Human ferritin H- and L-chain genes (hfH and hfL) were cloned into the yeast shuttle vector YEp352 containing the GAL1 (galactokinase) and GAL10 (epimerase) divergent promoters and the vectors constructed were used to transform Saccharomyces cerevisiae 2805. SDS-PAGE displayed expression of the introduced hfH and hfL in both recombinant strains of Y1H10L and Y1L10H. The ferritin subunits, that represented ca. $22\%$ and $15\%$ of the soluble proteins in Y1H10L and Y1L10H, were spontaneously assembled into active ferritin heteropolymers. The H subunit content of the purified recombinant human ferritin heteropolymers was proven to reflect the relative expression yield of the subunits. When the cells of 2d culture were incubated with 14.3 mM Fe(2), the cellular iron concentration of Y1H10L and Y1L10H was 1.7 and 2.0 times, respectively, that of the control strain. It is assumed that increase in the iron uptake of the recombinant yeasts is closely related to ferritin expression and H subunit content.
The biosorption of heavy metals has received a lot of attraction for application of metal ions treatment. In this work, we studied with Arthrobactor sp., screening from a wastewater containing heavy metals. The Pb uptake capacity of Arthrobactor sp. was nearly 146.9 mg Pb/g dry biomass(initial concentration, 500 may L), whereas the Pb uptake capacity of Sacchuomyces cerevisiae and Sacchuomyces uvuum were only around 39.40 and 35.65 mg Pb yg dry biomass, respectively. The Pb and Cr were removed from metal solution much more effeciently than were the other metals(Cd and Cu). The Pb uptake capacity of Aythrobactor sp. increased with increasing in pH(1.8, 3.0 and 4.0) and decreased with Increaslng of biomass concentration. At pH 4.0, the Pb uptake capacity reached 244 mg Pb/g dry biomass in Pb initial concentration of 1000 mg/L. The Pb uptake capacity of Ayhol)actor sp. treated by KOH and $CaCl_2$ were increased above values obtained with untreated Ayurobactor sp. However, the Pb uptake capacity fore the breakthrough points were reached.
The objective of this work was to evaluate a thermotolerant yeast Issatchenkia orientalis DY252 as a microbial feed additive for ruminants. In the present study, the influence of volatile fatty acids (VFA) and temperature on oxygen uptake rate by I. orientalis DY 252 was investigated. It was evident that the oxygen uptake rate was decreased gradually as the VFA concentrations increased in a range of 30 to 120 mM. Although the oxygen uptake rate was not greatly affected by temperature in the range 37 to $43^{\circ}C$, a maximum value of $0.45mg\;O_2/g$ cell/ min was obtained at $39^{\circ}C$. With regard to the oxygen uptake rate by yeast, viability was found to be less important than the metabolic activity of yeast.
Effects of cadmium (Cd) intoxication on renal endosomal accumulation of organic cations $(OC^+)$ were studied in rats using $^{14}C-tetraethylammnium$ (TEA) as a substrate. Cd intoxication was induced by s.c. injections of 2 mg Cd/kg/day for $2{\sim}3$ weeks. Renal cortical endosomes were isolated and the endosomal acidification (acridine orange fluorescence change) and TEA uptake (Millipore filtration technique) were assessed. The TEA uptake was an uphill transport mediated by $H^+/OC^+$ antiporter driven by the pH gradient established by $H^+-ATPase.$ In endosomes of Cd-intoxicated rats, the ATP-dependent TEA uptake was markedly attenuated due to inhibition of endosomal acidification as well as $H^+/TEA$ antiport. In kinetic analysis of $H^+/TEA$ antiport, Vmax was reduced and Km was increased in the Cd group. Inhibition of $H^+/TEA$ antiport was also observed in normal endosomes directly exposed to free Cd (but not Cd-metallothionein complex, CdMt) in vitro. These data suggest that during chronic Cd exposure, free Cd ions liberated by lysosomal degradation of CdMt in proximal tubule cells may impair the endosomal accumulation of $OC^+$ by directly inhibiting the $H^+/OC^+$ antiporter activity and indirectly by reducing the intravesicular acidification, the driving force for $H^+/OC^+$ exchange.
Experiments were conducted to investigate the effects of chromium application level, soil pH change, soil topping, application of some metals and application of organic matter on the absorption of chromium by radish and its growth. The results of experiments are summarized as following. Application of chromium as potassium dichromate up to 50 mg/kg did not affect the germination of radish seed. Application of chromium above this level affected the germination abversely. The dry matter yield of and absorption of chromium by radish was not affected by the application of chromium up to 100 mg/kg. Increased in soil pH decreased the uptake of chromium by radish under all range of chromium application rates. Under acidic condition (pH 5-6), the increase in the application of chromium resulted in the increase in the uptake of chromium by radish and lowering of dry matter production of radish. However, under alkaline condition (pH 7-8), increased application of chromium did not affect the uptake of chromium and the dry matter yield of radish. The application of Zn, Fe and Cu, up to 100 mg/kg did not affect not affect the uptake of chromium and dry matter yield of radish. The topping of soil with untreated soil after application of chromium up to five cm, did not affect the chromium uptake of radish, the same treatments tended to increase the dry matter yield of radish. The application of organic fertilizer(obtained from local market) up to the amount equivalent to 3000 kg/ha, although increased the dry matter yield of radish, did not affect the uptake of chromium by radish significantly. All the treatments tested in this study did not affect the translocation of chromium between root and shoot of radish.
Iron uptake in mitochondria and fractionated mitochondria compartments was studied to understand iron transport in heart mitochondria. The inner membrane is most active in iron uptake. Mitochondrial uptake was dependent on iron concentration and the amount of mitochondria. Iron transport was inversely proportional to pH in the range of 6.0 to 8.0. Iron transport reached a maximum after 30 min of incubation at $37^{\circ}C$. Iron uptake was inhibited by 1 mM ATP and stimulated by 1 mM ADP. The oxidative phosphorylation inhibitor oligomycin inhibited iron uptake, but rotenone and antimycin A did not. The divalent ions $Mg^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Mn^{2+}$, and $Zn^{2+}$ suppressed iron uptake at $10\;{\mu}M$ and stimulated it at 1 mM. The divalent ion $Ca^{2+}$ stimulated iron uptake at $10\;{\mu}M$ and suppressed it at 1 mM, competing with iron. The uptake of calcium was stimulated by 10 to $1000\;{\mu}M$ ATP, while iron uptake was stimulated reciprocally by 10 to $1000\;{\mu}M$ ADP, suggesting that these ions have movements similar to those of ATP and ADP.
Plants sequester atmospheric CO$_2$, a major agent of climate change, during the growing periods and mitigate its rising accumulation in the atmosphere. Pinus densiflora and Quercus mongolica are the native tree species dominant in the temperate forests of Korea. This study quantified the annual CO$_2$ uptake by the two species at forest sites in Chuncheon in the middle of the country. The quantification was based on seasonal measurements of CO$_2$ exchange rates under natural conditions by an infrared gas analyzer over the growing season (1999). The monthly CO$_2$ uptake per unit leaf area ranged from 1.6-6.7 mg/d㎡/h for P. densiflora and from 3.7-8.9 mg/d㎡/h for Q. mongolica, with a maximum in mid-summer. An equation for each species was generated to estimate easily the annual CO$_2$ uptake by total leaf area per tree, which subtracted the CO$_2$ release (i.e. respiration) by leaves and woody organs from the gross CO$_2$ uptake (diurnal uptake and release by leaves). Annual CO$_2$ release by leaves and woody organs accounted for 58-73% of the gross CO$_2$ uptake across tree specimens. Annual CO$_2$ uptake per tree increased with increasing dbh (stem diameter at breast height) for the study diameter range, and was greater for Q. mongolica than for P. densiflora in the same dbh sizes. This was mainly associated with a greater total leaf area in the former. For example, the annual CO$_2$ uptake by one tree with dbh of 25 cm was 35.6 kg/yr for P. densiflora and 47.9 kg/yr for Q. mongolica. The results from this study can be applied to evaluate an atmospheric CO$_2$ reduction of woody plants by forest type and age class.
Absorption pattern of potassium, calcium, phosphate and nitrate ions, and the pH change during ion-absorption at pH 3.0-11.0 by Oryza sativa L. were studied to investigate indirectly the evidence of H^+-efflux by ATPase. The rice seedlings which were grown either in $L^{\circ} -dark or in L^+-sunlight$, were used both in each ion-absorption to compare with one another. The uptake rate of these ions appeared to favor more in $L^+than in L^{\circ}$, over all range in pH, nearly with the same pattern. The absorption of potassium resulted in bell shape and that of calcium increased linearly to the alkali range. The shape of phosphate-absorption showed nearly the t-distribution curve with high value in acid range and the uptake of nitrate resulted in the dual peaks, but higher in acid range. The pH of the external solution changed from the range of 3.5-11.0 to 3.5-7.0 after lhr-absorptioin, and further acidified after 3hr-absorption. It is suggested that the pH change of the external solution be affected by $ H^+-efflux$ which may be caused by the ATP-hydrolysis.
It is essential to clone the preptide transporter in order to obtain better understanding of its molecular structure, regulation, and substrate specificity. Characteristics of an endogenous peptide transporter in oocytes were studied along with expression of an exogenous protor/peptide cotransporter from rabbit intestine. And further efforts toward cloning the transporter were performed. The presence of an endogenous peptide transporter was detected in Xenopus laevis oocytes by measuring the uptake of $0.25/{mu}M(10{\;}{\mu}Ci/ml)[^3H]$-glycylsarcosine (Gly-Sar) at pH 5.5 with or without inhibitors. Yptake of Gly-Sae in oocytes was significantly inhibited by $25{\mu}M$ glycine nd sarcosine. This result suggests that a selective transporter is involved in the endogneous uptake of dipeptides. Collagenase treatment of oocytes used to strip oocytes from ovarian follicles did not affect the Gly-Sar uptake. Changing pH from 5.5 to 7.5 did not affect the Gly-Sae uptake significantly, suggesting no depedence of the endogenous transporter on a transmembrane proton gradient. An exogenous $H^+/pep-tide$ contransported was expressed after microinjection of polyadenylated messenger ribonucleic acid $[poly(A)^+ -mRNA]$ obtained from rabbit small intestine. The Gly-Sar uptake in mRNA-injected oocytes was 9 times thigher than that in water-injected oocyltes. Thus, frog occytes can be utilized fro expression cloning of the genes encoding intestinal $H^+$peptide contransporters. Size fractionation of mRNA was successfully obtained using this technique.
Properties of succinate transport were examined in basolaterat membrane vesicles (BLMV) isolated from rabbit renal cortex. An inwardly directed $Na^+$ gradient stimulated succinate uptake and led to a transient overshoot. $K^+,{\;}Li^+,{\;}Rb^+$ and choline could not substitute for $Na^+$ in the uptake process. The dependence of the initial uptake rate of succinate on $Na^+$ concentration exhibited sigmoidal kinetics, indicating interaction of more than one $Na^+$ with transporter Hill coefficient for $Na^+$ was calculated to be 2.0. The $Na^+-dependent$ succinate uptake was electrogenic, resulting in the transfer of positive charge across the membrane. The succinate uptake into BLMV showed a pH optimum at external pH $7.5{\sim}8.0$, whereas succinate uptake into brush border membrane vesicles (BBMV) did not depend on external pH. Kinetic analysis showed that a Na-dependent succinate uptake in BLMV occurred via a single transport system, with an apparent Km of $15.5{\pm}0.94{\;}{\mu}M$ and Vmax of $16.22{\pm}0.25{\;}nmole/mg{\;}protein/min$. Succinate uptake was strongly inhibited by $4{\sim}5$ carbon dicarboxylates, whereas monocarboxylates and other organic anions showed a little or no effect. The succinate transport system preferred dicarboxylates in trans-configuration (furmarate) over cis-dicarboxylates (maleate). Succinate uptake was inhibited by the anion transport inhibitors DIDS, SITS and furosemide, and $Na^+-coupled$ transport inhibitor harmaline. These results indicate the existence of a $Na^+-dependent$ succinate transport system in BLMV that may be shared by the other Krebs cycle intemediates. This transport system seems to be very similar to the luminal transport system for dicarboxylates.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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