키토올리고당의 정량법으로 기존의 비색법과 HPLC방법을 비교 검토하였다. HPLC에 의한 키토올리고당의 정량은 키토올리고당을 D-glucosamine로 분해한 다음, D-glucosamine을 분석하므로서 가능하였다. D-glucosamine를 분석하기 위한 HPLC 분석 조건은 검출기로서 RI detector 그리고 컬럼으로 Bondclone10 $NH_{2}$ column$(330{\times}3.9\;mm,\;10\;micron,\;Phenomenex)$을 사용하고 이동상으로는 acetonitrile : $H_{2}O$(65 : 35)으로 하였다. 키토올리고당의 정량은 비색법 보다 HPLC법이 높은 회수율을 보였으며, 분석시간도 시료당 10분 이내로서 비색법의 4 시간 보다 더 짧았다. 비색법은 키토산 등에 의한 false positive response가 일어났으나 HPLC법은 glucosamine 이외의 다른 성분에 의한 영향을 받지 않았다. 따라서 HPLC에 의한 키토올리고당의 정량은 가능하였으며 기존의 비색법 보다 신속 정확하였다.
In this study, we shortly introduced the HPLC method validation guideline for the analysis of functional food which was released from the Ministry of Food and Drug Safety of Korea in Dec 2018. The HPLC method validation was performed through the aforementioned HPLC method validation guideline in order to quantitate scopoletin content from the hot-water extract powder of Artemisia annua Linné. The HPLC method was validated by evaluating specificity, accuracy, precision, limit of quantitation and linearity. All parameters were in the suitable ranges which are designated in the guideline, which indicated the current HPLC method is reliable to quantitate the scopoletin content from the hot-water extract of A. annua.
An HPLC assay method of a drug to be applied to the pharmacokinetic studies of the drug should be completely validated. The validation process for an HPLC assay method in a biological sample was discussed using the data obtained from the development of HPLC method for the simultaneous quantitation of verapamil and norverapamil in human serum. The validation criteria included were specificity, linearity, accuracy, precision, sensitivity, recovery, drug stability, and ruggedness of an assay method.
남조류 독소인 마이크로시스틴은 여름철 우리나라 여러 호수들에 존재하여 물고기와 가축 그리고 인간에게 강한 독성을 나타내는 독소이다. 본 논문에서는 이러한 수중 남조류 독소, 마이크로시스틴을 정량분석하는 두가지 방법, 즉 고성능 액체크로마토그래피(HPLC) 분석법과 최근 우리 실험실에서 개발한 스트립분석법의 비교를 시도하였다. 두 분석법의 측정가능농도범위가 많이 달라 HPLC 법으로 먼저 측정한 후 시료를 물로 희석시켜 스트립분석법에 적용하였다. 서로 다른 농도의 마이크로시스틴을 함유한 7가지 물시료들을 사용하여 HPLC분석법과 스트립 분석법으로 남조류 독소 총량을 측정하였다. 그 결과 두 분석법의 정량측정결과가 매우 잘 일치하는 것을 볼 수 있었다. 두 분석법의 상관분석 결과 r 값은 0.99998 이었으며 통계적인 유의성을 나타내는 p 값은 0.00001 이었다.
Octanol/water partition coefficients of 52 chemicals were calculated using RP-HPLC estimation method and predicted by computer program, PCHEM. The result showed relationship between literature values and RP-HPLC observed values (relative coefficient r$^2$=0.916), but the relationship of PCHEM values with literature values was lower than RP-HPLC value (relative coefficient r$^2$=0.795). The average difference in partition coefficient between the RP-HPLC method and flask-shaking method was log Kow=0.54, while the average difference between the values predicted form the computer program and flask- shaking method was log Kow = 0.36 Compared to octanol/water partition coefficients by 3 methods (Flask-shaking, RP-HPLC, computer prediction), the octanol/water partition coefficient values based on the flask-shaking method were very similar to the literature values, while the octanol/water partition coefficient values by RP-HPLC method without to consider the dead time, and computer prediction values did not significantly differ with the literature values.
본 연구는 요중 아플라톡신 M1 (AFM1)의 농도를 측정할 수 있는 competitive ELISA 방법의 특성을 HPLC-fluorescence detector (HPLC-FLD) 방법과 비교하여 평가하였다. ELISA 방법에서의 AFM1의 회수율은 105% (73-124%)였고 측정의 변이계수는 6.85%로 나타났다. ELISA 방법에서의 검출한계와 정량한계는 각각 0.20 pg/ml과 0.62 pg/ml로 조사되었으며, 두 방법을 이용하여 측정한 요중 AFM1 농도는 상관계수 0.96의 매우 높은 상관성이 있는 것으로 확인되었다(p<0.01). 그러나, 이렇게 높은 상관성에도 불구하고, ELISA 방법을 이용한 요중 AFM1의 농도는 HPLC-FLD 방법으로 측정한 값에 비해 상대적으로 높게 나타나는 경향을 보여 ELISA를 이용한 방법이 단시간에 많은 시료를 분석할 수 있는 장점은 있으나 그 결과는 HPLC-FLD 방법을 이용해서 얻은 회귀식을 이용하여 보정을 한 후 제시할 필요가 있는 것으로 판단된다.
절임류에 함유된 이산화황함량의 정확한 분석을 위해 산 증류후 HPLC-UV detector를 이용한 방법과 Monnier-Williams변법으로 실험해보았다. 산증류-HPLC-UV법은 절임류중의 아황산염을 산증류 시킨 후 발생하는 이산화황을 1% triethanolamine용액에 흡수시켜 이를 UV 240nm에서 정량하는 것으로서, 고정상은 음이온 교환컬럼을, 이동상으로는 1.8mM $Na_2Co_3$와 1.7mM $NaHCO_3$용액을 사용하였다. 이 방법으로 단무지에 아황산염을 첨가하여 실험 한 결과 $84.0{\sim}91.7%$의 회수율을 얻었다. 시중에 유통되는 48종의 절임류에 대해 모니어윌리암스변법과 산증류-HPLC-UV법을 이용하여 이산화황 함량을 조사해본 결과, 산증류-HPLC-UV법에 비해 모니어월리암스법에서 휘발성 산으로 인해 높은 농도를 나타내었다. 산증류-HPLC-UV법으로 분석한 절임류의 이산화황 농도는 불검출${\sim}173.05ppm$이었고, 기준인 30ppm을 초과하는 제품은 3건이었다.
Chondroitin sulfate (Chs) contents in edible snail , Achatina fulica Bowdich , andits processed meat extracts were determined by high-performance liquid chormatogrpahy(HPLC) and spectrophotometric method. Spectrophotometric method was based on the precipitation of acriflavine by ChS, and HPLC method was based on the detection of two unsaturated disaccharides, 2-acetamido-2-deoxy-3-O-($\beta$ -D-gluco-4-enepyranosyluronic acid)-4-O-sulfo-D-galactose($\Delta$Di-4S) and 2-acetamido-2deoxy-3-O-($\beta$-D-gluco-4-eepyranosyluronic acid)-6-O-sulfo-D-galactose ($\Delta$야-6S) librated from ChS byenzymeatic digestion with chondroitinase ABc. the ratio of 125$\mu$mol of sodium hydroxide to mg of ChS and 8$0^{\circ}C$ of reaction temperature were proper for alkaline hydrolysis to remove protein residue form ChS. In assay preparation for HPLC ethod, the iptimum concentration of the enzyme chondroitinase ABc was 0.15 unit per 50 $\mu\textrm{g}$ of ChS at a fixed reaction time (30 min) and pH 8.0 using Tris buffer. ChS content in edible snail was 177.6mg% by spectrophotometric method and 153.5mg% by HPLC method and those in the processed meat extract was 71.3mg% by spectrometric method ad 62.8mg% by HPLC method, respectively.
The aim of this study was to evaluate the difference of analytical methods for the pharmacokinetic study of bromosulfophthalein (BSP), an indicator of hepatobiliary function. The plasma and bile concentrations of BSP after intravenous administration were measured according to custom UV spectroscopy and HPLC, respectively. Plasma concentration of BSP measured by UV spectroscopy was similar to that measured by HPLC. There was no significant difference in the distribution volume, total body clearance, area under the curve and mean residence time of BSP between different analytical method groups. However, bile concentration of BSP measured by UV spectroscopy was overestimated compared with concentration measured by HPLC method. Biliary clearance of BSP obtained from UV spectroscopy method was almost 3 times higher than that obtained from HPLC method. Thus, a feasibility of UV spectroscopy method for high throughput pharmacokinetic evaluation of BSP was limited to the study based on the plasma concentration of BSP, not bile concentration.
In the present study the sesamin and sesamol contents of the sesame extracts prepared from nine provinces in Korea were determined HPLC method. A comparative test was also carried out using the Villavecchia-suarez test, the red colored reaction for the sesamol and sesamol derivatives. The contents of sesamin and sesamol of the sesame oils from each area by the HPLC method were 0.57~0.78% and 0.010-0.023%, respectively. and the paralled results were obtained by the Villavecchia-suarez test and the HPLC method. The average contents of the sesamin was $0.68{\pm}0.074%$ by the HPLC method and the average absorbance of the Villavecchia-suarez test was $0.56{\pm}0.034$. The contents of sesamol from sesame oil by the HPLC method and the Villavecchia-suarez test were so low that it was not possible to correlate with the sesamin contents. The contents of sesamol from the sesame oil produced in Kyeong-gi and Jeon-nam provinces were $0.010{\pm}0.002%$ and $0.023{\pm}0.004$, respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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