목적: 당원병 Ia형(von Gierke disease)은 glucose 6-phosphatase (G6Pase)의 결함으로 인하여 출생 시부터 복부팽만과 간종대가 나타나고 저혈당, 락트 산혈증(lactic acidemia), 고지방혈증(hyperlipidemia), 고뇨산혈증(hyperuricemia) 등을 초래하며 점차 성장발육부전이 진행되는 상염색체 열성 유전성 질환이다. 본 연구에서는 한국인 GSD Ia 환자 9명을 대상으로 G6Pase 유전자의 돌연변이형에 관한 분석을 처음으로 시행하고자 하였다. 방법: 임상적인 증상과 G6Pase 효소 측정결과를 통하여 GSD Ia로 진단된 9명 환자의 혈액에서 genomic DNA를 분리하여 G6Pase 유전자의 5개 exon 부분이 포함되도록 polymerase chain reaction(PCR) 한 후 PCR 산물을 direct sequencing 하였다. 결과: 9명의 GSD Ia 환자 중 7명 환자에서 g727t homozygote 돌연변이를 발견하였고, 한 환자는 heterozygote로서 g727t 돌연변이와 c611g 돌연변이가 발견되었다. 나머지 한 명에서는 g727t 돌연변이 하나만 발견할 수 있었다. 한 개의 allele에서 발견된 c611g 돌연변이는 exon 4의 178번 아미노산 proline이 alanine으로 변경되는 것으로 지금까지 보고된 바 없는 새로운 돌연변이이다. 결론: 현재까지는 GSD Ia병의 정확한 진단을 위해서 환자의 간 생검 조직에서 G6Pase 효소의 활성도를 측정하는 것이 필요하였으나 한국인 GSD Ia 환자의 경우 g727t 돌연변이가 대부분을 차지하고 있기 때문에 앞으로는 상당수의 환자에서 혈액 채취만으로도 G6Pase 유전자 분석을 통한 GSD 진단이 손쉽게 이루어질 수 있으리라고 생각된다.
Cyclohexane에 의한 생체장기의 독성을 검토할 목적으로 흰쥐에 체중 kg당 1.56 g의 cyclohexane을 복강으로 1일 1회 2일 간격으로 4회 투여한 다음 24시간 후에 처치하여 각 장기 (간, 신장, 비장, 심장, 소장, 위 및 폐)의 체중 당 장기무게 (%)와 조직세포중 glucose-6-phosphatase (G6Pase) 활성변동을 측정한 결과, 실험군의 체중 당 폐무게가 대조군에 비하여 현저하게 증가 (p<0.001)하였고 이와는 반대로 G6Pase 활성은 유의한 (p<0.001) 감소를 나타내었다. 그러나 폐를 제외한 장기에서는 별다른 차이를 볼 수 없었다. 이러한 결과는 cyclohexane이 주로 폐조직에 독작용을 야기시킨다는 것을 시사해 주고 있으며, 폐조직에서 malondialdehyde 함량이 대조군에 비하여 유의하게 (p<0.05) 증가된 것이 이를 뒷받침 해 주고 있다. 한편, cytochrome P450에 의해 나타나는 aniline hydroxylase 활성은 폐조직이 간조직에 비하여 대단히 낮았으며, alcohol dehydrogenase (ADH) 활성 역시 간조직 보다 현저하게 낮게 나타났다. 그리고 cyclohexane 투여로 인하여 ADH 활성은 간 및 폐조직 모두에서 증가하였으나 간조직에서 더욱 민감한 반응을 나타내었다. 이상 실험결과를 종합해 볼 때, cyclohexane은 폐조직에 주로 독성을 나타내며 이는 간조직에서 대사된 cyclohexane의 독성 중간대사산물인 cyclohexanone이 혈류를 통해 폐조직에 분포되어 나타난 결과로 사료된다.
Streptozotocin(STZ 55mg/kg., I.P. injection)으로 유발된 당뇨성 Sprague Dawley계 수컷 흰쥐에 있어서, 돌복숭아(Prunu persica Batsch var. davidiana Max.) 생리활성 추출액(5.0 g% extract)의 급여에 의한 혈당, 혈청지질 개선 효과 및 간 기능 효소의 활성 변화를 생리생화학적 측면에서 검토하기 위하여 본 실험을 수행하였다. 기본 식이 만을 급여한 대조군을 비롯한 STZ 당뇨 유발군과 당뇨 유발군에 돌복숭아 추출액을 급여한 군을 5주간 실험 사육한 결과, 혈당 농도는 당뇨 유발군에 돌복숭아 추출액을 급여하므로서 유의적으로 저하됨을 관찰할 수가 있었다. 또한 혈청 총 콜레스테롤, 동맥경화지수, LDL, LDL-콜레스테롤, 유리 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르비, 중성지방, 인지질 농도 등도 돌복숭아 추출액을 급여한 군에서 농도가 감소되는 것으로 나타났다. 반면, 총 콜레스테롤에 대한 HDL -콜레스테롤 비 등은 추출액 급여로 인해 높게 나타났다. 한편, 혈청 AST, 혈청 ALT, LDH 및 ALP 활성은 당뇨 유발군에 돌복숭아 추출액 급여에 의해 저하되는 것 등으로 미루어 보아, 돌복숭아 중의 생리 활성 물질이 혈당 조절 기능 이상, 혈청 지질 대사 이상 및 간 기능 장애 등에서 오는 성인병 예방 차원 및 개선 작용에 효과가 있을 것으로 생각된다.
We investigated the role of $Ca^{2+}$ and protein kinases/phosphatases in the stimulatory effect of insulin on glucose transport. In isolated rat adipocytes, the simple omission of $CaCl_2$ from the incubation medium significantly reduced, but did not abolish, insulin-stimulated 2-deoxy glucose (2-DG) uptake. Pre-loading adipocytes with intracellular $Ca^{2+}$ chelator, 5,5'-dimethyl bis (o-aminophenoxy)ethane-N,N,N'N' tetraacetic acetoxymethyl ester (5,5'-dimethyl BAPTA/AM) completely blocked the stimulation. Insulin raised intracellular $Ca^{2+}$ concentration $([Ca^{2+}]_i)$ about 1.7 times the basal level of $72{\pm}5$ nM, and 5,5'-dimethyl BAPTA/AM kept it constant at the basal level. This correlation between insulin-induced increases in 2-DG uptake and $[Ca^{2+}]_i$ indicates that the elevation of $[Ca^{2+}]_i$ may be prerequisite for the stimulation of glucose transport. Studies with inhibitors (ML-9, KN-62, cyclosporin A) of $Ca^{2+}-calmodulin$ dependent protein kinases/phosphatases also indicate an involvement of intracellular $Ca^{2+}.$ Additional studies with okadaic acid and calyculin A, protein phosphatase-1 (PP-1) and 2A (PP-2A) inhibitors, indicate an involvement of PP-1 in insulin action on 2-DG uptake. These results indicate an involvement of $Ca^{2+}-dependent$ signaling pathway in insulin action on glucose transport.
인삼은 건강에 효과적인 약초라고 알려져 왔다. 인삼의 열매인 진생베리는 인삼의 주성분과 비슷한 ginsenoside, saponin, polyphenol, polyacetylene, alkaloid 등의 성분을 포함한다. 본 연구의 목적은 인삼과 같이 진생베리 열수 추출물(Ginseng berry water extract, GBE)이 당뇨와 연관된 세포 외 효소와 인슐린 신호전달 경로에 있는 분자의 발현에 어떤 효과를 가지고 있는지를 조사하였다. ${\alpha}$-Amylase와 ${\alpha}$-glucosidase는 섭취한 다당분자를 분해하여 포도당을 생성함으로 항당뇨 약물개발의 표적 효소이다. GBE에 의한 두 효소의 활성 억제능을 in vitro에서 측정하였으나 최고 $1,000{\mu}g/ml$ 농도에서도 효소활성 억제능이 나타나지 않았다. 인슐린 신호전달 경로의 영향을 확인하기 위해서 HepG2 세포에서 GBE에 의한 인슐린 신호전달 경로의 주요 단백질인 protein-tyrosine phosphatase 1B (PTP1B)와 Akt1의 발현수준 변화를 Western blot 방법으로 조사하였다. 이때 인슐린에 의한 이들 분자의 변화에 GBE가 영향을 주는 것으로 나타났다. PTP1B는 인슐린에 의해 증가된 발현량이 저농도의 GBE이 의해 더욱 증가하였으나, $200{\mu}g/ml$ 농도의 GBE에 의해서는 다소 감소하는 것으로 나타났다. 또한, Akt1도 인슐린에 의해 증가된 발현량이 GBE 농도에 따라 감소하는 것으로 나타났다.
Objective: Cows that are nursing get around 80% of their glucose from liver gluconeogenesis. Propionate, a significant precursor of liver gluconeogenesis, can regulate the key genes involved in hepatic gluconeogenesis expression, but its precise effects on the activity of enzymes have not yet been fully elucidated. Therefore, the aim of this study was to investigate the effects of propionate on the activity, gene expression, and protein abundance of the key enzymes involved in the gluconeogenesis of dairy cow hepatocytes. Methods: The hepatocytes were cultured and treated with various concentrations of sodium propionate (0, 1.25, 2.50, 3.75, and 5.00 mM) for 12 h. Glucose content in the culture media was determined by an enzymatic coloring method. The activities of gluconeogenesis related enzymes were determined by enzyme linked immunosorbent assay kits, and the levels of gene expression and protein abundance of the enzymes were detected by real-time quantitative polymerase chain reaction and Western blot, respectively. Results: Propionate supplementation considerably increased the amount of glucose in the culture medium compared to the control (p<0.05); while there was no discernible difference among the various treatment concentrations (p>0.05). The activities of cytoplasmic phosphoenolpyruvate carboxylase (PEPCK1), mitochondrial phosphoenolpyruvate carboxylase (PEPCK2), pyruvate carboxylase (PC), and glucose-6-phosphatase (G6PC) were increased with the addition of 2.50 and 3.75 mM propionate; the gene expressions and protein abundances of PEPCK1, PEPCK2, PC, and G6PC were increased by 3.75 mM propionate addition. Conclusion: Propionate encouraged glucose synthesis in bovine hepatocytes, and 3.75 mM propionate directly increased the activities, gene expressions and protein abundances of PC, PEPCK1, PEPCK2, and G6PC in bovine hepatocytes, providing a theoretical basis of propionate-regulating gluconeogenesis in bovine hepatocytes.
The endocrinology of type 2 diabetes (T2D) and its predisposing factors have been studied extensively while its skeletal effects have received negligible research despite this being a global disease. The cellular and molecular association between proximal humeral fractures and T2D has not been fully elucidated. We aimed to study bone cell quantities and immunolabel osteogenic and antiosteogenic cytokines. The study used 12-week-old rats (23 males) consisting of 8 Sprague Dawley (SD) and 15 Zucker Diabetic Sprague Dawley (ZDSD). Weekly mass measurements were taken while fasting blood glucose levels were recorded every 2 weeks with oral glucose tolerance tests conducted once every 4 weeks. Upon termination at the age of 28 weeks, humeri were fixed in 10% buffered formalin, prior to decalcification in ethylenediaminetetraacetic acid. The bone samples were then processed in ascending grades of alcohol using an automatic processor before embedding in paraffin wax. Sections were cut at 5 ㎛ thickness in a series for Haematoxylin and Eosin stain, and immunohistochemistry was performed with the anti-tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP), anti-alkaline phosphatase (ALP), anti-bone morphogenetic protein 3 (BMP3), anti-transforming growth factor beta 1 (TGFβ1), anti-aged glycation end product (AGE) antibodies in the sequence. ZDSD rats had more adipocytes, BMP3 and AGEs expression with higher numbers of TRAP positive osteocytes and fewer ALP cells although no differences were found in TGFβ1 immunopositivity. We also found that T2D increases the number of AGEs immuno-positive cells, as well as its extracellular expression, thus providing a conducive environment for the interaction of the osteogenic cytokine and its antagonist to suppress osteoblastogenesis. ZDSD groups had higher adipocyte numbers therefore increased marrow adiposity in T2D.
The purpose of this study was designed to observe the effects of the feeding Cynanchum wilfordii extract on the improvement of the blood glucose, lipid components in the serum of dietary hyperlipidemic and streptozotocin(STZ) -induced diabetic rats(S.D. strain, ♂) fed the experimental diets for 5 weeks. Concentrations of total cholesterol, atherosclerotic index, LDL, LDL-Cholesterol, free-cholesterol. cholesteryl ester, TG, PL and blood glucose in serum were significantly higher in the cholesterol administration groups((group 2(cholesterol+water), 4(cholesterol+Cynanchum WIlfordii 3.5g% extract)) than those in the control group (group1 , basal diet+water). But the concentrations of total cholesterol. atherosclerotic index, LDL, LDL- cholesterol. free-cholesterol, cholesteryl ester, TG, PL and blood glucose in serum were remakably lower in the group 4 than those in the group 2. In the STZ(55mg/kg B.W.)-induced diabetic groups((group 3(STZ, IP.)+water), 5(STZ(IP.)+Cynanchum WIlfordii 3.5g% extract? the serum total cholesterol, atherosclerotic index, LDL, LDL-cholesterol, free-cholesterol. cholesteryl ester, TG, PL and blood glucose concentrations actions were rather lower in the group 5 than those in the group 3. In the ratio of HDL -cholesterol concentration to total cholesterol and HDL-cholesterol concentration, Cynanchum wilfordii extract administration groups were higher percentage than III the groups 2 and 3. The activities of aspartate aminotransferase(AST), alanine aminotransferase(ALT), alkaline phosphatase (ALP) and lactate dehydrogenase(LDH) in serum were rather lower in the Cynanchum wllfordii extract administration groups (group 4,5) than in the cholesterol diet group(group 2) and STZ-induced diabetic group (group 3). From the above research, the physiological activity substances in Cynanchum wllfordii were effective on the improvement of the blood glucose, lipid compositions in serum of dietary hyperlipidemic and STZ-induced diabetic rats. And particularly, physiological activity substance in Cynanchum wilfordii was more effective therapeutic regimen for the control of metabolic derangements in adult disease.
본 연구에서는 수온 증가에 따른 북방전복 (Haliotis discus hannai) 과 둥근전복 (H. discus discus) hemolymph의 생리 및 면역학적 변화를 관찰하기 위하여 위 두 종을 20, 22, 24, 26 및 $28^{\circ}C$ 수온에 각각 4 일간 노출시켰다. 노출 결과, hemolymph의 total-protein (TP), glucose, 칼슘 (Ca) 은 둥근전복이 북방전복보다 높은 값을 보였으나, 마그네슘 (Mg), alkaline phosphatase (ALP) 및 lysozyme은 두 종에서 유사한 값을 보였다. 수온 증가에 따른 hemolymph의 TP, glucose 및 마그네슘은 두 전복 모두에서 유의한 변화가 관찰되지 않았다. 그러나 칼슘과 면역관련 인자인 ALP 및 lysozyme은 둥근전복에서 유의한 차이가 없었으나, 북방전복에서는 $26^{\circ}C$ 또는 $28^{\circ}C$의 고수온에 노출되었을 때, 유의하게 높은 활성을 보였다. 한편 phenoloxidase (PO)는 북방전복에서 높은 값을 보였으며, 수온이 높을수록 증가하는 경향을 보였다. 결론적으로 북방전복은 둥근전복과 달리 여러 지표에서 유의한 변화가 관찰된 것으로 보아 북방전복이 둥근전복보다 고수온에 보다 민감한 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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