• 한국미생물·생명공학회지
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• 제35권3호
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• pp.250-254
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• 2007

식물 뿌리혹 선충인 Meloidogyne incognita에 살충성이 있는 Bacillus thuringiensis 108 균주를 분리 선별하였다. 이 균주는 Gram양성이며, 포자를 형성하고, 운동성이 활발하며, lecithinase 및 catalase활성을 나타내었다. 이 균주가 생산하는 결정형 내독소(d-endotoxin)는 bipyramid형이었고, 편모항원성에 따른 균주의 동정 결과 serotype 3으로 표준 균주인 B. thuringiensis subsp. kurstaki의 편모항원성과 일치하였다. B. thuringiensis 108균주의 항선충성 물질은 Sephadex G-25 gel filtration, 활성탄 흡착 chromatography, Silica gel 흡착 chromatography 및 Sephadex G-10 gel filtration을 이용하여 정제를 하였다. 최종 정제단계인 Sephadex G-10 gel filtration 후에 항선충 물질의 $LC_{90}$는 $1.2\;{\mu}g/ml$이었다. B. thuringiensis 108 균주가 생산하는 항선충성 물질은 $100^{\circ}C$ 열처리에서 안정하였으나 autoclave($110^{\circ}C$ 30 min)를 했을 때는 그 독성이 완전히 소실되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권4호
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• pp.385-391
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• 1989

토양으로부터 분리한 호알카리성 세균 Bacillus sp. No. 1911 파쇄하여 유안투석, DEAE-cellulose column chromatography, Sephadex G-150 gel filtration으로 포도당 이성화효소를 정제하여 효소적 특성을 조사하였다. 이 효소는 Sephadex G-200 gel filtration에서 분자량은 170,000으로 측정되었고 SDS-polyacrylamide 전기영동에서 43,000의 단일 band를 얻어, 이 효소는 4개의 동일한 subunit로 구성되었음을 나타내었다. 이 효소는 pH7.5 및 $65^{\circ}C$에서 최적활성을 나타내었으며 pH7.5에서 7$0^{\circ}C$ 까지 안정하였고 Co$^{++}$ 존재하에 6$0^{\circ}C$에서 30분간 가열하였을 때 pH 6-9까지는 비교적 안정되었다.

• KSBB Journal
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• 제8권3호
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• pp.287-294
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• 1993

사람의 뇨로부터 유용한 단백질을 동시에 분리하 기 위한 목적으로 효과적인 통합 분리정제 공정이 고안되었다. Ultrafiltration 방법을 이용한 농축과정 과 pH침전법을 전처리 단계로 사용하였고, 이어서 g gel filtration과 흡착, 이온교환, 친화, 그리고 역상 C column을 선택적으로 혼합한 chromatography를 수행하였다. 이 공정으로 정제한 urokinase, epider­m mal growth factor, albumin은 각각 SDS-poly­a acrylamide gel 전기이동상에서 단일의 단백질 띠로 이동하였고, 자신의 단백질 활성을 유지하고 있었다. 이들 세 가지 목적 단백질의 전체 수율은 각각 48 % %, 17%, 46%로 나타났다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제21권2호
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• pp.112-118
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• 1978

소의 갑상선에서 추출한 Xanthine oxidase를 disc gel eleectrophoresis로서 정제도(Purity)를 측정하여 Xanthine oxidase 이외의 다른 불순 단백질이 나타나지 않을 때까지 정제하였다. 그 정제 과정은 Pancreatin digestion, butanol 추출, ammonium sulfate 단백질 침전, calcium phosphate gel-cellulose column chromatography, gel filtration, preparative Sephadex G-25 column electrophoresis와 Preparative polyacrylamide gel electrophoresis 등을 포함하고 있다. 이러한 과정을 통하여 갑상선 Xanthine oxidase는 1,000배 정도 정제되었다. 그러나 효소의 비활성도(Specific activity)는 우유에서 추출한 이 효소에 상응하는 정도로 정제된 효소의 비활성도와 비교 되었을 때 지극히 낮았다. 갑상선 Xanthine oxidase도 효소 반응에 필요한 기질과 electron acceptor의 특수성(Specificity)이 어느 특수한 한 기질에 한정되지 않았음을 보였고 Kinetic 성질도 우유에서 추출된 Xanthine oxidase와 비교하였을 때 가장 일반적인 Xanthine oxidase 기질에 대한 Michaelis 상수(Km)가 약간의 예외도 있었으나 상당히 비슷하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제27권2호
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• pp.129-135
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• 1999

EH-1 was highest at 9 days of incubation. This regrowth and enzymatic activity of Haloarcular sp. EH-1 was highest at 9 days of incubation. This amylase was purified by acetone fractionation, DEAG-Cellulose column chromatography, 1st Sephadex G-75 gel filtration, CM-Cellulose column chromatography and 2nd Sephadex G-75 gel filtration. The amylase was purified about 98.64 fold with a yield of 11.75%. The molecular weight of amylase was estimated to be about 43,000and 40,000 by gel filtration and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, respectively, suggesting that the enzyme was a monomer. Amylase had an optimal temperature of 4$0^{\circ}C$, and an optimum pH of 7.0, and the thermal stability was observed the above 50% at 10$0^{\circ}C$ after 1 hour, and the stable range of pH was 6.0 to 8.0. The enzymatic activity was increased in the presence of 10 mM 2-mercaptoethanol, slightly by 10 mM SnCl2.2H2O.FeCl2.4H2O.CuCl2.2H2O.HgCl2.6H2O and SDS. End products from soluble starch were glucose, maltose and maltotriose, and Km value for soluble starch was 2.5mg/ml.

• Mycobiology
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• 제37권2호
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• pp.121-127
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• 2009

Purification and characterization of intracellular cellulase produced by A. oryzae ITCC-4857.01 are reported. The enzyme was purified by ion-exchange chromatography using DEAE-cellulose followed by Gel filtration. The purification achieved was 41 fold from the crude extract with yield of 27%. The purified enzyme showed single band on poly acrylamide gel. The molecular weight as determined by SDS-PAGE and gel filtration was 38 KDa and 38.6 KDa respectively and contained only one subunit. The enzyme is glycoprotien as nature and contained 0.67% neutral sugar. The apparent Km value of the enzyme against cellulose was 0.83%. The enzyme showed the highest relative ativities on CMC followed by avicel, salicin and filter paper. The optimum pH of activity was 5.5 and very slight activity was observed at or above pH 7.5 as well as bellow pH 3.5. The optimum tempreture of the activity was $45^{\circ}C$ and the highest activity was exhibited in 35 to $45^{\circ}C$. The enzyme lost their activities almost completely (95${\sim}$100%) at $80^{\circ}C$ or above and as well as bellow $25^{\circ}C$.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권4호
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• pp.313-320
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• 1989

세포내와 세포벽에 invertase가 존재하며 catabolite inhibition을 받지않고 세포외로 구성적으로 invertase를 생산하는 Rh. glutinis K-24를 공시균주로 선택하여 세포내와 세포벽 invertase를 정제한 후 정제효소의 효소화학적 성질을 밝혔다. 세포내 invertase는 DEAE-Sephadex A-50에 의한 Batchment, DEAE-Sephadex A-50 column chromatography, gel filtration on Sephadex G-200, isoelectric focusing 등의 조작에 의해 Disc 전기영동상 단일한 효소단백질까지 정제되었다. 세포벽 invertase는 B. pumilis에 의해 생산되는 세포벽 용해효소를 작용시켜 invertase를 용출 시킨 다음 DEAE-Sephadex A-50 column chromatography, gel filtration on Sephadex G-100의 조작에 의해 부분 정제하였다. 세포내와 세포벽 Invertase의 분자량은 각각 약 310,000과 67,000이었고 세포내 경우는 subunit 분자량이 약 70,000이었다. 세포내와 세포벽 효소의 반응 최적 pH와 온도는 모두 4.0와 6$0^{\circ}C$였으며 온도 안정성도 7$0^{\circ}C$까지 거의 비슷하게 나타났다. 그러나 Km값은 세포내 효소의 경우는 4.3x$10^{-3}$M이었고 세포벽 효소의 경우는 2.1x$10^{-2}$M이었다. 그외 Inhibitor에 대한 효소의 저해양식도 양효소에 비슷한 결과를 나타내었다.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제10권2호
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• pp.246-251
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• 2003

Bacillus subtilis PANH765 균주가 생산하는 pretense를 황산암모늄에 의한 염석, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, Sephacryl S 200 HR 및 Sepharose CL-6B gel filtration을 이용하여 정제하였다. DEAE-cellulose ion exchange chromatography를 행한 결과, 흡착 단백질 부분에서 활성이 높은 분획을 얻었다. 이 분획을 Sephacryl S 200 HR 및 Sepharose CL-6B gel filtration을 행한 결과 protease 활성을 가지는 단일 분획을 얻을 수 있었다. 정제한 protease의 분자량을 SDS-PAGE와 Sepharose CL-6B gel filtration으로 측정한 결과, 분자량은 35.0 kDa으로 추정되었으며, 각 효소의 비활성도는 6.27 U/mg이었으며, 회수율은 각각. 28.0%, 정제도는 4.35배로 나타났다. 최적 반응 온도는 $65^{\circ}C$, 최적 반응 pH는 7.05로 나타났으며, 온도 안정성은50 ∼ 75$^{\circ}C$, pH 안정성은 6.0 ∼ 7.5로 나타났다. 금속 이온의 영향은 $Na^{+}$, $K^{+}$, $Mg^{2＋}$ 및 NH$_4$$^{+}$ 이온이 효소 활성을 촉진하였으며, 그 중에서 $Mg^{2＋}$가 119.5%로 가장 높게 나타났다. 저해제인 경우 PMSF및 DFP에 의해 저해되었고 특히 DFP 보다는 PMSF 첨가시 뚜렷한 저해를 나타내었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제24권4호
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• pp.587-593
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• 1995

택사로부터 황산암모늄 분별 침전, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, Sephadex G-150 chromatography 등의 방법을 이용하여 렉틴을 분리, 정제하였다. 정제한 렉틴의 분자량은 gel filtration법에 의해 측정한 결과 90,500 dalton이었으며, SDS polyacrylamide gel 전기영동을 실시한 결과 subunit 분자량은 각각 42,000, 27,000, 22,500 dalton으로 나타나므로 택사 렉틴이 heterotrimer임을 알았다. 정제된 택사 렉틴은 사람 적혈구의 경우 모든 혈액형에 대하여 응집현상을 나타내었으며 돼지, 쥐 및 개 등의 적혈구에 대해서도 모두 응집현상이 나타나 혈구 비특이성임을 보여주었다. 또한 이 렉틴은 sialic acid, glucose, ribose, sucrose, lactose, galactose 등 당에 의해서, 그리고 $Hg^{2+},\;Fe^{2+},\;Cu^{2+}$ 이온 등에 의해 적혈구 응집력이 저해되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제1권2호
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• pp.102-110
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• 1991

Alkalophilic Bacillus sp. YJ-451, which was isolated from soil at several area in Korea, produced a novel type of bacteriolytic enzyme (cell wall peptidoglycan hydrolase) extracellulary. The cell wall hydrolytic activity was identified as a clear zone on sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis containing 0.2% (w/v) cell wall of Bacillus sp. as substrate. This enzyme was successively purified 66 fold with 3.2% yield in culture broth by ammonium sulfate precipitation, CM-cellulose column chromatography, and gel filtration, followed by hydroxylapatite column chromatography. The molecular weight of the purified enzyme was estimated to be 27,000 by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis and gel filtration column chromatography. The optimum pH and temperature for the activity of the enzyme were pH 10.0 and $50^{\circ}C$, respectively. The enzyme was stable between pH 5.0 and 10.0 and up to $40^{\circ}C$. Among the microorganisms used in this experiment the enzyme was active against most of gram negative strains and the genus Bacillus such as B. megaterium, B. licheniformis, B. circulans, B. pumilus, B. macerans, B. polymyxa. The release of dinitrophenylglutamic acid but not reducing group from cell wall peptidoglycan digested by the enzyme suggested that the enzyme is a kind of peptidase which hydrolyzes the peptide bond at the amino group of D-glutamic acid in the peptidoglycan.