• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권4호
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• pp.406-410
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• 1990

토양에서 분리한 알칼리내성 Bacillus sp.의 자체 chromosomal DNA에서 유래된 strong promoter를 지닌 plasmid p-12B1을 공여균주에 삽입시키고 이 promoter의 활성을 최적화할 수 있는 배양조건을 검토하였다. 글루코오스가 고갈된 시점부터 세포의 활성은 유지되나 포자는 형성되지 않을 정도로 낮은 글루코오스 소비속도를 유지해 제한된 글루코오스를 연속적으로 공급해줌으로써 promoter의 활성을 최대로 높일 수 있었다. 또한 배지조성의 변화로 균체를 생육시킨 후 유전자 발현을 유도하는 것이 가능하였으며, 이 점에 대해서는 보다 구체적인 연구가 진행되어야 할 것이다.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제3권1호
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• pp.11-14
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• 1998

A toluene-oxidizing strain of Pseudomanas mendocina KR1 containing toluene-4-mono-oxygenase (TMO) completely degrades TCE with the addition of toluene as a co-substrate in aerobic condition. In order to construct in situ bioremediation system for TCE degradation without any growth-stimulating nutrients or toxic inducer such as toluene, we used the carbon-starvation promoter of Pseudomonas putida MK1 (Kim, Y. et al., J. bacteriol., 1995). Upon entry into the stationary phase due to the deprivation of nutrients, this promoter is strongly induced without further cell growth. The TMO gene cluster (4.5 kb) was spliced downstream of the carbon starvation promoter of Pseudomonas putida MK1, already cloned in pUC19. TMO under the carbon starvation promoter was not expressed in E. coli cells either in stationary phase or exponential phase. For TMO expression in Pseudomonas strains, tmo and carbon starvation promoter region were recloned into a modified broad-host range vector pMMB67HES which was made from pMMB67HE(8.9 kb) by deletion of tac promoter and lacIq (about 1.5 kb). Indigo was produced by TMO under the carbon starvation promoter in a Pseudomonas strain of post-exponential phase on M9 (0.2% glucose and 1mM indole) or LB. 18% of TCE was degraded in 14 hours after entering the stationary phase at the initial concentration of 6.6 ${\mu}$M in liquid phase.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제4권2호
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• pp.221-229
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• 2000

유선에서 젖의 생산은 뇌하수체 호르몬인 성장 호르몬과 프롤락틴을 포함한 여러 가지 호르몬의 조절을 받는다. 최근의 연구에 따르면 이 호르몬들 중에서 성장호르몬과 프롤락틴은 유선에서도 그 유전자 전사체가 발견된다 본 연구에서는 유선에서 발현되는 성장호르몬이 유선 특이 발현 유전자의 발현에 미치는 영향을 조사하고자 유선 특이 발현 유전자인 베타-락토글로불린($\beta$-lactoglobulin :BLG)의 프로모터를 모델 시스템으로 하여 소와 사람의 성장 호르몬이 유선의 유전자 발현에 끼치는 영향을 조사하였다. 성장 호르몬은 단독으로 처리하였을 패 베타-락토글로불린 유전자 프로모터 활성을 억제하였다. 그러나 젖 분비 호르몬들인 인슐린, 프롤락틴, 글루코코르티코이드와 함께 처리하였을 때는 농도 의존적으로 BLG 프로모터 활성을 상승시키는 효과를 보였다. 성장 호르몬을 유선 세포내에서 발현시켰을때는 적정농도에서 세포 증식과 유선 프로모터 활성을 크게 증진시켰다. 반면 소의 성장 호르몬 유전자 프로모터는 유선 세포에서 뚜렷한 활성을 나타내지 않았다. 이상의 결과는 유선에서 발현되는 뇌하수체 호르몬들은 조절 누수에 의한 유전자 발현이 아니라 생리적 기능을 가지고 있음을 의미한다. 또 인위적으로 성장호르몬의 발현을 조절하여 적정한 양이 발현되도록 하면 젖의 생산을 증진시킬 수 있다는 가능성도 암시한다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제2권1호
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• pp.93-97
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• 1999

The promoter region of alginate lyase gene (aly) from Pseudomonas sp. W7 was used for the high expression of gilthead seabream (Sparus aurata) growth hormone (GH) gene in Esherichia coli. PCR product encoding the premature segment of the growth hormone. was cloned to the downstream of aly promoter. GH was overexpressed With 46 ammo acid of alginate lyase as fusion protein. GH was immunoreactive and production of GH was repressed with supplementation of $0.4\%$ glucose into culture media.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권5호
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• pp.343-347
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• 1988

토양에서 분리한 알칼리 내성 Bacillus속의 chromosomal DNA로부터 promoter를 cloning하여 선별된 재조합 plasmid p-12내 의 promoter를 subcloning을 하였다. 그 결과 cloning된 promoter 내에는 서로 다른 두 가지의 promoter가 존재하는 것을 확인할 수 있었고 이로부터 각각의 promoter를 함유한 재조합 plasmid p-l2B1, p-l2B2를 제조하였다. 또한 CAT 비활성 측정에 의해 각 promoter의 활성을 비교해 본 결과 p-l2B1의 promoter는 p-l2B2의 promoter에 비해 상대적으로 높은 활성을 가지고 있었다. CAT 비활성을 생육시기에 따라 측정해 본 결과 p-l2B1과 p-l2B2는 대수증식기 이후 활성이 급증되었으며 배지 중 첨가된 1.0%의 glucose에 의해 활성이 억제되는 효과를 받았다.

• KSBB Journal
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• 제5권3호
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• pp.195-200
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• 1990

대장균의 lipoprotein promoter, lactose promotor 및 operator 와 lipoprotein의 signal sequence 를 가지는 vector에alpha-IFN 유전자가 cloning된 plasmid pIF-Ill-B를 여러종류의 대장균 숙주 세포에 형칠전환하여 alpha-IFN 의 생산성, 생장특성을 조사하였다. 또한 plasmid 자체와 cloning된 alpha-IFN 유전자의 발현유도가 세포생장에 미치는 영 향을 조사하였다.

• KSBB Journal
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• 제11권4호
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• pp.445-452
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• 1996

본 연구에서는 GALl, GALl, GALlO 및 GAP promoter 하류에 reporter 유전자인 K. marxianus의 inulinase 유전자(lNUl)를 연결하여 각각의 재조합 plasmid들을 구축하고, 이들로 형질전환된 S. cerevrswe를 회분배양(YPOG 배지 )하여 외래 유전자 발현에 미치는 promoter의 영향을 비교.검토하 였다. 재조합 효모의 최종 균체농도는 36-39 00600 값을 보여 promoter에 따른 큰 차이를 보이지 않았으나, 포도당 소모기간 동안 비증식속도는 평균 $0.24 h^{-1}$로 유지되다가 galactose 소모기간 동안에 GAL promoter 함유 효모배양의 경우 $0.04-0.06 h^{-1}$, pYIGP 함유 재조합 효모배양은 $0.10 h^{-1}$로 감소하였다. 포도당 고갈 후 inulinase 발현은 시작되었고 균체외 inulinase의 발현 수준은 배양 72시간에 4.3 (GALl promoter), 4.0 (GAL7 promoter), 3.8 (GAL10 promoter) 및 1.6 (GAP promoter) unit/mL에 도달하였다. 평판배지상에서의 활성염색과 회분배양의 결과(최종발현양 및 초기 inulinase 말현속도), inulinase 발현에 미치는 promoter 세기 는 GALl > GALlO > GAL7 > GAP 순임을 알 수 있었다. GAL promoter가 배양말기까지 78 % 이상의 높은 plasmid 안정성을 보인 반면에, GAP promoter의 경우 55%의 낮은 plasmid 안정성을 보였다. 또한, 재조합 inulinase는 promoter 종류에 상관없이 98% 이상 배양액으로 분비되였다.

• The Plant Pathology Journal
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• 제15권6호
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• pp.313-318
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• 1999

Cloning of the 5'untranslated region (5' UTR) and Nterminus of the glycoprotein precursor (G2G1) open reading frame of tomato spotted wilt virus has been problematic, possibly because of the toxicity of a signal peptide at the beginning of th G2G1 protein precursor. The toxicity of the signal peptide to bacterial growth and the reason for the expression of the peptide gene in Escherichia coli were investigated by cloning the 5' UTR and the signal peptide sequence separately. Cells transformed with the plasmid containing both the first 30 amino acids of the glycoprotein and the 5' UTR showed a severe growth inhibition whereas transformants harboring either the plasmid with the signal sequence or the 5'UTR alone did not show any ingibition. An E. coli promoter-like sequence was found in the 5'UTR and tis promoter acivity was confirmed with a promoter-less GUS gene cloned downstream of the 5'UTR. In the cloning of the Tomato spotted wilt virus (TSWV) glycoprotein G2G1 open reading frame all the recovered plasmids contained stop codons in the signal sequence region. However, clones containing no stop codon were recovered when the signal sequence and the 5'UTR were cloned separately.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제13권4호
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• pp.537-543
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• 2003

The mouse interferon gene (MuIFN-${\gamma}$) was cloned and then used to transform Saccharomyces cerevisiae. Expressed MuIFN-$\{gamma}$ protein (MuIFN-${\gamma}$) was successfully secreted into culture medium due to the presence oi the signal peptide of rice amylase 1A. Two different promoters fused to MuIFN-${\gamma}$ were tested: glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GPD) promoter and a yeast hybrid ADH2-GPD (AG) promoter consisting of alcohol dehydrogenase II (ADH2) and GPD promoter. Using the hybrid promoter, the accumulation of MuIFN-${\gamma}$transcript was the highest after the 24 h cultivation, and then gradually decreased as the cultivation proceeded. However, both cell growth and recombinant MuIFN-${\gamma}$production reached their peaks after the 4-day cultivation. It was possible to produce 6.5 mg/l of MuIFN-${\gamma}$ without any changes in cell growth. Using GPD promoter, the MuIFN-${\gamma}$ transcript accumulation and the recombinant MuIFN-${\gamma}$ production followed the same pattern as the cell growth. However. compared to that of the hybrid promoter, the production of recombinant MuIFN-${\gamma}$ was 0.2 mg/l. The secreted MuIFN-${\gamma}$ had estimated molecular masses of 21 kDa and 23 kDa, which were larger than that of the encoded size due to glycosylation. The protection assay against the viral infection indicated that the recombinant MuIFN-${\gamma}$ was bioactive.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제15권3호
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• pp.678-682
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• 2005

The promoter region of a carbon starvation gene isolated from Pseudomonas putida was cloned and analyzed for its potential use for in situ bioremediation and bioprocessing. We constructed a recombinant plasmid pMKD101 by cloning the 0.65 kb promoter region of the gene into the promoter proving vector, pMK301, which contains the lacZ for ${\beta}$-galactosidase activity as a reporter gene. pMKD101 was transformed into the wild-type P. putida MK1, resulting in P. putida RPD101, and analyzed for ${\beta}$-galactosidase activity under different culture conditions. When RPD101 was grown on the minimal medium plus $0.1\%$ glucose as a sole carbon source in batch cultures, ${\beta}$-galactosidase activity was found to be 3.2-fold higher during the stationary phase than during the exponential phase. In chemostat cultures, ${\beta}$-galactosidase activity was found to be 3.1-fold higher at the minimal growth rate (dilution rate=$0.05\;h^{-1}$) than at the maximal growth rate (dilution rate=$0.173;h^{-1}$). The results suggest that a carbon starvation promoter can be utilized to maximize the expression of a desired gene under nutrient limitation.