큐티클 形成 및 硬化過程中 血蛋白質의 變化와 起源을 규명하고자 acrylamide gel electrophoresis와 immunodiffusion 方法을 使用하였다. Acrylamide gel electrophoresis에서 적어도 19개의 protein band가 혈림프에서 發見되었으며 脂肪體에서는 13개의 band가 確認되었는데 이들은 대체적으로 일정한 pattern을 유지하였다. 또한 혈림프와 脂肪體의 一般的인 protein band의 pattern은 $3\\sim4$개의 강하게 染色된 band와 몇 개의 가는 band가 gel의 상단에 存在하는 것이 특징이었고 적어도 5개 이상의 haemolymph protein band가 期初에 걸쳐 일정하게 나타났다. Immunodiffusion test에서는 $8\\sim9$개의 血蛋白質에 期初에서 나타났는데 그중 2개의 血蛋白質은 期前에 나타났으며 다른 두 血蛋白質도 化직 후 脂肪體에서 나타남으로써 脂肪體가 이들 血蛋白質의 起源임을 암시하였다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제14권1호
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pp.37-44
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2007
A study was made of the haemolymph protein spectrum of mulberry silkworm (Bomhyx mori L.) from the first larval instar to imago. Horizontal starch gel electrophoresis was used. Sixteen races and eight F1 interracial hybrids, raised in Bulgaria, were analyzed. During the ontogenesis, a total of 17 protein bands (15 cathodic and 2 anodic) were detected. Distinct dynamics in the haemolymph protein spectrum was observed, in result of different expression during the individual development associated with the processes of growth, histolysis and histogenesis. Based on the ontogenetic dynamics found, a correspondence was assumed between some proteins detected by us using the starch gel electrophoresis and major haemolymph proteins (SP1, SP2, MHPs and Vg) detected by other authors using the polyacrilamide gel electrophoresis. Intraracial and interracial polymorphism was observed in four protein zones. The effect of four polymorphic loci with codominant and null alleles was suggested.
누에의 卵形成時期동안 자성 혈림프에서 DEAE-cellullose column을 使用하여 vitellogenin을 순수하게 分離해 낸 후, 電氣泳動法과 免疫學的 方法을 使用하여 각 器官에 따른 vitellogenin의 分布와 이의 量的 變化를 調査하였다. 누에의 vitellogenin은 난성숙시기에 걸쳐 혈림프, 脂肪體 및 卵巢에 모두 分布하고 있으며, 특히 포화후 7일까지만 확인되었으며 그 이후 급격한 量的 減少를 나타내었으며, 또한 血蛋白質은 卵巢蛋白質과 最小한 3개의 同質인 蛋白質을 갖고 있는 것으로 보아 卵形成에 vitellogenin 이외의 다른 血蛋白質도 관여 되는 것 같다.
Changes in haemolymph proteins, hydrolases such as esterase(EST), acid phosphatase(ACP) and alkaline phosphatase(ALP) , and inorganic ion(Na+, K+ and Cl- ) contents were induced by the injection of Bacillus thuringiengis into haemocoel of the last instar larva of Heliothis assulta. Protein concentration of haemolymph was increased until 24 hrs after injection, and decreased thereafter. Among the 8 basic protein bands identified through acid - polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE), 2 bands(bands a and b) became stronger by the bacterial infection. Activities of EST and ALP increased until 12 hrs after injection and then fell down, whereas ACP activity was decreased continuously with time after injection. Contents of inorganic ions were all increased by the bacterial injection, showing slow rate of increase in the chloride ion, but rapid in the sodium and potassium ions.
Park, Nam-Suk;Lee, Sang-Mong;Moon, Jae-Yu;Su, Il-Seong
한국잠사곤충학회지
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제41권2호
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pp.75-81
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1999
The storage protein-like protein has been purified from the 5th instar larval haemolymph of the Chinese osk silkwom, Antheraea pernyi, and the preparation was shown to be homogeneous by 7.5% native-PAGE. The molecule was consisted of a single subunit with a molecular weight of 80K, but the number of the subunits was not determined. The protein was defied as glycoprotein by Schiff's regent stining. Rabbit antibody prepared against the purified protein crotein crossreacted with the 5th instar larval haemolymph proteins of Antheraea pernyi and antheraea yamamai, but not with those of Bombyx mori and Bombyx mandarina.
배추흰나비 5령 유충의 복부에 E. coli K-12를 주입한 다음 면역혈림프로 부터 다섯 종류의 항균단백질을 유도하였으며, 이러한 단백질들은 그람 양성균과 그람 음성균에 대해 항균성이 있거나 혹은 그람 양성균에 대해서만 항균성이 있었다. 유도된 단백질 가운데 열에 안정되고 염기성인 4 kDa 정도의 분자량을 갖는 peptide를 분리하였으며, 이것을 hinnavins이라고 명명하였다.
담배나방 (Helicoverpa assulta)의 발생기간 중 존재하는 major haemolyruph protein (MHP)을 확인하였으며, 그 발생에 따른 변화상 및 물리화학적 특성을 조사하였다. MHP는 유충-용-성충의 발생단계에서 확인되었으며, 그 함량은 유충의 성장에 따라 증가하여 용기와 성충기 동안에도 높게 유지되고 용초기와 성충 초기에서 일시적인 감소를 보여, 총 혈림프 단백질의 농도 변화와 유사한 변화양상을 보였다. ammonium sulfate precipitation, gel filtration 그리고 ion exchange chromatography를 통해 정제한 MHP의 전기영동 분석 결과, 단일 구성소 단위 (69 kDa)가 hexamer를 이룬 분자량 414kDa의 glycolipoprotein (pI 5.9)인 것으로 확인되었다. MHP의 아미노산 조성에 있어서 18.27 mole % 의 tryptophan, 7.47 mole % 의 tyrosine and 6.51 mole % 의 phenylalanine이 검출되어 다른 곤충류의 저단백질들에 비해 비교적 높은 aromatic amino acid의함량을 보였다. 지방체, 장, 말피기관 단백질의 전기영동 및 이들 단백질과 anti-MHP간의 immunodiffusion test 결과 MHP는 지방체에 존재하고 있음이 확인되었다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제12권2호
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pp.75-80
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2006
Changes in the levels of protein and free amino acids in the haemolymph of three selected races of the silkworm, Bombyx mori viz., PM, $NB_4D_2$ and $CSR_2$, were investigated during 4th moult, 5th instar and pupal period. The levels of total protein in the haemolymph, increased from first day of 5th instar till sixth day. From seventh day till spinning, the protein levels decreased in all the three races. A sustained decrease in the haemolymph proteins was observed during the pupal development in all the three races. The levels of free amino acids, which were high during 4th moult, declined through the 5th age of larval development till spinning. PM showed a relatively higher free amino acid level (3.192 mg/ml) in haemolymph followed by $NB_4D_2$ (2.601 mg/ml) and $CSR_2$ (2.35 mg/ml). The free amino acid levels decreased gradually from prepupal stage but increased again at the end of pupal period. Racial differences in the changes in the levels of protein and free amino acids in the haemolymph were observed in the larvae and pupae when subjected to two high temperature regimes of $30^{\circ}C$ and $35^{\circ}C$. The results showed that high temperature induces specific changes in the metabolism (reversible thermal stress) that have different adaptive value in different races of the silkworm. Relatively higher increase in the free amino acid levels in the haemolymph of Pure Mysore presumably provides protective cover to tissues against high temperature by an increase in osmolarity and reduction in evaporative water loss. The absence of such a mechanism may be responsible for temperature susceptibility of the bivoltine races like $NB_4D_2$ and $CSR_2$.
이 연구는 polyacrylamide gel 전기영동법을 사용해서 상잠의 5령 3일째 유충 및 가잠의 5령 3일째 유충에 있어서 혈액, 소화액 단백질의 전기 영동상과소화액 amylase 활성을 조사하였다. 1. 상잠의 혈액에 있어서 자유충에서는 6본의 주요 단백질 band가 검출되었으며 웅유충에서는 7본의 주요 단백질 band가 검출되었다. 그러나, 가잠에 있어서 암누에에 있어서는 8본, 숫누에에 있어서는 7본이 검출되었다. 상잠과 가잠과의 혈액단백질의 전기영동상에 있어서 다소의 차이가 있었다. 2. 상잠의 소화액에서 15본의 단백질 band가 검출되었으며 가잠에서는 12본의 단백질 band가 검출되었다. 상잠과 가잠과의 소화액 단백질의 전기영동상에 있어서도 다소의 차이가 있었다. 3. 상잠의 소화액 amylase는 가잠과 같이 양극측 BPB 부근까지 강하게 이동하였으며 상잠의 소화액 amylase의 이동도는 0.019이고 가잠의 이동도는 0.020으로서 양종간의 이동도의 차이가 거의 없었다.
누에의 變態期 동안 貯藏蛋白質의 出現과 번데기 시기동안 각 組織에 따른 貯藏蛋白質의 分布를 살펴보기 위해 電氣泳動法, 免疫學的 方法 및 column chromatography法을 使用하였다. 혈림프의 貯藏蛋白質은 2개로 區分이 되었고, 5령 初期부터 出現하고 있으며 지방체 단백질과도 동일한 전기영동상의 移動度를 갖고 있다. 이의 量的 變化는 終令期에는 혈림프에서 높은 濃度를 유지하다. 化後에는 脂肪體에 축적이 되는 경향을 나타내며 특히 저장단백질-2가 암수에서 모두 두드러진 저장단백질의 양상을 보이고 있다. 이러한 貯藏蛋白質은 종령 末期에는 큐리클 단백질 형성에도 관여하는 것 같으며 번데기에는 中腸도 일시적으로 저장단백질을 저장하는 것 같다. 또한 貯藏蛋白質中 저장단백질-2는 vitellogenin과 정기영동 및 면역학적으로 동일한 이동도를 나타내고 있으며 특히 번데기시기동안 卵黃蛋白質의 항체에 대해 항원-항체반응을 나타내고 있어 卵形成過程에도 밀접하게 관여하는 것 같다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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