멸종위기 천연기념물 어류 어름치(Hemibarbus mylodon)를 대상으로한 어름치 유전자 은행 구축 연구의 일환으로 뇌, 소화관, 근육, 간, 신장, 난소 및 정소 조직으로부터 expressed sequence tag (EST) library들을 구축하고 발현 유전자의 탐색을 실시하였다. EST 탐색을 통해 총 3,383개의 발현 유전자 염기서열 단편을 확보하였고 이들로부터 1,354개의 EST를 포함하는 총 333개의 contig들이 형성됨으로써 비교적 높은 빈도(69.8%)의 unigene 확보율을 나타내었다. EST의 조직 별 출현 양상은 orthologue들과의 상동성 정도 및 유추 기능의 대분류를 기준으로 분석할 때 각 조직들은 서로 다른 특징을 나타내었다. 어름치에서 발굴된 EST들은 zebrafish의 유전자들과 가장 높은 match 빈도를 나타내었다. 본 연구를 통해 확보된 EST library들과 염기서열 정보는 본 종의 장외 복원을 위한 효율적인 인공증식 기술 개발에 유용한 기초 정보로 활용될 수 있을 것이다.
The metacercariae species have often been isolated from fresh water fish in Korea. In this study, we reported Clinostomum complanatum, a species of metacercariae isolated from gill and muscle of Korean barbel (Hemibarbus mylodon), a natural monument fresh water fish in Korea, by morphological observation. The excysted metacercariae, tongue-shaped and progenetic, were 3.11-4.62 mm in length and 0.90-1.43 mm in width. Fresh water fishes are known as the second intermediate hosts of C. complanatum. This is the first isolation report from Korean barbel.
한국 고유종이며 멸종위기에 처해 있는 어름치 Hemibarbus mylodon 3집단 (북한강, 남한강, 임진강)의 유전적 다양성 및 집단의 유전적 구조를 분석하기 위하여 AFLP분석을 실시하였다. 총 15 primer 쌍을 이용한 3집단의 AFLP 분석에서 795개의 bands가 생성되었으며, 집단 내 다형 band의 출현 빈도는 3개 집단에서 북한강 11.9%, 남한강 11.1%, 임진강 13.4%로 유사하게 나타났고, 평균 유사도는 96.6%로 나타났다. 평균 이형 접합율(0.033-0.040)과 유전적 다양도(0.036-0.043)는 매우 낮은 값을 보였다. 3개의 집단의 Pairwise distance 및 pairwise fixation index 역시 매우 낮은 값을 나타내어 본 연구에서 분석한 어름치 3개 집단은 유전적으로 매우 밀접한 근연관계를 나타내었다. 이러한 결과는 추후 본 종의 복원 및 관리에 필요한 기초자료로 활용될 수 있을 것이다.
한국산 누치속(genus Hemibarbus) 어류 3종에 대한 세포유전학적 특성을 구령하기 일해 적혈구 세포 크기, 세포당 DNA 함량 및 염색체 핵형을 분석하였다. 누치 H. labeo, 참마자 H. longirostris 및 어름치 H. mylodon의 적혈구 크기를 비교한 결과, 적혈구 세포 장경, 세포 표면적 및 세포 체적에서 어름치가 다른 2종보다 크게 나타났다(P<0.05). 그러나 DNA 함량은 적혈구 세포 크기와 다른 경향을 보여 2.33-2.51 범위로 3종간에 유의적인 차이를 보이지는 않았다(P>0.05). 누치속 어류 3종의 염색체 수는 모두 2n=50개로 나타났으나 핵형에 있어서는 종별로 서로 달라 누치 16M+16SM+18T,A (Fundamental number: NF, 82), 참마자 18M+16SM+16T,A (NF, 84) 그리고 어름치가 18M+24SM+8T,A (NF, 92)로 나타나 3종은 핵형에서 뚜렷한 차이를 보였다.
Transcriptional modulation of metallothionein (MT) during acute metal exposures (cadmium, copper or zinc) was examined in fry of Hemibarbus mylodon, a threatened fish species in Korean peninsula. Viability of H. mylodon fry was most affected by copper exposure (up to 79% of mortality at 1 ppm for 48 hours) and considerably by cadmium exposure (21 to 54% of mortality). On the other hand, Zn showed the least adverse effect on the viability (0 to 13% of mortality) of this species. Based on the semi-quantitative RT-PCR analysis, the stimulation of MT mRNA in response to metal exposures followed generally in a dose-dependent fashion where cadmium was the most potent inducer for the induction of MT transcripts in fry (up to more than 5-fold) while the lowest response was observed in zinc-exposed group (2-fold at maximum). From the exposure using environmentally realistic doses of cadmium (0 to 0.05 ppm for 24 hours), MT expression at mRNA level was also sensitively modulated toward upregulation up to more than 3-fold as relative to non-exposed control. Results from the present study would be a good basis for understanding the adaptive capacity and stress physiology of this endangered fish species during metal pollution.
The Korean doty barbel Hemibarbus mylodon (Cypriniformes; Cyprinidae) is a critically endangered freshwater fish species mainly because of its natural habitat degradation. Three full-length complementary DNA (cDNA) clones representing different muscle actin isoforms were isolated and characterized. The three muscle actin isoforms were 1,294-1,601 bp long with the identical open reading frames of 1,134 bp with the deduced amino acid residues of 377. They showed 83.9-87.2% identities in the coding nucleotide level and 96.8-98.1% identities in the amino acid level. Phylogenetic analysis with the coding nucleotide sequences revealed that three muscle actin isoforms of H. mylodon formed strongly supported monophyletic groups with one of cypriniform skeletal $\alpha$-actin (acta1), cypriniform aortic $\alpha$-actins (acta2), and uncharacterized Danio rerio muscle actin isoform/Salmo trutta slow muscle actin (a novel muscle actin type). Our phylogenetic tree further suggested that cypriniform acta2 only showed the orthologous relationship to tetrapod acta2. Other multiple actin isoforms from diverse teleostean taxa were however clustered to no tetrapod orthologs, i.e., acta1, cardiac $\alpha$-actins (aetc1), acta2, and enteric $\gamma$-actin (actg2). This result strongly suggested that teleostean muscle actins have experienced different and complicated evolutionary history in comparison to mammalian counterparts.
천연기념물 어름치 Hemibarbus mylodon의 복원학적, 발생학적 특징을 밝히기 위하여 난 발생 및 초기생활사 연구를 실시하였다. 자연에서 친어를 채집한 후 실험실로 옮겨 사육하면서 약 15개월 후에 암 수의 인공 성숙에 성공하였다. 성숙한 암컷과 수컷은 Ovaprim (0.5 mL/kg)을 주사하여 산란을 유도하였고 건식법으로 인공수정시켰다. 산란된 성숙란(n=30)은 $2.21{\pm}0.06mm$이었으며, 접착성을 띤 불투명한 회색이었다. 수정란은 수온 $20{\pm}1^{\circ}C$에서 수정 후 78시간(50%)만에 부화하였으며, 부화 직후의 자어는 전장 $6.6{\pm}0.75mm$ (n=10)이었다. 부화 후 14일에 전장 $13.5{\pm}0.23mm$ (n=10)로 난황흡수가 완료되어 후기자어로 이행하였다. 부화 후 21일에는 전장 $14.8{\pm}0.45mm$ (n=10)로 모든 지느러미 기조가 정수가 되어 치어기로 이행하였다. 100일 후에 전장 $33.0{\pm}4.25mm$ (n=10)로 1쌍의 입수염이 나타나고 체측의 반문과 체형이 비교적 성어와 유사하였다. 본 연구에서 얻어진 사육 기술 및 초기생활사 특징은 어름치의 보전생물학적 측면에 도움이 될 것으로 사료되었다.
Gene structure of copper/zinc-superoxide dismutase (Cu/Zn-SOD; sod1) was characterized in Hemibarbus mylodon (Teleostei; Cypriniformes), an endangered freshwater fish species in Korean peninsula. Full-length cDNA of H. mylodon SOD1 consisted of a 796-bp open reading frame sequence encoding 154 amino acids, and the deduced polypeptide sequence shared high sequence homology with other orthologs, particularly with regard to metal-coordinating ligands. Genomic structure of the H. mylodon sod1 gene (hmsod1; 1,911 bp from the ATG start codon to the stop codon) was typical quinquepartite (i.e., five exons interrupted by four introns); the lengths of the exons were similar among species belonging to various taxonomic positions. The molecular phylogeny inferred from sod1 genes in the teleost lineage was in accordance with the conventional taxonomic assumptions. 5'-flanking upstream region of hmsod1, obtained using the genome walking method, contained typical TATA and CAAT boxes. It also showed various transcription factor binding motifs that may be potentially involved in stress/immune response (e.g., sites for activating proteins or nuclear factor kappa B) or metabolism of xenobiotic compounds (e.g., xenobiotic response element; XRE). The hmsod1 transcripts were ubiquitously detected among tissues, with the liver and spleen showing the highest and lowest expression, respectively. An experimental challenge with Edwardsiella tarda revealed significant upregulation of the hmsod1 in kidney (4.3-fold) and spleen (3.1-fold), based on a real-time RT-PCR assay. Information on the molecular characteristics of this key antioxidant enzyme gene could be a useful basis for a biomarker-based assay to understand cellular stresses in this endangered fish species.
Hemibarbus mylodon (Cypriniformes) is an endemic freshwater fish species in the Korean peninsula, for which urgent conservation efforts are needed. To understand their stress responses in relation to metal toxicity and thermal elevation, we performed a real-time RT-PCR-based expression assay of hepatic copper/zinc-superoxide dismutase (Cu/Zn-SOD), a key antioxidant enzyme, in response to experimental heavy metal exposure or heat treatment. The transcription of hepatic Cu/Zn-SOD was differentially modulated by acute exposure to Cu, cadmium (Cd), or Zn. Exposure to each metal at $5{\mu}M$ for 24 h revealed that Cu stimulated the mRNA expression of Cu/Zn-SOD to a greater extent than the other two heavy metals. The elevation in Cu/Zn-SOD transcripts in response to Cu exposure was dose-dependent (0.5 to $5{\mu}M$). Time course analysis of Cu/Zn-SOD expression in response to Cd exposure ($5{\mu}M$) revealed a transient pattern up to day 7. Exposure to thermal stress (an increase from 22 to $30^{\circ}C$ at a rate of $1^{\circ}C/h$ followed by $30^{\circ}C$ for 18 h) did not significantly alter SOD transcription, although heat shock protein 90 kDa (HSP90) transcription was positively correlated with an increase in temperature.
본 연구는 평창의 남한강 지류 기화천에 출현하는 어류 군집 구조 및 Phoxinus phoxinus와 Rhynchocypris kumgangensis의 분포 특성을 파악하고자 2013년 3월부터 11월까지 조사하였다. 조사기간 동안 총 6과 19종의 어류가 출현하였으며, 개체수 및 생체량 우점종은 R. kumgangensis (Individuals 44.7%, Biomass 30.2%), 아우점종은 P. phoxinus (Individuals 27.7%, Biomass 15.9%)이었다. 고유종은 Pseudopungtungia tenuicorpus, Coreoleuciscus splendidus, Hemibarbus mylodon, Gobiobotia brevibarba, Microphysogobio longidorsalis, R. kumgangensis, Zacco koreanus, Korecobitis rotundicaudata, Iksookimis koreensis, Coreoperca herzi 등 10종이었고, 멸종위기종은 P. tenuicorpus, G. brevibarba, P. phoxinus 등 3종이었고, 천연기념물 Hemibarbus mylodon이 출현하였다. 양식용으로 국외에서 도입된 Onchorhynchus mykiss와 국내 이입종인 Oncorhynchus masou masou가 확인되었다. 우점종인 R. kumgangensis는 모든 조사지점에서 출현하였으며, St. 6을 제외하고 b값이 3.0 이상이고 K값의 기울기가 양의 상관성을 보였다. P. phoxinus는 조사지점 St. 3~St. 6에서 출현하였으며, St. 3과 St. 4에서만 안정적인 개체군 상태를 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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