P63 is a gene product required in cell cycle regulation which plays vital roles in tumor differentiation. Aims of the present study were to assess the frequency, pattern, sensitivity and specificity of two p63 protein clones P63 4A4 and P63 4A4+Y4A3 in squamous cell carcinomas (SCCs). Thirty cases of head and neck region SCC diagnosed on the basis of H&E staining were examined along with 60 cases of head and neck region biopsies other than squamous cell carcinoma, negative on H&E staining, were taken as control. Immunostaining was performed on slides according to the Thermo Scientific UltraVision LP detection System. P63 4A4+Y4A3 clone is more sensitive 96.6% in comparison to 86% in P63 4A4 with having greater NPV of 98.3%. The results signify the importance of P63 4A4+Y4A3 marker over the old markers and may be used as a confirmatory marker of squamous cell carcinoma.
Objective : The purpose of our experimental study was to analysis the advantages and disadvantages in the reversible and irreversible cerebral ischemic models with rats by staining with Neutral Red(NR) solusion, 2% 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride(TTC) and Hematoxylin & Eosin(H & E). Methods : We have measured the range of cerebral infarction in the rat to get a suitable ischemic model along the object of study with and without craniectomy. With craniectomy, 9 rats were sacrificed for irreversible cerebral ischemic model by means of ligation at proximal(group I) and distal(group II), and coagulation at proximal(group III) middle cerebral artery. Also, 6 rats were sacrificed for irreversible(group IV) and reversible(group V) cerebral ischemic model using nylon thread without craniectomy. The sizes of infarction were measured by staining the coronal sections of the brain with NR solusion, TTC and H & E. Results : There are no difference of physiological parameters comparing the each group. Cerebral infarction was not observed in group II, but it's volume was largest in group IV. Disadvantages of craniectomy group(I, II, III) are the long duration of operation and cortical damage by procedure. It's advantage is confirmation of the middle cerebral artery occlusion and cessation of blood flow through the operative microscope. In case of ischemic models using nylon thread (group IV, V), it is hard to identify the interruption or recirculation of blood flow through the middle cerebral artery, but the advantage is the simplicity of operative technique which reduces the operation time and minimizes the cerebral damage due to craniectomy. Therefore, it seems important to set up the reversible and irreversible ischemic models by carefully considering advantages and disadvantages listed above. Conclusion : TTC staining seems to be effective since it reflects the histological damage sufficiently and quickly. It is hoped that researches focused on ischemic penumbra, which became popular recently, will be further carried on with use of NR staining, optical microscope and electron microscope.
이 연구는 $PGE_2$ 생합성 억제제인 인도메타신의 투여 시 성장기 개의 하악두 연골에 나타나는 cyclooxygenase-2 (GOX-2)와 insulin-like growth factor 1(IGF-1)의 발현과 분포를 관찰하여 인도메타신이 하악두 연골 성장에 미치는 영향을 규명하기 위하여 시행하였다 생후 12- 3주된 잡견 8마리를 4군으로 구분하였다 통상적 복용량인 인도메타신 2mg/Kg/day을 각각 7일과 14일간 투여한 군 과량인 8mg/Kg/day을 14일간 투여한 군과 무처치군인 대조군으로 구분하였으며. 하악두를 연구대상으로 하였다. 연구대상 하악두는 $5{\mu}m$ 두께의 절편을 만들어, H-E 중염색, COX-2 면역염색 IGF-1 면역염색을 시행하여 광학 현미경으로 검경하였으며, tartrate resistant acid phosphatase(TRAP) 염색 후 파연골세포의 수를 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 인도메타신은 하악두 연골의 증식대에서 COX-2와 IGF-1의 발현과 분포를 억제시켰으며, 인도메타신의 투여기간에 비례해서 파연골세포 수는 유의성 있게 감소하였다 (p<0.01) IGF-1의 발현과 분포는 인도메타신의 투여 양과 기간에 비례하여 억제되었다 이상의 결과에 의하면 인도메타신의 투여는 하악두 연골에서 COX-2와 IGF-1의 발현과 분포를 억제하고 파연골세포의 수를 감소시켜 하악두 성장을 억제할 가능성이 있음을 시사한다.
Objectives : The root bark of Morus alba L. (Mori Cortex Radidus; MCR) has been traditionally used to reduce heat from the lungs, soothe asthma, and edema and to promote urination. In this study, we investigated the effect of MCR ethanol extract on ovalbumin (OVA)-induced allergic asthma in mice. Methods : Mice were sensitized at day 0, 7 and 14 with 0.2% OVA and then airway challenged at day 21, 23, 25, 27 and 29 to induce allergic asthma. MCR extracts at doses of 50 and 100 mg/kg body weight (bw) were orally administered during OVA challenge once per a day. The levels of allergic mediators such as histamine, OVA-specific IgE, IFN-${\gamma}$ and IL-4 were measured in the sera of mice by ELISA. The histopathological change of lung tissues was observed with hematoxylin and eosin (H&E) staining. Results : MCR extract significantly decreased not only the serum levels of histamine, OVA-specific IgE, and IL-4 compared with those of OVA control group, but significantly increased the serum level of IFN-${\gamma}$. In H&E staining, MCR extract inhibited the infiltration of inflammatory cells and bronchiolar damage with epithelial thickening in lung tissues of OVA-induced asthma mice. Conclusions : These results indicate that MCR extract inhibits lung damage by asthma through regulating the allergic immune response, suggesting that MCR may be used as a useful agent for the treatment of allergic asthma.
Objectives : The root of Peucedanum japonicum Thunberg (Peucedani Japonici Radix; PJR) has been traditionally used as an herbal medicine for the treatment of anti-headache, anti-paralysis, anti-cancer, vascular protection, and blood pressure regulation. In this study, we investigated the anti-allergic effect of PJR water extract on ovalbumin (OVA)-induced allergic asthma in mice. Methods : Mice were sensitized at days 1, 8 and 15 with OVA and airway challenged at days 22, 24, 26, 28, and 30 to induced allergic asthma. PJR-W extract at doses of 100 and 300 mg/kg/body weight (bw) was orally administered during OVA challenge once per a day. The levels of allergic mediators such as immunoglobulin (Ig) E, and Th1/Th2 cytokines (IFN-${\gamma}$ and IL-4) were measured in the sera of mice by ELISA. The histological change of lung tissue was observed with hematoxylin and eosin (H&E) staining. Results : The administration of PJR-W extract significantly decreased the serum levels of IgE, IL-4, and IFN-${\gamma}$ compared with those of OVA control group. In H&E staining, PJR-E extract inhibited OVA-induced airway inflammation and the inflammatory cells infiltration in the peribronchial regions of the lung. Conclusions : These results indicate that PJR-W extract has an anti-inflammatory and anti-allergic effect on allergic response through the down-regulation of allergic mediators, suggesting that this herb may be used as a useful source for the treatment of allergic inflammatory diseases such as asthma.
In order to study the role of the protein shell in both iron uptake and iron core formation of ferritin, we constructed a deletion mutant of the ferritin gene and expressed the mutant gene in Escherichia coli, This mutant was obtained by introducing an amber mutation at position Pro-157 and a deletion of the 19 amino acid residues at the carboxy-terminus of the recombinant tadpole H-chain ferritin. The deleted amino acids correspond to E-helix forming the hydrophobic channel in the protein. E. coli harboring the plasmid pTHP157, which contains the deleted gene, was grown at $23^{\circ}C$ in the presence of 0.1 mM IPTG, and the induced protein appeared to be partly soluble. Nondenaturing polyacrylamide gel electrophoresis showed that the expressed mutant H-chains coassemble into holoprotein, suggesting that E-helix is not necessary for assembly of the subunits as reported for human H-chain ferritin. Its ability in iron core formation was proven in an Fe staining gel, the result disagreeing with the observation that the hydrophobic channel is necessary for iron core formation in human H-chain ferritin.
Objectives : In this study, we investigated the effects of Agastachis Herba water (AH-W) extract on compound 48/80-induced mast cell degranulation and histamine release in human mast cells and also anti-asthmatic effect of AH-W extract on ovalbumin (OVA)-induced asthma in mice. Methods : Human mast cells, HMC-1 were treated with AH-W extract in the presence or absence of compound 48/80 (C48/80). Mast cell degranulation was observed by microscope, and the histamine release was measured in culture medium by ELISA. For preparation of asthmatic in vivo model, mice were sensitized (0, 7, and 14 days) with OVA and airway challenged (21, 23, 25, 27, and 29 days). AH-W extract at doses of 100 and 300 mg/kg/body weight was orally administered during OVA challenge once per a day. The levels of immunoglobulin (Ig) E, and Th1/Th2 cytokines, IFN-$\gamma$ and IL-4 were measured in the sera of mice by ELISA. The histopathological change of lung tissues was observed by hematoxylin and eosin (H&E) and Periodic Acid Schiff (PAS) staining. Results : The treatment of AH-W extract significantly decreased the mast cell degranulation and histamine release in C48/80-stimulated HMC-1 cells. In addition, The administration of AH-W extract at does of 100 and 300 mg/kg significantly decreased the serum levels of OVA-specific IgE compared with those of OVA control group. In H&E and PAS staining, AH-W extract inhibited OVA-induced airway inflammation, and inflammatory cells infiltration, and also histopathological damages on lung tissues such as bronchiole epithelial desquamation, goblet cells hyperplasia, and mucin releasing. Conclusions : These results indicate that AH-W extract may improve asthmatic symptoms through mast cell stabilization and inhibiting the lung inflammation in bronchial asthma.
Kim, Ji Young;Kim, Dae Yong;Lee, Yun Song;Lee, Bong Ki;Lee, Kyung-Hoon;Ro, Jai Youl
Molecules and Cells
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제22권1호
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pp.104-112
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2006
We previously reported that DA-9601, ethanol herbal extract of Artemisia asiatica, inhibited histamine and leukotriene releases in guinea pig lung mast cells activated with specific antigen/antibody reaction. This study aimed to evaluate the inhibitory effect of DA-9601 on the OVA-induced airway inflammation in allergic asthma mouse model. BALB/c mice were sensitized and challenged with OVA. DA-9601 was administered orally 1 h before every local OVA-challenge. OVA-specific serum IgE was measured by ELISA, recruitment of inflammatory cells in BAL fluids and lung tissues by Diff-Quik and H&E staining, respectively, the expressions of CD40, CD40L and VCAM-1 by immunohistochemistry, goblet cell hyperplasia by PAS staining, activities of MMPs by gelatin zymography, expressions of mRNA and proteins of cytokines by RT-PCR and ELISA, activities of MAP kinases by western blot, and activity of NF-${\kappa}B$ by EMSA. DA-9601 reduced IgE level, recruitment of inflammatory cells into the BAL fluid and lung tissues, expressions of CD40, CD40L and VCAM-1 molecules, goblet cell hyperplasia, MMPs activity, expressions of mRNA and productions of various cytokines, activities of MAP kinases and NK-${\kappa}B$ increased from OVA-challenged mice. These data suggest that DA-9601 may be developed as a clinical therapeutic agent in allergic diseases due to suppressing the airway allergic inflammation via regulation of various cellular molecules expressed by MAP kinases/NF-${\kappa}B$ pathway.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제1권1호
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pp.73-78
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2000
We investigated some biochemical properties of acetylcholinesterase (AChE) in the Bombyx mori larval head. 1% Triton X-100 (v/v) was suitable for extracting AChE from the silkworm larval head but 1 M NaCl was not suitable. PAGE analysis showed a single band of AChE that was detected by histochemical staining using acetylthiocholine as a substrate. AChE was also partially purified with Sepharose 6B and DEAE-cellulose column. Finally, the specific activity of partially purified enzyme solution was 7.6. The study on inhibitor specificity indicated that the enzyme under study was a true cholinesterase (ChE) or AChE. AChE activity was maximum at the substrate concentration of $5{\times}10^{-4}$ M and the excess substrate inhibited the AChE activity. The optimal pH and temperature were pH 7.0-9.0 and 30-35$^{\circ}C$.
This study was aimed to examine the synergetic effects of photochemopreventive external agents composed of inorganic ZnO and esculetin. Zinc oxide (ZnO) is widely used in sunblocks because of its excellent biostability and little toxicity. Esculetin derived from Citrus Peel has an anti-oxidative effect. We made the hollow-shaped ZnO microsphere (MS), soaked it with esculetin (EZnO). We used SKH-1 mice to measure the photodamaging effects of UVB. The mice were divided into five groups as follows; UVB nontreated group (N), vehicle (C), esculetin (E), ZnO MS (ZnO), esculetin + ZnO MS(EZno) group. Each group of samples was topically applied to the dorsal skins before the UVB irradiation. The changes of collagen fibers in the skin tissues were observed by H & E staining and Van Gieson staining. The expression of mast cells in skin tissue was observed by immunohistochemical staining of tryptase present in the mast cell granules. Expression of inflammatory cytokines such as TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$, and MMP-9, which plays an essential role in wrinkle formation, was measured by RT-PCR. Interestingly, the composition of collagen fibers was better in the EZnO applied group than in the E or ZnO group. Moreover, mast cell expression and the expression of TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$, and MMP-9 mRNA were markedly suppressed in the EZnO group, indicating that the synergetic effects of esculetin and ZnO were excellent.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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