• 생명과학회지
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• 제11권6호
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• pp.561-567
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• 2001

능이버섯[Sarcodon aspratus(Berk.)S.Ito]의 fibrin 분해 활성물질을 분리정제하기 위하여(N $H_4$)$_2$S $O_4$침전법, DE52 anion exchange column chromatography, Sephacryl-S2000 gel filtration chromatography 및 Mono S cation FPLC를 행하였으며 정제된 효소의 특성을 측정하였다. 혈전용해 요소의 활성물질은 DE52 anion exchange colum chroma-tography에 NaCI의 농도가 0.2M 정도에서 용출되었으며 계속된 Sephacryl-S200 gel fitration chromatography 및 Mono S cation EPLC를 실시한 결과 단일 Peak를 얻었고 혈전용해효소의 특이활성은 55.2 U/mg protein으로 조효소액으로 비하여 11.3 배 증가하였으며 수율은 49.5%이었다. 또한 Mono S cation EPLC에서 얻은 활성획분을 12% SDS-PAGE로 전기영동한 결과 단일 band를 얻었으며 gel filtration의 결과와 비교함으로서 정제된 능이의 혈전용해 효소의 분자량은 29.300 Da인 것으로 확인되었다. 능이로 부터 정제한 혈전용해효소는 pH가 높아질수록 효소활성이 증가하였으며 pH 10.5의 알카리성에서도 안정하였으며 6$0^{\circ}C$이상의 온도에서는 효소활성이 급격히 실활하기 시작하였지만 8$0^{\circ}C$에서 25%의 상대활성을 보였다. 또한 본 효소는 C $u^{2+}$이온 $Co^{3+}$ 이온 등 중금속에 의하여 68%및 38%활성이 저해되었으며 $Ca^{2+}$이온 또는 $Mg^{2+}$의 초딤색 인 EDTA및 serine protease inhibitor이 PMSF에 의하여 활성이 저해되었었다. 이러한 결과들은 능이의 혈전용해효소가 Ca.sup 2+/또는M $g^{2+}$에 의하여 활성이 증가하는 serine protease임을 암시해 주고 있다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권5호
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• pp.574-582
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• 1992

Bacillus stearothermophilus exo-xylanase 유전자 DNA가 삽입된 재조합 plasmid pMG1을 가지고 있는 E.coli JM109 exo-xylanase 생산 최적 배양 조건, 생산 효소의 정제 및 정제 효소의 특성 등을 조사 연구하였다. 상기 재조합 E.coli 균주는 0.5 fructose, 0.5 yeast extract, 1.0 tryptone 및 1.0 sodium chloride가 함유된 배지에서 약 10시간 배양했을 때 최대량의 효소를 생산하였으며 생산효소의 94는 세포내에 존재하는 것으로 분석되었다. 생산 효소는 ammonium sulfate 분획, ion exchange chromatography 및 gel filtration 등의 과정을 거쳐 단일 단백질로 정제하였으며 정제 효소는 pH 6.0과 $45^{\circ}C$에서 가장 높은 효소 활성을 나타내었다.또한 1mM $Ca^{2+}$과 $Co^{2+}$ 이온의 첨가는 각각 약 25% 정도의 활성화 효과를 나타내는 반면, 본 효소의 pNPX에 대한 $K_{m}$은 2.75mM, pl값을 4.7, 그리고 분자량은 gel-filtration 법으로는 약 200,000dal., SDS-polyacrylamide gel 전기영동법으로는 약 66,000dal 으로 측정되어 세 개의 동일한 subunit로 구성된 효소 단백질인 것으로 추정되었다. 본 정제 효소는 xylobiose, xylotrioxe 및 xylotetraose 등의 xylo-oligosaccharide를 효과적으로 분해함은 물론이고, 분해율은 낮으나 birchwood xylan, larchwood xylan 및 oatspelt xylan 등의 xyland에도 작용, xylose 생산을 확인함으로써 본 효소는 그 예가 극히 드문 bacterial exo-xylanase인 것으로 분류되었다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제3권2호
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• pp.75-81
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• 1988

본 실험은 Staphylococcus aureus 로부터 생성되는 enterotoxi B 의 분리 및 정제를 위하여 각종 분리방법을 비교 조사하였다. 배지로부터 Entrotoxin B를 추출하는 방법중 Amberlite CG-50 수지가 가장 간편하고 빠른 방법이었고 CM 수지는 Amberlite 수지에 비해 용출력이 떨어졌으며 분리할 수 있는 toxin의 양은 적었으나 정제도에 있어서는 약 75%로 toxin을 분리하는 처음 단계로서는 높은 편이었다. CM column을 Gradient 용출법으로 사용했을 때에는 하나의 column을 사용해 분리한 분리물 중 정제도가 85%로 가장 높았고, 용출 buffer의 농도 폭을 넓히는 것이 정제도를 높이기 위한 바람직한 방법이었다. 이 실험에 사용한 Sephadex G-50 , 75, 100, Sephacryl, Ultro gel 등의 gel filtration 방법 중 Ultro gel 에 의한 분리방법이 정제도에 있어서는 가장 우수했으며, 이온 교환 수지를 먼저 사용한 분리물에서는 모두 90% 이상의 toxin을 얻을수 있었지만, 한번의 분리도 거치지 않은 배지는 분리도와 정제도에서 현저히 떨어졌고, Sephadex G-50 은 gel colunm중 정제도가 가장 낮았다. FPLC는 위의 분리 ·정제 방법중 가장 빠른 방법이며, 적은 양의 시료로도 측정이 가증하였고, 정제도는 95% 이상이었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제37권4호
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• pp.243-247
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• 1994

한국산 대추로부터 조직의 연화에 작용하는 endo-polygalacturonase를 gel filtration과 이온교환크로마토그라피에 의하여 단일 단백질로 정제할 수 있었고, 수율은 약 6% 정도였다. 정제된 이 효소는 sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis에 의하여 분자량이 약 19,000정도의 monomer로 확인되었고, 결정구조는 육각판상 모양을 나타내었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제41권6호
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• pp.410-413
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• 1998

Gel filtration과 ion exchange chromatography, reversed-phase 및 ion exchange FPLC를 이용하여 고려인삼 뿌리에서 subunit 분자량 약 25 kDa의 주요단백질(이하 GMP)을 분리하였다. PAS 염색을 통하여 GMP는 carbohydrate moiety를 갖는 당단백질일 가능성을 보여주었고, 이는 glycosidase 처리후 protein band shift 실험으로 확인되었다. GMP는 native polyacrylamide 전기영동 및 gel permeation FPLC를 통해 native form은 약 63 kDa의 분자량을 갖는 dimer로 판단된다. GMP의 생리활성 측정결과, inflammation mediator의 기능탐색에 쓰이는 anticomplementary activity를 보여주었다.

• 생약학회지
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• 제21권4호
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• pp.274-283
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• 1990

This study was conducted to further characterize mucilages from Dioscoreae Rhizoma, which have been known to be proteoglycans. We chose the two types of yams, Dioscorea batatas Dec. (club-like) and D. japonica Thunb. (cane-like). Repeated gel filtration of a dialyzed water extract of each fresh yam on Bio-gel P-100 and then Sephadex G-150 columns completely separated the mucilage from protein. Furthermore, gel filtration of a water extract from each yam processed by steaming and drying on the Bio-gel P-100 column gave only one polysaccharide peak without protein. These results revealed that the mucilages of yams were only composed of polysaccharide. Then we assessed some properties of the mucilages under three kinds of criteria: a complex-forming capacity between mucilage and alcian blue, mannose content in the mucilage, and viscosity. The complex-forming capacities of two types of fresh yams were closely similar with each other, but the processing of two types of the fresh yams greatly lowered the complex-forming capacity and viscosity.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제1권2호
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• pp.102-110
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• 1991

Alkalophilic Bacillus sp. YJ-451, which was isolated from soil at several area in Korea, produced a novel type of bacteriolytic enzyme (cell wall peptidoglycan hydrolase) extracellulary. The cell wall hydrolytic activity was identified as a clear zone on sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis containing 0.2% (w/v) cell wall of Bacillus sp. as substrate. This enzyme was successively purified 66 fold with 3.2% yield in culture broth by ammonium sulfate precipitation, CM-cellulose column chromatography, and gel filtration, followed by hydroxylapatite column chromatography. The molecular weight of the purified enzyme was estimated to be 27,000 by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis and gel filtration column chromatography. The optimum pH and temperature for the activity of the enzyme were pH 10.0 and $50^{\circ}C$, respectively. The enzyme was stable between pH 5.0 and 10.0 and up to $40^{\circ}C$. Among the microorganisms used in this experiment the enzyme was active against most of gram negative strains and the genus Bacillus such as B. megaterium, B. licheniformis, B. circulans, B. pumilus, B. macerans, B. polymyxa. The release of dinitrophenylglutamic acid but not reducing group from cell wall peptidoglycan digested by the enzyme suggested that the enzyme is a kind of peptidase which hydrolyzes the peptide bond at the amino group of D-glutamic acid in the peptidoglycan.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제15권6호
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• pp.425-429
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• 1987

B. thuringiensis subsp. israelensis 균주가 생성하는 $\delta$-endotoxin의 alkali 용해에서 생성되는 hemolysin fragment 와 extra-cellular hemolysin 의 상관관계를 조사하기 위한 기초자료로서 extra-cellular hemolysin을 분리 정제하여 그 성질을 조사하였다. 균체 배양액에 유안을 염석 및 투석시킨 후, Sephadex G-200 gel filtration 과 DEAE-cellulose column chromatography를 행하여 균체외 homely-sin을 정제하였다. 정제된 extra-cellular hemolysin 은 SDS-polyacrylamide gel 전기영동에서 47,000 dalton의 분자량을 가진 단일 단백질 band를 얻었다. 또한 정제된 hemolysin은 thiol agents에 의해 그 활성이 증가되었으나, cholesterol 및 protease 처리 또는 금속이온 즉, FeSO$_4$나 CuSO$_4$에 의해 그 활성 이 감소되었다.

• KSBB Journal
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• 제17권1호
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• pp.33-37
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• 2002

PLGA 미립구로부터 G-CSF의 방출 거동 양상을 향상 시키기 위하여 G-CSF를 분자량 5000인 methoxy polyethylene glycol-aldehyde로 PEGylation 시켰다. 대부분의 G-CSF는 mono-PEGylation 되었으며, 이를 SDS-PAGE, HPLC, 및 펩타이드 지도 분석을 통해 확인하였다. W/O/W 방법을 사용하여 G-CSF 및 PEGylated G-CSF의 PLGA 미립구를 제조하였으며, 이때 봉입율은 높은 상태였다. 미립구내로 더 많은 G-CSF를 봉입하기 위하여 액상의 G-CSF 및 PEGylated G-CSF을 농축하였고 native gel과 gel filtration 크로마토 그래피를 통하여 단백질이 안정함을 확인하였다. 이렇게 제조한 PLGA 봉입체의 in vitro 방출 거동을 조사한 결과 PEGylated G-CSF는 native G-CSF에 비하여 더 오랜 시간 동안 방출이 지속되었고 최대 방출량도 증가하였다.

• 한국식품영양학회지
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• 제4권2호
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• pp.155-160
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• 1991

Authrobacter sp. L-3이 생성하는 glucose isomerase를 DEAE-cellulose column chromatography법으로 2단계 NaCl농도 구배로 용출함으로서 순수분리하였다. 이것이 SDS-acrylamide gel electrophoresis상에서 단일띠를 보임으로서 매우 잘 분리되었음을 알 수 있었다. Glucose isomerase의 Km값과 Vmax값이 각각 0.175M, 0.29로 얻어졌다. 한편, SDS-acrylamide gel electrophoresis와 Sephadex-G10050에 의한 gel filtration으로부터 분자량이 각각 42,000과 180,000으로 얻어져, 이 효소는 분자량이 42,500인 4개의 subunit로 구성되었음을 알 수 있었다.