Kim, Seong-Ryul;Choi, Kwang-Ho;Kim, Sung-Wan;Park, Seung-Won
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제33권2호
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pp.113-120
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2016
Bombyx mandarina is widely accepted as ancestor of B. mori. Silkworms are served as well-characterized models for understanding the mechanism for the genetic regulation of development. In this study, we performed RNA-Seq analysis to examine tissue-expression of gloverin isoforms of the silk-gland, mid-gut, and fat body in B. mandarina. BLAST analysis revealed that four gloverin isoform gene sequences of B. mandarina were highly similar to B. mori. To identify the difference between two species, the expression profile of gloverin was measured by semi- RT-PCR analysis. The specific expression of gloverin isoform genes was observed mainly in the fat body from B. mori but not B. mandarina. However, all of tissues in the wild-type silkworm could induce the upregulation of compared with the B. mori. To validate the sudden increase in gloverin gene expression in the mid-gut tissue of B. mandarina, we were using qRT-PCR. Relative mRNA expression rate of gloverin at the wild-type silkworm was much higher than domestic silkworm. Comparative genomics between domesticated and wild silkworms showed different tissue-expression levels in some of immune related genes. These results are suggesting a trend toward decreasing immunity related genes expression during domestication. Further studies are needed to elucidate the silkworm domestication and an invaluable resource for wild silkworm genomics research.
Understanding the mechanisms of cancer drug resistance is a critical challenge in cancer therapy. For many cancer drugs, various resistance mechanisms have been identified such as target alteration, alternative signaling pathways, epithelial-mesenchymal transition, and epigenetic modulation. Resistance may arise via multiple mechanisms even for a single drug, making it necessary to investigate multiple independent models for comprehensive understanding and therapeutic application. In particular, we hypothesize that different resistance processes result in distinct gene expression changes. Here, we present a web-based database, CDRgator (Cancer Drug Resistance navigator) for comparative analysis of gene expression signatures of cancer drug resistance. Resistance signatures were extracted from two different types of datasets. First, resistance signatures were extracted from transcriptomic profiles of cancer cells or patient samples and their resistance-induced counterparts for >30 cancer drugs. Second, drug resistance group signatures were also extracted from two large-scale drug sensitivity datasets representing ~1,000 cancer cell lines. All the datasets are available for download, and are conveniently accessible based on drug class and cancer type, along with analytic features such as clustering analysis, multidimensional scaling, and pathway analysis. CDRgator allows meta-analysis of independent resistance models for more comprehensive understanding of drug-resistance mechanisms that is difficult to accomplish with individual datasets alone (database URL: http://cdrgator.ewha.ac.kr).
배추 유래의 cytosolic glutathione reductase 유전자 (BcGR1)의 지속적 발현과 형질전환 식물체의 oxidative stress에 대한 내성과의 관계를 분석하기 위하여, BcGR1 유전자를 CaMV 35S promoter의 하류에 연결한 다음, 담배에 형질전환하였다. PCR 및 Southern blot 분석을 통하여 BcGR1 유전자가 정상적으로 삽입된 32 계통의 T$_{0}$ 식물체를 선발하였다. Northern blot 분석 결과, 도입된 유전자가 형질 전환 식물체 내에서 항상적으로 발현된다는 것을 확인하였으며, 도입 유전자의 copy number와 발현량 사이에는 정의 상관관계를 보이지 않았다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제17권2호
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pp.189-195
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2008
The sequence of hydroxypyruvate isomerase gene was obtained in NCBI. In this study, the hydroxypyruvate isomerase gene of Bombyx.mori was identified and annotated with bioinformatics tools. The result was confirmed by RT-PCR, prokaryotic expression, mass spectrographic analysis and sub-cellular localization. The hydroxypyruvate isomerase cDNA comtains a 783bp ORF, and has 4 exons. The deduced protein has 260 amino acid residues with the predicted molecular weight of 29169.30 Da, isoelectric point of 6.10, and contains conserved PRK09997 and Hfi domains. The hydroxypyruvate isomerases of Nasonia vitripennis and Bombyx mori have a high homology. Through RTPCR analysis, we found that this transcript was present in testis, ovary, blood-lymph, fat body, midgut, silk gland and tuba Malpighii. This protein was located in cytoplasm through immunohistochemistry. We submitted the cloned gene under the accession number EU344910. The enzyme has been classified under accession number EC 5.3.1.22.
Microarray gene expression technology has applications that could refine diagnosis and therapeutic monitoring as well as improve disease prevention through risk assessment and early detection. Especially, microarray expression data can provide important information regarding specific genes related with metastasis through an appropriate analysis. Various methods for clustering analysis microarray data have been introduced so far. We used twostep clustering fot ascertain metastasis related gene through t-test. Through t-test between two groups for two publicly available medulloblastoma microarray data sets, we intended to find significant gene for metastasis. The paper describes the process in detail showing how the process is applied to clustering analysis and t-test for microarray datasets and how the metastasis-associated genes are explorated.
Liang, Ying Shi;Bae, Hee-Jin;Kang, Sang-Ho;Lee, Theresa;Kim, Min Gab;Kim, Young-Mi;Ha, Sun-Hwa
Plant Biotechnology Reports
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제3권4호
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pp.325-331
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2009
To efficiently express a gene of interest in transgenic plants, the choice of promoter is a crucial factor as it directly affects the expression of the transgene that will yield the desired phenotype. The Arabidopsis ${\beta}-carotene$ hydroxylase 1 gene (AtBch1) shows constitutive and ubiquitous expression and was thus selected as one of best candidates for constitutive promoter analysis by both in silico northern blotting and semi-quantitative RT-PCR analysis. To investigate AtBch1 promoter activity, the 1,981-bp 5'-upstream region of this gene was fused with ${\beta}-glucuronidase$ (GUS) and transformed into Arabidopsis. Through the molecular characterization of transgenic leaf tissues, the AtBch1 promoter generated strong activity that drives 1.8- and 2-fold higher GUS expression than the cauliflower mosaic virus 35S (35S) promoter at the transcriptional and translational levels, respectively. Furthermore, the GUS enzyme activity driven by the AtBch1 promoter was 2.8-fold higher than that produced by the 35S promoter. By histochemical GUS staining, the ubiquitous expression of the AtBch1 promoter was observed in all tissues of Arabidopsis. Semi-quantitative RT-PCR analysis with different tissues further showed that this promoter serves as a strong constitutive driver of transgene expression in dicot plants.
Purpose : This study was aimed to investigate the inhibitory effect of Sparganii Rhizoma on the proliferation of human uterine leiomyoma cells and the expression of gene related the mechanism of cell apoptosis. Methods : This study was evaluated the number of death cells treated with indicated concentration of Sparganii Rhizoma and investigated cell death rate by MTS assay. Furthermore, fluorescence-activated cell sorter analysis and DNA fragmentation assay were used to dissect between necrosis and apoptosis. and then we observed the differential gene expression by western blot analysis. Results :1) The inhibitory effect on the growth of uterine leiomyoma cell treated with Sparganii Rhizoma was increased in a dose dependent manner. 2) As the result of FACS analysis, subG1 phase incrase was observed 23.49% inuterine leiomyoma cell treated with Sparganii Rhizoma at $500\;{\mu}g/ml$ compared to control.. 3) The gene expression of p53, p21 related cell apoptosis was increased according to increasing concentration but p27 was none exchanged. 4) The expression of cyclin A, D and E was decreased in a concentration proportional and then the dephosphorylation of pRb was increased. 5) The character of apoptosis, DNA fragmentation was significantly observed according to increasing concentration. 6) The expression of pro-caspase3 were decreased dependent on treatment concentration and activated PARP took place. Conclusion : The inhibitory effect of Sparganii Rhizoma on the proliferation of human uterine leiomyoma cells was observed with apoptosis and cell cycle arrest. These data suggest that Sparganii Rhizoma might be candidate of medical therapy for uterine leiomyoma.
US3 gene is a member of the human cytomegalovirus (HCMV) immediate early gene. Although the precise functions of the US3 gene in HCMV replication and pathogenesis are not known, it has been reported to play a role in inhibiting major histocompatibility class I antigen presentation. For further knowledge of US3 gene expression, rabbit polyclonal antiserum of the US3 gene product was used for indirect immunofluorescence assay. In permissive human foreskin fibroblast (HFF) cells, US3 gene expression was detectable as crescent or half-moon shape in the perinuclear region at immediate early times after virus infection. HFF cells infected with mutant HCMV lacking US3 open reading frames were negative for US3 immunofluorescence assay. Double immunofluorescence assay using monoclonal antibody to gamma adaptin (specific for the Golgi complex) and rabbit anti-US3 antiserum revealed that US3 gene product could be localized to the Golgi complex. At later time after HCMV infection, US3 gene products were detected as globular aggregates in the cytosol. These aggregates were positive for gamma adaptin and stained with preimmune serum, suggesting a nonspecific reaction to the Golgi complex. Northern blot analysis revealed that transcription of US3 was observed only during immediate early times after virus infection (until 6 h postinfection). Therefore US3 gene expression appears to be confined to immediate early time and its gene products are localized to the Golgi complex as crescent shaped forms in the perinuclear cytoplasm.
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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제31권6호
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pp.468-473
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2005
Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is the sixth most common malignancy worldwide. The molecular mechanisms involved in the development and progression of these carcinomas are not well known. Abnormalities of genomic methylation patterns have been attributed a role in carcinogenesis and local de novo methylation at tumor suppressor loci was held to be involved in silencing of tumor suppressor genes. Using Ms APPCR, we previously isolated a hypermethylated fragment corresponded to the 5' end of TPEF gene from primary liver and lung cancer cells. To confirm the inactivation of TPEF gene by hypermethylation in HNSCC, we investigated correlation between methylation pattern and expression of TPEF in 10 HNSCC cell lines. In methylation analysis such as combined-bisulfite restriction analysis(COBRA) and bisulfite sequencing, only RPMI 2650 showed none methylated pattern and another 9 cell lines showed dense methylation. The TPEF gene expression level analysis using RT-PCR showed that these 9 cell lines had not or significantly low expression levels of TPEF as compared with RPMI 2650. In addition, the increase of TPEF reexpression by 5-AzaC as demethylating agent in 9 cell lines also indicated that TPEF expression was regulated by hypermethylation. These results of this study demonstrate that epigenetic silencing of TPEF gene by aberrant methylation could play an important role in HNSCC carcinogenesis.
This study was conducted to investigate the effects of Woohwangcheungsimweun (ox bezoar), deer antlers, and wild ginseng on induction of cardiomyocyte differentiation using the established mouse embryonic stem (ES) cells. The expression of atrial natriuretic peptide (ANP) was highest in Woohwangcheungsimweun treatment group. The expression of rabbit anti-GATA-4(GATA-4) and troponin (TnI) were highest in wild ginseng and Woohwangcheungsimweun treatment groups, respectively. Fluorescence activated cell sorting (FACS) analysis showed that the expression of ANP was highest in Dimethyl sulfoxide(DMSO) and Woohwangcheungsimweun treatment groups. The expression of GATA-4 was relatively high in wild ginseng treatment group. The expression of TnI was highest in Woohwangcheungsimweun treatment group. In the gene expression analysis, DMSO greatly inhibited GATA-4 expression to 25% of control. Woohwangcheungsimweun treatment caused to increase cTnI and cardiac ANP expression significantly. Wild ginseng extract upregulated GATA-4 gene expression. In conclusion, DMSO widely used as cardiomyocyte differentiation inducer did not show significant effects on the expression of ANP, GATA-4 and TnI in this study. Woohwangcheungsimweun showed upregulation of ANP and TnI expression. Wild ginseng extract showed greater effects than DMSO on GATA-4 expression. These results might suggest that the combination of Woohwangcheungsimweun and wild ginseng extract treatment can be expected to increase expressions of all three genes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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