• 한국미생물·생명공학회지
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• 제25권1호
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• pp.15-22
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• 1997

A bacterial strain J-59 was isolated from a humus soil, which produced simultaneously a thermostable glucose isomerase as well as xylanase. The morphological, cultural and physiological characteristics of the isoisomerase strain J-59 were detemined by the use of the media and methods described in International Streptomyces Project. The chemotaxonomic characteristics of the isolated strain J-59 were determined by the analysis of G+C molar % of DNA, diaminipimelic acid, composition of fatty acid and menaquinone. As the results of various examinations, the strain J-59 was identified to be Streptomyces chibaensis. This strain produced glucose isomerase intracellularly and xylanase extracellularly when grown in a medium containing xylan, but it was not able to utilize the xylose or xylan as a carbon source. The glucose isomerase of S. chibaensis J59 was highly thermostable, which retained more than 75% activity in the presence of Co$^{2+}$ at 80$\circ $C for 72 h.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제4권4호
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• pp.145-151
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• 1976

토양에서 분리한 glucose isomerase 생산균주 Streptomyces sp. K-14 (KFCC 35051)를 시험균주로 선정하여 몇가지 glucose isomerase 생산의 최적조건을 규명하여 다음의 결과를 얻었다. 1. 본 균주는 탄소원으로 xylose 대신 xylan에서도 glucose isomerase가 유도되며, xylan의 최적농도는 1~2%였다. 2. 유기태 질소원으로 corn steep liquor를 사용할때에 glucose isomerase 생산이 가장 양호하였고 무기태 질소는 거의 영향이 없었다. corn steep liquor의 최적농도는 1～2%였다. 3. 본균주의 효소생산에 무기이온으로 $Mg^{＋＋}$과 Co$^{＋＋}$만이 영향이 있었고 기타의 무기이온은 영향이 없었으며, 그 최적농도는 $MgSO_4$$7H_2O$로서 4.0mM이고 $CoSO_4$ㆍ$7H_2O$로서 1~2mM이였다. 4. 본 균주의 효소생산 최적pH는 7.0~7.5였다. 5. 밀기울 및 옥수수혜축을 사용한 효소생산 최적배지조성은 밀기울및 옥수수혜축 3%, 분말 corn steep liquor 2%, $MgSO_4$$7H_2O$ 0.1% 및 $CoSO_4$$7H_2O$ 0.012%이며, 최적 배양조건은 배지의 pH 7.0, 통기량 1.5~2$\ell$/min, 회전수 200rpm,배양온도 $30^{\circ}C$에서 약 40시간 배양하여 최대 효소활성을 나타내었다. 이상의 결과를 검토한바 Streptomyces sp. K-14(KFCC 35051) 균주는 glucose isomerase 생산을실용화하는데 적합한 균주라고 생각된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권3호
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• pp.296-302
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• 1991

소나무 숲 토양에서 방선균을 666주 선별한 후 이중 glucose isomerase 생산성이 우수하고 (488U/ml) 40 포도당액의 이성화율이 5%3에 도달하는 TH34 균주를 선별하였다. 이 균주는 세포벽을 구성하는 diaminopimelic acid(DAP), 기균사의 색깔, spiral type의 spore 사슬의 형태, melanoid 색소형성, 탄수화물 이용성 및 전자현미경 사진등으로 미루어 보아 Streptomyces luteogriseus로 동정하였다. 분리 동정한 S.luteogriseus의 발효조건 및 배지조성 등을 검토하여 본 결과 28~$29^{\circ}C$에서 효소생산이 최대이었으며 pH 6.0~8.0의 넓은 범위에서 안정한 효소생산을 보였다.

• 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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• 한국미생물생명공학회 1976년도 제8회 학술발표회
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• pp.190.3-190
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• 1976

본 균주가 생성하는 glucose isomerase에 관한 제성질에 대해서는 전보에 이미 발표한 바 있다. 금반에는 isomerase 생성에 있어서 제요인의 검토의 일환으로 비증식상에서 inducer로서 0.5％ Xylose를 첨가해 주었을 때의 효소생성능에 관하여 검토하였다.(중략)

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제8권3호
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• pp.173-180
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• 1980

Streptomyces sp. strain K-17의 포도당 이성화효소의 강력한 분비를 위해서는 inducer로서 D-xylose를 필요로 하고 있다. 그런데 D-xylose를 가하지 않고 1.0% glucose를 가한 배지에서 배양한 이성화효소 역가가 낮은 균체를 모아서 이것을 다시 0.05M인 산 완충액 (PH7.0)에 현탁시켜 0.5 % xylose를 가하여 호기적으로 해주었을 때 효소의 induction pattern을 조사한 결과 효소활성이 10시간까지는 처리 시간에 따라 직선상으로 증가하고 이에 비례해서 D-xylose의 양이 감소했으나 cell mass에 있어서는 거의 변동이 없었다. 이때 효소단백의 합성이 일어나고 있지만, 전 RNA함량에 있어서는 오히려 감소하였다. 이와 같이 질소원을 가하지 않는 non-growth phase에서도 효소단백의 합성이 일어나는 것은 세포내에 축적되어 있는 단백질의 turn-over에 의한다는 것을 starvation 실험에서 알 수 있었다. D-xylose 이외에 D-ribose, L-arabinose, D-glucose, D-mannose, citrate, succinate 및 tartrate는 inducer로서의 효과가 없었다. 효소의 induction시, D-glucose를 가했을 경우catabolite repression 이 일어났으며 succinate 나 citrate 에 의해서도 강하게 효소생성이 억제되었다. 이와 같은 현상은 growth phase에서도 마찬가지 결과를 나타내었다. Induction시, $Ba^{2+}$, $Mg^{2+}$ 및 $Co^{2+}$가 효소생성을 발전시켰으며, C $u^{2+}$, C$d^{2+}$, A $g^{+}$ 및 H $g^{2+}$ 와 같은 중금속이 효소생성을 저해하였고, mitomycin C 몇 penicillin G는 효소생성에 영향을 주지 못하였으나, actinomycin D, streptomycin, chlora-mphenicol 및 tetra cycline등에 의해 강하게 저해되었다. 또 p-CMB 및 uncoupler 인 arsenate와 2.4-DNP에 의해서도 효소생성이 저해되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제4권4호
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• pp.138-144
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• 1976

Xylose를 효소 유도물질로한 배지에서 glucose isomerase를 생산하는 균주를 분리하기 위하여 전국각지의 토양시료 150점에서 약 280주의 Streptomyces속 균주를 분리하여 그 중에서 효소 활성능이 높은 5주를 분리하였다. 이들 균주의 성질을 조사한 결과, 서로 다른 균종임을 확인하고 분류가 완성될 때까지 Streptomyces(st) spp. K-14, K-53, K-71, K-77 및 K-733 이라 부르기로 하였다. 특히 K-77과 K-733균주는 포자 표면이 침상형임으로 다른 균종과 완전히 구별되었다. 이들 균주 중에서 K-14균주는 효소 활성능이 가장 양호하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권3호
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• pp.198-201
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• 1989

토양에서 분리, 동정한 Steptomyces sp. GI 32의 glucose isomerase 생산은 sorbitol 1%, yeast extract 0.4%, tryptore 0.6%, 1 mM Fe$_2$(SO$_4$)$_3$의 조성을 가진 배지에서 초기 pH 7.0으로 조절하여 35$^{\circ}C$에서 약 18시간 진탕배양시 효소생산량이 최고로 240 units/mg이었다. 효소는 ammonium sulfate 분획, DEAE cellulose chromatography 등의 과정을 거쳐 부분정제한 결과 3배정도 효소 비활성이 증가하였다. 효소활성의 치적온도는 7$0^{\circ}C$이며, 최적 pH는 8.0이었다. 특히 효소의 열안정성이 7$0^{\circ}C$에서 1시간 가열하여도 전혀 실활되지 않았다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제44권3호
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• pp.113-118
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• 2001

Xylose (glucose) isomerase was purified to homogeneity from cell-extracts of Streptomyces chibaensis J-59 via ammonium sulfate precipitation followed by chromatography on DEAE-cellulose, and gel filtration on Sephacryl S-300. The purified enzyme is a homotetramer with a native molecular mass of 180 kDa and a subunit molecular mass of 44 kDa. The amino acid N-terminal sequence of glucose isomerase from S. chibaensis J-59 was determined to be Ser-Tyr-Gln-Pro-Thr-Pro-Glu-Asp-Arg-Phe-Thr-Phe-Gly-Leu. The first 14 amino acids of the N-terminal sequence of the enzyme showed strong analogies with N-terminal sequences of glucose isomerase produced by other Streptomyces spp. The optimum pH and temperature for activity were 7.5 and 85, respectively. The purified enzyme required $Mg^{2+}$, $Co^{2+}$, and $Mn^{2+}$ for the activity, $Mg^{2+}$ being the most effective. The enzyme was not inhibited by $Ca^{2+}$, but was inhibited by $Hg^{2+}$, $Ag^+$, and $Cu^{2+}$. The $K_m$, $V_{max}$, and $k_{cat}$ values of S. chibaensis J-59 isomerase for glucose were 83 mM, 40.9 U/mg, and $1,843min^{-1}$, respectively. In the presence of $Co^{2+}$, cell-free enzymes retained 100% without loss of activities by the heat-treatment at $70^{\circ}C$ for 7 days. The enzyme retained 50% residual activity after heating at $85^{\circ}C$ for 13.5 h, at $90^{\circ}C$ for 126 min. The enzyme is more thermostable than any other glucose isomerases of Streptomyces spp.

• 미생물학회지
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• 제23권2호
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• pp.138-146
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• 1985

포도당 이성화효소를 coding는 Bacillus licheniformis ATCC31667의 유전자를 Escherichia coli LE 392-6에 클로닝하였다. Bacillus lieheniformis 염색체 DNA를 분리하고 제한효소인 Pst I.HindIII, Sal 1, EcoR 1, BamH1으로 절단한 후 운반제 plasmid인 pBR332에 연결하고 포도당 이성화효소 negative인 E. coli LE 3926-6에 형질전환하였다. 이중 E채꺄 제한효소를 사용한 것만이 glucose isomerase positive로 전환되어 xylose를 유일 탄소원으로 하여 성장하였다. 이 제조합 plasmid를 제한효소로 처리하여 본 결과 4.1Kb의 Bacillus licheniformisdb전자가 옮겨 졌음을 확인했고 여기에 제한효소 HindII와 Puv II의 절단위치가 확인되어 제한요소 지도를 작정하였다. 이 재조합 plasmid pBGI6는 연속계대 10일 후에도 매우안정하게 유지되었다. 한편 포도당 이정화 효소의 안정을 측정하여 본 바 야생숙주에 비해 약 20배의 증가를 나타냈다.

• 한국식품영양학회지
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• 제11권3호
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• pp.319-322
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• 1998

본 실험에서는 GI 활성이 높은 alkalophilic Streptomyces sp.를 사용하여 2% $ extsc{k}$-carrageenan에 균체를 고정화 균체의 효소학적 특성을 살펴보았다. pH stability는 pH가 7.5~8.5에서 GI 활성이 가장 높았으며, reaction temperature는 7$0^{\circ}C$, Co2+는 10-3M, Mg2+는 10-3M일 때 GI 활성이 가장 높은 것으로 나타났다.