• 한국한의학연구원논문집
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• 제1권1호
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• pp.477-493
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• 1995

In order to facilitate the molecular characterization of the Herpes simplex Virus types 1 and types 2 genome DNAs, a gene library of cloned restriction frtgments have been produced. The Vero cells were infected with HSV-1 and HSV-2. 48 hours after infection, the infected cells Ivere Iysed, and multinucleated giant cells were observed approximately at seventy-two hours postinfection. The multiplication of HSV-1 and HSV-2 was observed in Vero cells using electromicroscopy. The nucleocapsids in nuclei were obseryed, and the assembled virions were budded out through the vacuole, and the virions were released from the cells. HSV-1 and HSV-2 was analyzed by digestion of their genome DANs with restriction ensymes. HSV-1 and HSV-2 genome DNAs were digested with BarnHI, Bgfl respectively. The BarnHI rlestriction fragments of HSV-1 and HSV-2 genome DNAs were twenty-seven fragments and thair molecular sizes were ranging $0.70{\sim}15.08$, $4.4{\sim}31.0$ tilobases. The BglII restriction fragments of HSV-1 and HSV-2 genome DNAs were sixteen, eighteen fragments and thair molecular sizes were ranging $4.8{\sim}30.0$, $1.2{\sim}25.0$ kilobases. And then BglII restriction frgments were cloned in Escherichia coli(E.coil) using the plasmid vector pBacPAK9.

• 미생물학회지
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• 제36권4호
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• pp.306-311
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• 2000

Herpes simplex virus type-1 (HSV-1)의 감염에 따른 세포내 유리 칼슘농도의 변화에 대한 실험을 수행한 결과, HSV-1이 Vero 세포에 감염한 후 4시간째에 세포내 칼슘농도가 최대로 감소한 것을 알았으며 이러한 세포내 유리 칼슘농도의 감소는 감염성 바이러스의 양에 따라 커지며, 유전자 발현 억제제의 처리나 바이러스의 불활성화에 의해 극복되었다. 따라서 바이러스의 유전자발현이 세포내 유리 칼슘농도의 감소에 중요한 역할을 한다는 것을 알 수 있다. 또한 Vero 세포에 바이러스를 감염시키고 미세소관 안정제인 taxol을 처리하여 4 시간째의 세포내 유리 칼슘농도의 감소가 극복된다는 사실로부터 바이러스이 유전자 물질의 이동에는 미세소관이 관여한다는 것을 알 수 있었다. 이와 같은 실험 결과로부터 Vero 세포에서 HSV-1에 의해 유도되는 세포내 유리칼슘 농도의 감소는 HSV-1 증식과 밀접한 관계를 가진다고 생각된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제29권1호
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• pp.62-66
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• 2001

This study was performed to investigate antigenic expression patterns in the course of HSV-1 infection. In SDS-PAGE analysis, HSV-1 antigens were detected, and among them, antigens in the size of 39, 47, 63, 86, 101, 105, 135, 159, and 181 kDa appear to be expressed in the most dominant forms. BALB/c mice were infected with HSV-1 for 29 days and antigenic expression from HSV-1 was investigated by Western blot analysis using anti-HSV-1 sera collected every two days from BALB/c mice infected with HSV-1. Most of HSV-1 antigens appeared sporadically as the infection progressed. However, antigens in the sizes of 63kDa and 135kDa were expressed from day 1 and 3, respectively, and existed continuously during the course of infection for 29 days, suggesting that they are the most dominant antigens inducing immune response durign HSV-1 infection, and they could be the target antigens for the development of vaccines. The isotype levels of IgA, IgGl, and IgM increased till the 17 th day infection and then started to decrease. During this course. IgGl was the most dominant isotype. In an indirect immunofluorescent assay, antibodies exhibited surface binding to the Vero cell infected with HSV-1, demonstrating that HSV-1 antigens are expressed on the surface of Vero cells.

• 미생물학회지
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• 제33권2호
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• pp.97-104
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• 1997

인간을 비롯하여 여러 동물의 생식기와 구강. 안구 점막에 수포성, 괴양성 병변을 일으키는 Herpes simplex 2형 바이러스(HSV-2)에 대한 단클론항체를 하이브리도마 기술을 이용해 생사하였다. 생산된 단클론항체 C-2는 western blotting에서 134, 86 그리고 43 kDa의 분자량을 갖는 항원을 인식하였다. C-2의 isotype은 IgM이었다. SDS-PAGE를 이용하여 HSV-2에 감염되어 원형의 다핵 거세포를 형성한 vero 세포주를 인식하였으며, 이는 HSV-2 항원이 숙주세포에서 발현되고 있음을 알 수 있다. 이 결과는 HSV-2 백신개발의 목표항원이 되는 항원검출과 HSV-2 감염 진단법 개발에 기초가 될 수 있을 것이다.

• 대한핵의학회지
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• 제38권1호
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• pp.62-73
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• 2004

목적: 단순 헤르페스 제 1형 티미딘 키나제(herpes simplex virus type 1 thymidine kinase gene: HSV1-tk)는 GCV와 함께 유전자치료의 한 방법으로서 가장 활발하게 연구되어왔으며, HSV1-tk 효소에 대한 다양한 기질들이 연구되어서 이를 보고 기질로 한 비침습적인 HSV1-tk 유전자 영상시스템에서 가장 널리 사용되고 있다. 본 연구에서는 보고기질로서 방사성 요오드가 표지된 5-iodovinyl-2-deoxyuridine (IVDU) and 5 -iodovinyl-2-fluoro-2-deoxyuridine (IVFRU)를 보고 기질로 하여 HSV1-tk 유전자 영상시스템에서의 유용성을 확인하고자 하였다. 대상 및 방법 HSV1-tk 유전자 영상을 위하여 HSV1-tk 유전자를 레트로 바이러스 벡터를 이용하여 Morris hepatoma 세포주(MCA-tk)에 이입한 세포주를 제조하였으며, HSV1-tk 유전자의 발현을 확인하기 위하여 Northern blotting과 Western Blotting을 시행하였다. 대조세포주인 MCA와 제조된 MCA-tk 세포주에 방사표지 IVDU와 IVFRU를 이용하여 480분까지 세포내 섭취율을 평가하였으며, 또한 MCA-tk 세포주의 백분율을 증가시키면서 이에 따른 IVDU와 IVFRU의 섭취율을 평가함으로서 섭취율과 세포수와의 상관관계를 평가하였다. 결과: MCA-tk 세포주에서 HSV1-tk의 mRNA의 발현과 HSV1-TK 단백질의 발현을 확인하였다. 방사성 요오드 표지 IVDU와 IVFRU 모두는 MCA 세포주에서는 아주 낮은 섭취율을 나타내었으며, MCA-tk 세포주에서는 모두 증가된 섭취를 보였다. IVDU가 480분에서 IVFRU보다 4배 높은 섭취를 나타내었다(p<0.01). 방사표지 IVDU와 IVFRU 모두에서 MCA-tk의 백분율의 증가에 따라서 직선적인 상관관계($R^2>0.96$)를 나타내었다. 결론: 방사성 요오드 표지 IVDU와 IVFRU는 HSV1-tk유전자가 이입된 간암세포주에서 모두 특이적인 높은 섭취율을 나타내고 직선적인 상관관계가 나타나서 두 기질 모두 HSV1-tk유전자 영상시스템에서 보고 기질로서 유용하게 사용될 수 있을것으로 기대된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제49권3호
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• pp.298-309
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• 2000

연구배경 : 암 유전자치료에서 각광받고 있는 HSV-tk/GCV 전략의 항암효과에는 다음과 같은 장점들이 거론되고 있다 : 1) GCV 처리에 의한 암세포 직접살상효과 2) HSV-tk 이입된 세포에 의해서 HSV-tk 이입되지 않은 주변세포를 살상하는 bystander effect 3) 생체 내 bystander eff ect로 알려 진 anti-tumor immunity. Retrovirus와 adenovirus sequence를 이용할 경우 몇몇 세포주와 마우스에서 이들이 목적유전자의 발현을 억제할 수 있다는 것이 보고되고 있다. 본 연구에서는 retroviral나 adenoviral vector로 HSV-tk 유전자를 이입한 Lewis 폐암세포주와 폐암 마우스 모델을 통하여 HSV-tk/GCV 전략의 장점을 조사하였고 이 viral vector들 사이의 차이를 비교 조사하였다. 또한 Lewis 폐암세포주에서 butyrate를 처리한 후 HSV-tk 유전자의 발현증가를 관찰하였다. 방법 : Lewis retroviral vector와 adenoviral vector로 HSV-tk 유전자를 이입한 후 butyrate로 HSV-tk 유전자의 발현을 유도하고 Western blotting수행하여 분석하였다. 생체 외에서 HSV-tk/GCV에 의한 세포살상효과를 MTT 검사로 수행하였고 생체 내에서 LLC 나 HSV-tk 이입된 LLC 세포주를 이식하여 종양소멸 및 bystander effect를 조사 하였다. 결과 : 1. Butyrate로 HSV-tk adenovirus로 이입된 LLC에서 증가한 반면 retrovirus로 이입된 LLC에서는 증가하지 않았다. 2. 생체 외 그리고 생체 내에서 viral vector로 HSV-tk를 이입한 종양세포에 GCV 투여하는 것은 종양 세포의 살상에 효과적이었으며 LLC와 LLC-tk 세포주를 혼합한 실험에서 bystander effect도 종양세포의 성장을 억제하는 것으로 관찰되었다. 결론 : 향후 생체 외 그리고 생체 내 실험에서 adenoviral vector를 이용한 유전자 전달에 butyrate를 함께 사용하면 유전자발현을 증진시킬 것으로 사료되며 자살 유전자인 HSV-tk을 종양에 이입하여 GCV을 처리 하는 치료가 폐암유전자치료에 효과가 있을 것으로 생각된다.

• 한국한의학연구원논문집
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• 제2권1호
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• pp.417-429
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• 1996

Herpes simplex viruses(HSV) are one of the most common infectious virus of man. Though chemotherapies and antibiotics against HSV have been developed in many countries, but anti-HSV agents were not satisfactory to mankind by their toxic reaction and side effects. In order to search for anti-HSV agents from Korean traditional prescriptions, we extended the number of specimens. Both methanol extract and boilling water extract of the Korean traditional prescriptions were screened to detect anti-HSV activities by MTT assay. Korean traditional prescriptions showing anti-HSV activities as methanl extracts were Paekyopsan, Chesupwilyungtang, Yongdamsagantang, and prescription 11. Four methanol extracts showing anti-HSV activities were freationated by hexane and their efficacies were tested. Hexane freationations of Paekyopsan, Chesupwilyungtang, and prescription 11 showed in anti-HSV activities both haxane and methanol fractionation.

• 한국한의학연구원논문집
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• 제1권1호
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• pp.495-508
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• 1995

In order to search for anti-HSV agents from natural complex products, we extended the number of specimens. Both methanol extract and boiling water extract of the natural complex products were screened to detect anti-HSV activity by MTT assay. Anti-HSV activities of thirteen natural complex products extracted by methanol and boiling water were screened. Three of 13 natural complex products extracted by methanol showed efficacy against HSV. Natural complex products showing anti-HSV activities as methanol extracts were No.3, 6, 11 and their Sl were 323.809, 2811.041 and 708.20. As water boiling extracts, No.8 and No.11 have displayed Sl of 16.45 and 60.39 respectively. Especially anti-HSV activities of natural complex products extracted by methanol No.6 was stronger than other ones.

• Biomolecules & Therapeutics
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• 제7권2호
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• pp.158-163
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• 1999

In order to find less toxic antiherpetic agents, antiviral activities of quercitrin against two strains of pathogenic viruses such as herpes simplex virus type 1 (HSV-1) and type 2 (HSV-2) were determined in Vero cells using plaque reduction assay in vitro. Quercitrin showed a concentration-dependent decrease in plaque formation of HSV-1 and HSV-2. It also exhibited more potent antiherpetic activity on HSV-1 with 50% effective concentration (EC$_{50}$) of 20.4 $\mu$g/ml than on HSV-2 with EC$_{50}$ of 30.4 $\mu$g/ml. The combined antiherpetic effects of quercitrin with nucleoside antiherpetic agents, acyclovir and vidarabine, were examined on the multiplication of these two strains of herpesviruses in Vero cells by the combination assay. The results of combination assay were evaluated by the combination index (CI) that was calculated by the multiple drug effect analysis. The combinations of quercitrin with acyclovir and vidarabine on HSV-1 showed more potent synergism with CI values of 0.27-0.81 for 50%, 70%, 90% effective levels than those on HSV-2 with CI values of 1.03~2.20..20.

• BMB Reports
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• 제36권4호
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• pp.379-386
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• 2003

A mutant herpes simplex virus 1, mtHSV, was constructed by inserting the E. coli beta-galactosidase gene into the loci of icp34.5, the apoptosis-inhibiting gene of HSV. The mtHSV replicated in and lysed U251 (human glioma cells), EJ (human bladder cells), and S-180 (mice sarcoma cells), but not Wish (human amnion cells) cells. With its intact tk (thymidine kinase) gene, mtHSV exhibited susceptibility to acyclovir (ACV), which provided an approach to control viral replication. An in vivo test with mtHSV was conducted in immune-competent mice bearing sarcoma S-180 tumors, which were treated with a single intratumoral injection of mtHSV or PBS. Tumor dimensions then were measured at serial time points, and the tumor volumes were calculated. Sarcoma growth was significantly inhibited with prolonged time and reduced tumor volume. There was microscopic evidence of necrosis of tumors in treated mice, whereas no damage was found in other organs. Immunohistochemical staining revealed that virus replication was exclusively confined to the treated tumor cells. HSV-1 DNA was detected in tumors, but not in the other organs by a polymerase chain reaction analysis. From these experiments, we concluded that mtHSV should be a safe and promising oncolytic agent for cancer treatment.