementation (BFC) system to develop a strategy for the screening of protein-protein interactions in bacteria. A BFC system containing a human Fas-associated death domain (hFADD) and human Fas death domain (hFasDD) was generated. The hFADD-hFasDD interaction was verified by cell survivability in ampicillin-containing medium and the colorimetric change of nitrocefin. It was also confirmed by His pull-down assay using cell lysates obtained in selection steps. A coiled-coil helix coiled-coil domain-containing protein 5 (CHCH5) was identified as an interacting protein of human uracil DNA glycosylase (hUNG) from the bacterial BFC cDNA library strategy. The interaction between hUNG and CHCH5 was further confirmed with immunoprecipitation using a mammalian expression system. CHCH5 enhanced the DNA glycosylase activity of hUNG to remove uracil from DNA duplexes containing a U/G mismatch pair. These results suggest that the bacterial BFC cDNA library strategy can be effectively used to identify interacting protein pairs.
Han Jun Jin;Jeon Won Choi;Dong Jik Shin;Jung Min Kim;Wook Kim
Animal cells and systems
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제3권4호
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pp.393-397
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1999
Length variations in human mitochondrial DNA (mtDNA) offer useful markers in the study of female aspects of human population history. One such length variation is a 9-bp deletion in the small noncoding segment located between the COII and Iysine tRNA genes (COII/tRNA/$^{Lys}$ intergenic region) which usually contain two tandemly arranged copies of a 9-bp sequence (ccccctcta) in human mtDNA. The mtDNA 9-bp deletion and polymorphic variants of expanded 9-bp repeat motif in the intergenic COII/tRNA$^{Lys}$ region have been found at varying frequencies among different human ethnic groups. We have examined the length variation of the mtDNA COII/tRNA$^{Lys}$ intergenic region from a total of 813 individuals in east Asian populations. The occurrence of the 9-bp deletion was found to be relatively homogeneous in northeast Asian populations (Chinese, 14.2%; Japanese, 14.3%: Koreans, 15.5%), with the exception of Mongolians (5.1%). In contrast, Indonesians (25.0%) and Vietnamese (23.2%) of the southeast Asian populations appeared to have relatively high frequencies of the 9-bp deletion. We identified the existence of a new expanded 9-bp repeat motif which likely resulted from a slipped mispairing insertion of six more cytosines in the intergenic COII$^{Lys}$ region. It was present at low frequencies in the Korean (2/349) and Japanese populations (2/147). Based on the results of this study, the Korean population may reflect a close genetic affinity with the Japanese and Chinese populations than the others surveyed east Asian populations.
The alkaline single-cell gel electrophoresis (SCGE) assay, called the comet assay, has been applied to detect DNA damage induced by a number of chemicals and biological factors in vivo and in vitro. The DNA damage was analysed by tail moment (TM) and tail length (TL), which were markers of DNA strand breaks in SCGE. Human, mouse and rat peripheral blood lymphocytes (PBLs) were irradiated with different doses of $^{60}Co$${\gamma}$-rays, e.g. 1, 2, 4, and 8 Gy at a dose rate of 1 Gy/min. A dose-dependent increase in TM (p<0.01) and TL (p<0.01) was obtained at all the radiation doses (1-8 Gy) in human, mouse and rat PBLs. Mouse PBLs were more sensitive than human PBLs which were in turn more sensitive than rat PBLs when the treated dosages were 1 and 2 Gy. However, human PBLs were more sensitive than mouse PBLs which were in turn more sensitive than rat PBLs when the irradiation dosages were 4 and 8 Gy. Data from all three species could be fitted to a linear-quadratic model. These results indicated that there may be inherent differences in the radio-sensitivity among PBLs of mammalian species.
본 연구는 된장 메탄올 추출물의 항암효과를 검토하기 위해서 다른 콩 관련 발효식품과 원재료인 콩과 밀가루의 메탄올추출물과 비교하면서 여러 인체 암세포들의 성장 억제 실험과DNA 합성 저해 실험을 행하였다. AGS 인체 위암세포의 경우 첨가농도 200 $\mu\textrm{g}$/mL에서 콩된장과 70% 콩된장 메탄올 추출물은 각각 80%, 78%의 저해효과를 가졌으며 청국장 메탄올 추출물은 65%, 일본의 미소 메탄올 추출물은 54%의 저해효과를 보였다. Hep 3B 인체 간암세포에 대한 증식억제 효과 결과에서도 콩된장과 70% 콩된장의 경우, 첨가농도 200 $\mu\textrm{g}$/mL에서 각각 77%, 73%의 저해효과를 가지는 반면, 청국장, 일본의 미소는 각각 60%, 56%의 억제효과를 보였고 콩과 콩/밀가루의 경우 각각 56%, 40%의 저해효과를 나타내었다. HT-29 인체 대장암세포에서도 이상의 간암, 위암세포의 결과와 유사하게 증식억제효과를 보여 콩된장과 70% 된장 메탄올 추출물이 각각 86%, 87%의 저해효과를 나타내면서 다른 콩관련 발효식품들과 원재료 콩에 비해 큰 활성을 보였다. 또한 DNA 합성 저해 실험에서 AGS 인체 위암세포는 된장 메탄올 추출물 100 $\mu\textrm{g}$/mL, 200 $\mu\textrm{g}$/mL 투여시에는 각각 65%, 76%의 DNA 합성 저해 효과가 관찰되었고, 반면 콩의 메탄올 추출물의 경우 첨가농도 100 $\mu$/mL, 200 $\mu$/mL 때 각각 47%, 68%의 DNA 합성 저해 효과를 가졌으며 된장의 경우보다 낮은 저해 효과를 나타내었다. Hep 3B 인체 간암세포는 된장 메탄올 추출물 100 $\mu\textrm{g}$/mL, 200 $\mu\textrm{g}$/mL 투여시 각각 43%, 59%의 DNA합성 저해 효과를 나타내었다. 이상의 연구 결과들로부터 된장이 다른 콩 발효식품 및 원재료 콩보다 높은 암세포 성장 억제 효과와 DNA 합성 저해 효과를 가지는 것은 콩만으로 3개월 간 발효시킨 된장의 우수성과 함께 발효과정을 거치는 동안 원재료인 콩에서는 없었던 혹은 함량이 적은 성분들이 생성되거나 증가되어 항암효과를 나타내는 것으로 추정되어진다.
The Z-DNA domain of human ADAR1 ($Z{\alpha}_{ADAR1}$) produces B-Z junction DNA through preferential binding to the CG-repeat segment and destabilizing the neighboring AT-rich region. However, this study could not answer the question of how many base-pairs in AT-rich region are destabilized by binding of $Z{\alpha}_{ADAR1}$. Thus, we have performed NMR experiments of $Z{\alpha}_{ADAR1}$ to the longer DNA duplex containing an 8-base-paired (8-bp) CG-repeat segment and a 12-bp AT-rich region. This study revealed that $Z{\alpha}_{ADAR1}$ preferentially binds to the CG-repeat segment rather than AT-rich region in a long DNA and then destabilizes at least 6 base-pairs in the neighboring AT-rich region for efficient B-Z transition of the CG-repeat segment.
High iron consumption is associated with an increased risk of cancer possibly via production of reactive oxygen species (ROS) which in turn induces oxidative damage to lipids, proteins and DNA. The aim of the study was to determine whether Fe-NT A causes DNA damage and targets TP 53 in human peripheral lymphocytes. (omitted)
In this presentation, we will discuss several recent achievements developed in my laboratory for microarray-based diagnosis of human genetic mutations including HNF-1 and BRCA1 mutations. To determine the presence of the genetic mutations in a human sample, we prepared allele-specific oligonucleotide chips from selected mutation sites and generated target probes using a tow-step method for Cy-3 DNA $samples^{1)}$ or in vitro transcription of promoter-tagged PCR products for Cy-3 RNA $samples^{2)}$. Hybridization of the target probes to the chips successfully identified all of the genotypes for the tested sites. For more reliable diagnosis, we also employed single base extension (SBE) reaction and zip-code microarray technique for our strategy. Particularly we developed an efficient PNA zip-code microarray for the detection of $HNF-1{\alpha}$$mutations^{3)}$. Using multiplex SBE reactions and zip-code strategy, we were able to correctly diagnose several mutation sites in exon 2 of $HNF-1{\alpha}$ with a wild-type and mutant including a MODY3 patient. These works represent successful applications of DNA microarray technology for the diagnosis of human genetic mutations.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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