• 대한의생명과학회지
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• 제12권3호
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• pp.139-143
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• 2006

Jopock (Jpk) has previously been ascertained that induces both bacterial and mammalian cell death. The Escherichia coli cells expressing Glutathion S-transferase (GST) fused Jpk showed elongated phenotype and inhibited cell growth which led eventual cell death. In an attempt to search the genetic suppressor of the lethal protein Jpk in bacterial cells, we constructed a unidirectional protein expression vector inserting tac promoter next to the C-terminus Jpk in pGEX-Jpk. The function of additional tac promoter was confirmed by substituting lac promoter in Plac-TOPO plasmid. The cells harboring plac- TOPO, which regulates $lacZ{\alpha}$ gene expression under lac promoter, formed blue colonies in 5-bromo-4-3 $indolyo-{\beta}-D-galactoside$ (X-gal) plate. When lac promoter was changed to tac promoter, same results were observed. Since the addition of tac promoter did not affect the toxic effect of Jpk, the pGEX-Jpk-ptac could be a useful vector for the screening of suppressor(s) for Jpk, in which GST-Jpk and a putative Jpk-suppressing protein are coexpressing from two unidirectional tac promoters, which response to the same inducer, $isopropyl-{\beta}-D-thiogalactopyranoside (IPTG)$.

• 대한의생명과학회지
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• 제5권2호
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• pp.201-208
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• 1999

연령이 다른 흰쥐에 있어서 bromobenzene에 의한 간 손상의 정도 차이와 이의 기전을 알아보기 위하여 5주령 및 10주령 흰쥐에 bromobenzene을 체중 kg 당 400 mg을 격일로 5회 전처치함과 동시에 bromobenzene전처치 및 대조군에 bromobenzene을 다시 투여한 뒤 처치하여 다음과 같은 결과를 얻었다. Bromobenzene 전처치로 인한 간 무게, 혈청 alanine aminotransferase, xanthine oxidase 활성 및 간 조직중 과산화지질의 함량 증가율과 간 세포질의 단백질 감소율은 10주령군이 5주령군 보다 높았다. 이 결과는 10주령이 5주령 보다 bromobenzene 투여로 인한 간 손상이 심하게 나타남을 시사해 주고 있다. 한편, 간 조직 중 aniline hydroxylase 활성은 10주령에 있어서 bromobenzene 전처치군 및 대조군 모두 5주령 보다 높게 나타나는 반면 glutathione S-transferase 활성은 10주령이 5주령 보다 낮게 나타났다. 또한 이들 실험동물에 bromobenzene을 재 투여한 다음 경시별로 간 조직 중 glutathione 함량을 측정한 바 10주령이 5주령 보다 glutathione 감소율이 낮게 나타났다. 이상 실험결과를 종합해 볼 때 bromobenzene 투여시 10주령이 5주령 실험군 보다 간 손상이 심하게 나타났으며, 이는 생체내의 bromobenzene 처리능력이 5주령 보다 10주령이 저하되기 때문에 나타난 결과라고 사료된다.

• Journal of Ginseng Research
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• 제26권3호
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• pp.139-144
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• 2002

수태는 많은 신체적인 기능들의 높은 에너지 요구 및 산소요구량 증가로 인하여 생리적인 변화를 수반한다. 때문에 산소 섭취량 및 이용이 증가하여 산화적인 스트레스의 증가를 기대할 수 있다. 수태중에 발생되는 free radical에 대하여 홍삼사포닌 투여가 간 항산화효소의 활성에 미치는 영향을 연구하였다. 수태중에 superoxide dismutase(SOD)의 활성은 전반적으로 감소하는 경향을 나타냈으며, 사포닌 투여군은 대조군에 비하여 유의한 변화가 관찰되지 않았다. 그리고 glutathione peroxidase(GPX) , gluthatione reductase (GRD)와 catalase의 활성도는 수태중에 감소하는 경향을 나타냈으며, 반면에 사포닌 투여군은 대조군 비하여 GRD 및 catalase의 활성도에 유의한 변화를 나타냈다. 사포닌 투여군의 GPX의 활성도는 대조군에 비하여 감소하는 경향이 다소 적게 나타났다. 수태중 대조군의 glutathione-S-transferase (GST) 활성도는 항상성을 유지하기 위해 증가하는 경향을 나타냈으며, 사포닌 투여군도 대조군에 비하여 이 효소의 활성도가 더욱 증가하는 경향을 나타냈다. 분만 후 대조군 및 사포닌 투여군은 정상수준으로 회복되었다. 수태와 같은 생체변화에도 불구하고 수태한 흰쥐의 간 항산화 효소활성에 대한 사포닌의 영향은 산소독성에 대하여 모체간을 보호해주는 생리적 항상성의 적응메카니즘에 의하여 조절되는 것으로 보인다.

• 생명과학회지
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• 제12권3호
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• pp.349-356
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• 2002

노화과정에 산소라디칼이 관여할 가능성을 노화유도된 쥐를 동물모델로 하여 알아보았다. 난소를 절제한 rat와 난소를 절제하지 않은 정상의 rat에서의 생리활성에 미치는 인삼 추출물의 효과를 연구하였다. 난소를 절제한 rat에 각각 GTS (Ovx+GTS 군)와 GW (Ovx+GW 군)를 투여하고, 이것과 비교하기 위해 난소를 절제한 대조군(Ovx군)과 마지막으로 난소를 절제하지 않은 정상군(Sham군)으로 하여 항산화효과에 관한 실험방법으로 진행하였다. 노화유도된 쥐의 각 조직에서 lipid peroxidation이 증가되었고 free radical반응이 더 심하게 일어난 간 조직에서 노화진행이 그만큼 촉진되었음을 알 수 있었다. 간소라디칼반응이 항진된 원인을 규명코자 간 조직에서 미토콘드리아와 세포질분획에서 항산화효소의 활성을 조사한 결과, SOD와 glutathion reductase활성이 감소되었으며 노화나 지질과산화가 심하게 진행되었던 간 조직에서 이들 항산화효소의 활성감소가 심한 경향을 나타내었다. 생체는 free radical을 조절할 수 있는 다양한 항산화계가 존재하여 free radical을 효율적으로 제거함으로써 생체의 항상성을 유지할 수 있다. 이러한 항산화계에는 superoxide dismutase (SOD), glutathion (GSH) peroxidase, GSH reductase, GSH S-transferase, catalase등의 항산화효소가 있다. SOD는 반응성을 가진 산소species인 superoxide anion을 macrophage와 polymorphonuclear leucocyte의 항균작용같은 세포방어기구에서 중요한 역할을 한다. 원칙상 눈, 피부등의 byaus이 공기중의 산소에 노출되면 oxidative stress가 커짐으로서 조직이 훼손되나 SOD같은 효소에 의해 보호되고 손상이 방지되는 것으로 알려지고 있다. 실제로 신체부위에 적용해 보면 쉽게 활성상실이 일어나므로 fatty arid와 공유결합시켜 효과적으로 superoxide radical을 제거할 수 있다. AST의 활성은 Ovx군이 Sham군에 비해 2.11배 높게 나타났으며, ALT 활성은 변화가 나타나지 않았다. AST 활성에서는 각각의 물질을 투여한 군에서는 유의적인 감소 경향을 보였다. 과산화지질함량은 Ovx군이 Sham군에 비해 높게 나타났으며, 각각의 인삼추출물을 투여한 군에서는 62%∼72%의 저해률을 보였다. 항산화 효소들은 Sham군에 비해 Ovx군에서 낮게 나타났는데, 각 물질의 투여 군에서는 유의성있는 증가를 보였다. 이러한 결과에서 보듯이, 난소 절제로 생성된 많은 free radical은 항산화효소에 의해서 감소되었으며, 그리고 인삼 추출물이 항산화 효소 대신에 노화를 저해하는 작용을 하는 것으로 사료되었다.

• 대한의생명과학회지
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• 제2권1호
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• pp.21-30
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• 1996

Mitogen-activated protein (MAP) kinase는 여러 세포증식 촉진인자들에 의하여 자신이 인산화됨으로써 활성화되어 다른 protein kinase를 인산화시키는 역할을 하는 세포내 신호전달의 중요한 효소이다. 본 연구에서는 P388 murine leukemia 세포 파쇄액에서 SP sephadex C-50, phenyl superose, Mono Q column을 통하여 MAP kinase를 분리한 결과, 44 kD와 66kD의 isoform을 확인할 수 있었다. 면역 T 세포의 $p56^{kk}$의 N-terminal로부터 유전자 재조합 방법을 통하여 glutathion-s-transferase(GST) fusion protein을 얻은 후 분리한 MAP kinase의 기질로 사용하여 본 결과, wild type과 mutant간에 인산화 정도의 차이를 확인할 수 있어 MAP kinase의 또 다른 기질로 이용할 수 있는 가능성을 제시하였다.

• 분석과학
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• 제12권6호
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• pp.565-570
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• 1999

Bacillus stearothermopilus의 염색체 DNA로부터 polymerase chain reaction 법을 이용하여 ADH의 구조유전자를 증폭시킨 후, 발현 벡터 pGEX-KC에 삽입시켜 glutathion S-tansferase와 융합 단백질로 대장균에서 대랑 발현시켰다. 재조합 ADH는 $37^{\circ}C$에서 1 mM의 isopropyl-${\beta}$-D-thiogalactopyranoside로 단백질의 발현을 유도시켰으며, 발현된 단백질은 glutathione affinity 컬럼을 이용하여 정제하였다. 재조합 ADH는 에탄올에 높은 기질특이성을 나타내었으며 최적 pH와 온도는 각각 pH 9.0과 $70^{\circ}C$이었다. 또한 이 재조합 ADH는 본래의 효소보다 열에 안정하였다. 이 효소는 알코을 측정을 위한 효소학적 방법과 알코올의 공업적 생산에 이용될 수 있다.

• 생명과학회지
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• 제19권2호
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• pp.228-233
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• 2009

본 연구에서는 호랑나비의 용기 동안 혈림프, 지방체, 표피, 큐티클 및 중장에서 항산화효소의 활성을 조사하였다. 혈림프와 지방체에서 항산화효소 활성의 변화가 두드러지게 나타났다. SOD, CAT 및 GST의 활성은 높은 활성을 보인 반면, GPX와 GR은 상대적으로 활성이 매우 낮으므로 곤충의 변태기 동안 항산화과정에서 이들 효소의 역할은 매우 미미할 것으로 생각된다. 더불어 CAT의 활성은 대부분의 조직에서 용화 직후에 높은 활성을 보이며 상대적인 활성도 매우 높게 나타나고 있어 과산화수소의 분해에는 GPX보다는 CAT가 주로 관여할 것으로 생각된다. 또한 GPX와 GR의 활성보다는 GST의 활성이 전 조직에서 비교적 높게 나타나는 것으로 보아 lipid peroxidation을 통한 항산화 과정에도 GPX보다는 주로 GST가 관여할 것으로 생각된다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1997년도 춘계학술대회
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• pp.95-95
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• 1997

Among the various receptor molecules discovered so far the ${\beta}$2-adrenergic receptors have been regarded as excellent model systems for the so called 7 transmembrane helix receptor and have been the focus of extensive studies. For the analysis of receptor structure and function a monoclonal antibody plays a crucial role, thus providing useful tools for the study of receptor. However, because of the minute quantity of receptor molecules which could be obtained from natural sources, the generation of specific monoclonal antibody against receptor molecules from the purified receptors has been regarded as virtually impractical in consideration of cost and experimental times. The purpose of the present study was to generate and characterize a monoclonal antibody against human ${\beta}$2-adrenergic receptor. For the production of antibody, C-terminal regions of the human ${\beta}$2-adrenergic receptor was produced as a fusion protein with Glutathion S-transferase (GST) in E. Coli. The expression of the fusion protein was identified by SDS-PAGE and Western blot using monoclonal anti-GST antibody. The fusion protein was purified to an apparent homogeniety by affinity chromatography with Glutathion Sepharose CL-4B and used as an antigen for the immunization of BALB/C mice. The Production of monoclonal antibody was achieved by fusion of the immunized spleen cells and SP/2-0 myeloma cells. Positive hybridomas were screened by ELISA and were cloned by two consecutive rounds of limiting dilution. The monoclonal antibody produced in this study (mAb${\beta}$C02) was IgM type and purified by immunoaffinity chromatography using anti-mouse IgM agarose as an affinity matrix. MAb${\beta}$C02 showed strong and specific immunoreactivity against both the fusion protein and human ${\beta}$2-adrenergic receptor in ELISA and Western blot. The molecular weight of immunoreactive band was 64 kDa and exactly coincided with the previously reported molecular weight of ${\beta}$2-adrenergic recepters. The results of the present study suggest that mAb${\beta}$C02 may be used for the study of receptor function and regulation in normal or nonphysiological status.

• 한국식품영양학회지
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• 제11권1호
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• pp.114-122
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• 1998

표고버섯의 열수 가용성 다당류(PS)와 간 장해물질이며 발암성을 갖는 butter yellow를 흰쥐의 식이에 6주간 투여하여 혈장과 간의 효소활성 및 과산화지질의 함량을 측정한 결과는 다음과 같다. 1. 혈장 중 GOT 활성은 better yellow 첨가군(BO군)보다 PS의 투여군(BP군 : BO+PS)이 비교적 낮은 수준을 나타내었으며 ${\gamma}$-GTP와 GPT 활성에서도 BO군에 비하여 BP군에서 유의하게 낮은 활성을 나타냈다. 2. 간장 중 glutathion peroxidase, catalase 및 lactate dephdregenase 활성 또한 기초식이군(NO군)에 PS를 토여한 군(NP군)은 NO군과 유의한 차이가 없었으나 BP군은 BO군에 비하여 유의하게 낮은 수준이었다. SOD활성은 각 군간에 유사한 수치로 유의적인 차리를 보이지 않았다. 3. 간장의 microsomal 분획분 및 cytosol 분획분 중의 glutathione S-transferase 활성도는 BP군이 BO군보다 유의하게 낮은 수준을 보였으나 better yellow를 첨가하지 않은 NO군에 비하여 상당히 높은 수준을 나타내었다. 4. 간장 내 glutathione과 malondialdehyde의 함량 또한 PS의 투여로 생성이 저하되는 것으로 나타났다. 이상의 결과를 보아 표고버섯의 열수 추출물은 생체조직의 지질의 과산화를 방지하므로써 better yellow에 의한 간장장애의 치료 또는 독성을 완화하는 효과가 있는 것으로 사료된다.

• 한방안이비인후피부과학회지
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• 제15권1호
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• pp.127-139
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• 2002

This study was carried out to prove the therapeutic effects of BNJB on the catract. The objects of this study were CXSD mice that spontaneously eye rupture occurred from three weeks after birth and eventually generate cataract within 12 weeks. We applied eyewash made from BNJB to eyes of CXSD mice twice in a day till all the eyes of the negative control showed up the symptoms of a cataract and recorded the increasing patterns of cataractous eyes. To explained the therapeutic effects of the BNJB, We carried out the ex vivo experiment which cultivating eyeballs were offered oxidative stress condition by $0.03{\%}$ $H_2O_2$ during three days. Total co-enzyme was extracted from the cultured eyeballs and used to measure activities of catalase, superoxide dismutase, glutathion S-transferase and content of GSH. The results were obtained as follows: 1. When we treated the catalin to CXSD mouse as a positive control, it represented the delaying effect for cataract generation for 2-3 days compare with negative control. But it seems that it doesn't appropriate as a therapeutic, or delaying agent. 2. In the experimental BNJB group, Cataract formation rate was dramatically reduced by BNJB. This rate was much lower than positive group and means our new formulation for the therapy of cataract has a good potential. 3. In the analysis of individual medicines of BNJB, Mok-Jeok-Cho, Hwang-Lyun and Ha-Go-Cho didn't have a major effect of BNJB. 4. The cataract formation rate was repressed by Bing-Pyun and Jin- Joo-Boon about $40{\%}$ and $50{\%}$, respectively. We can presume that the anti-cataract effect of BNJB was caused by these two medicines. 5. When we surveyed the anti-oxidant activities of BNJB, enzyme activities of GSH, SOD, and Catalase increased about $10{\%},\30{\%}$, and 2.5 folds, respectively.