The bacteriophages lytic for Vibrio furnissi, Vibrio furniulis and Vibrio parahemolyticus were isolated from fish gills and shellfish. Nucleic acid of bacteriophage was prepared and restriction endonuclease profile was compared. All isolates contained deoxyribonucleic acid. V. fumissi bacteriophage from fish gills showed 2 bands with Bgl II, 1 with Pst, 3 with Hind III, 1 with Bm HI and 2 with EcoR I. V Puuialis phage represented 7 fragments with Bgl II, 1 with Pst, 4 with Hind III, and 2 with EcoR I. V parhemolyticn produced 13 sites with Hind III and 4 sites with EcoR I. The fragment types were varied depending on the phage isolation. All three phages were digested with Hind III and EcoR I with different sizes. V furnissi phage were digested with 5 different restriction enzymes. Key words: Bacteriophage, Vibrio furnissi, Vibrio fluvialis, Vibrio pnrahemolyticus, Deoxyribonucleic acid, Pst, Bam HI, Hind III, EcoR I, Bgl II.
Environmental Sciences Bulletin of The Korean Environmental Sciences Society
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v.1
no.2
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pp.99-103
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1997
The bacteriophages lytic for Vibrio furnissi, Vibrio fluvialis and Vibrio parahaemolyticus were isolated from fish gills and shellfish. Nucleic acid of bacteriophages was prepared and restriction endonuclease profile was compared. All isolates contained deoxyribonucleic acid. V. furnissi bacteriophage from fish gills showed 2 bands with Bgl II, 1 with Pst, 3 with Hind III, I with Bam HI and 2 with EcoR 1. V fluvialis phage represented 7 fragments with Bgl II, 1 with Pst, 4 with Hind III, and 2 with EcoR 1. V. parahamolyticus produced 13 sites with Hind III and 4 sites with EcoR 1. The fragment types were varied depending on the phage isolation. All three phages were digested with Hind III and EcoR I with different sizes. V. furnissi phage were digested with 5 different restriction enzymes.
To develop DNA markers for analysis of genetic characteristics of Phytophthora capsici population, randomly selected clones from HindIII-digested genomic DNA library of P. capsici 95CY3119 were surveyed by hybridizing to Southern blots of HindIII-digested total genomic DNA of P. capsici. Probe DNAs inserted into selected individual clones strongly hybridized with HindIII digests of P. capsici. Among probes examined, PC9 revealed the repetitive and highly polymorphic bands to HindIII digests of inter-and intra-field P. capsici isolates. Genetic diversity of individual isolates was also clearly revealed in cluster analysis based on its band patterns. The other probe, PC22, was hybridized only to DNA from P. capsici and this was highly repetitive. However, there was no response to other Phytophthora species and Pythium sp. These DNA probes could be used as very useful markers in analysing genetic diversity and identification for P. capsici population throughout the world.
The penicillin G acylase(pga) gene was cloned in the vector plasmid pKM $300(Ar^r,\;Tc^r,\;6.33kb)$ for the study of the structure and expression of the pga gene. This recombinant plasmid pPAKS-1 DNA(24.5 Kb) was cleaved into 2 fragments by restriction enzyme Eco R1.1fragment by BamH1, 4fragments by Hind III, and 2 fragments by Pst I. The pga gene was located on the Eco R1.Hind III-C fragement of pPAKS-1. The recombinant plasmids pPAKS-1 and pPAKS-2, in which the Hind III-B and Hind III-D fragments pPAKS-1 are deleted, are characterized. The results are summarized as follows : 1. Doubling times of bacterial strain bearing pPAKS-1 and pPAKS-2 are 90 and 60 minutes, respectively. 2. pPAKS-1 and pPAKS-2 are present at about 16-32 and 70 copies per cell, respectively, are 0.66 and 5.5 units, respectively, which represent 2-fold and 20-fold higher enzyme 4. pPAKS-1 is very unstable, but pPAKS-2 is stable.
Ti plasmids were isolated from three strains of Agrobacterium tumefaciens in Korea and their types and molecular weights were determined. All of these are octopine-type and their molecular weights are 44Kb (pTi 12), 180Kb (pTi 14) and 172Kb (pti 49), respectively. In order to construct physical map of pTi 12, pTi 12 was digested with restriction endonucleases Sma I and Hind III. Sma I degestion of pTi 12 produce 8 fragments and Hind III produced 10 fragments. Physical arrangements of these fragments was determined by Southern hybridization techniques.
Bacillus thuringiensis serovar israelensis 4Q1 contains 8 different covalently closed-circular (CCC) plasmids of molecular weight 204, 267, 109, 103, 16, 7.6, 6.4, and 5.0kb. The three smallest plasmids, designated pBti6, and pBti8 may prove to be useful as cloning vectors because of thier size and ease of isolation. The three plasmids were incubated separately with 9 different restriction enzymes and 7 of the enzymes tested cleaved one or more of the plasmids. Plasmid pBti6 has a single site for Bg1 II, Pst I and Pvu II, two sites for Bc1 I and Eco RI, and five sites for Hind III. Plasmid pBti7 has a single site for Bam HI and Pst I, two sites for Hind III, and three sites for PvuII. Plasmic pBti8 has a single site for Bam HI, BelI and Hind III, two sites for Eco RI, and three sites for Bgl II and Pvu II. Composite restriction enzyme maps for pBti6, pBti7 and pBti8 were constructed. The sites of restriction enzyme cleavage were determined by single, double and partial digests of the plasmid DNA. All the restriction sites were aligned relative to the single Bgl II(pBti6), Pst I(pBti7) or Hind III(pBti8) site, respectively.
To investigate the relationship between two tetracycline resistance ($Tc^r$) plasmids, the 24.82-kb pKHl and the 4.44-kb pKH6, of Staphylococcus aureus isolated in Korea, cloning of the 4570-bp HindIII fragment into pBluescript II $KS^+$ after partial digestion of the $Tc^r$ plasmid pKHl with HindIII and sequence determination of that fragment were carried out. Analysis of the sequences revealed that the 4570-bp HindIII fragment contained a 4011-bp fragment of the small $Tc^r$ plasmid pKH6 flanked by the partial sequences of IS431mec. It was concluded from the above result that the pKHl was produced by integration of the partial sequence of the pKH6 into another plasmid via IS431mec.
Ten Listeria monocytogenes were isolated from clinical specimens and mussels, and their physio-biochemical characters were compared with the type strains. Ribotyping was used as a taxonomic tool to determine molecular epidemiological marker. Chromosomal DNA was cleaved with restriction enzymes HindIII and EcoRI. The fragment were subjected to Southern blot hybridization with 165 rDNA from B. subtilis by PCR. EcoRI patterns of Listeria strains showed 6 to 8 bands ranging from 0.75 kb to 11 kb band and they were classified into 6 groups. In comparison, HindIII patterns revealed that 5 to 7 bands ranging from 2.75 kb to 7.75 kb band and they classified into 5 groups. The various patterns of Listeria strains were observed within genus, species and isolated sources. 165 rRNA gene restriction patterns (ribotyping) are useful in epidemiological and taxonomic study.
A bacterium KL-57 which exhibited biosurfactant activity was isolated. This bacterium was identified as Bacillus subtilis. The biosurfactant-producing gene of B. subtilis KL-57 was cloned into R subtilis MI113 by using plasmid pTB523. The plasmid DNA from the clone was found to carry a 18 kb PstI insert. The biosurfactant-producing gene was cleaved into 4 fragments by SmaI, 3 fragments by PvulI or EcoRl, 4 fragments by PvulI and EcoRI double digestion, 5 fragments by AccI, and 2 fragments by KpnI, HindIII or BamHI. By subcloning the 18 kb Pstl insert, a 2.3 kb EcoRl fragment conferred the biosurfactant producing activity on B. subtilis cells. The 2.3 kb had one HindIII cleave site. But Two fragments, which corresponds HindIII/EcoRl termini, exhibited no biosurfactant activity.
A genetic map of the IncP-1 group plasmid pKU10 has been prepared through the construction of recombinant plasmids containing various fragments of pKU10. Phenotypic analysis of these derivatives has identified the location of genes encoding resistance to ampicillin, tetracyclin, and chloramphenicol. The region involved in conferring resistance to ampicillin was located around two PstI sites that are 1.0Kb apart. The tetracyclin resistance gene was mapped on the region of HindIII E fragment and a part of HindIII D fragment, and the determinant for chloramphenicol resistance gene was localized on HindIII D fragment.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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