• 제목/요약/키워드: Gel filtration

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Gel filtration chromatography와 propionic acid/urea polyacrylamide gel electrophoresis를 이용한 봉독 성분의 분리 (Purification of Peptide Components including Melittin from Bee Venom using gel filtration chromatography and propionic acid/urea polyacrylamide gel electrophoresis)

  • 최영권;최석호;권기록
    • 대한약침학회지
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    • 제9권2호
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    • pp.105-111
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    • 2006
  • Objectives : This study was conducted to carry out Purification of Melittin and other peptide components from Bee Venom using gel filtration chromatography and propionic acid/urea polyacrylamide gel electrophoresis Methods : Melittin and other peptide components were separated from bee venom by using gel filtration chromatography on Sephadex G-50 column in 0.05M ammonium acetate buffer. Results : Melittin and other peptide components were separated from bee venom by using gel filtration chromatography on Sephadex G-50 column in 0.05M ammonium acetate buffer. The fractions obtained from gel filtration chromatography was analyzed by using SDS-PAGE and propionic acid/urea polyacrylamide gel electrophoresis. The melittin obtained from the gel filtration contained residual amount of phospholipase $A_2$ and a protein with molecular weight of 6,000. The contaminating proteins were removed by the second gel filtration chromatography. Conclusion : Gel filtration chromatography and propionic acid/urea polyacrylamide gel electrophoresis are useful to separate peptide components including melittin from bee venom.

Silica-based Gel Filtration 크로마토그래피에서의 단백질-실리카 상호작용 (Protein-silica Interaction in Silica-based Gel Filtration Chromatography)

  • 최중갑;유경수
    • 약학회지
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    • 제35권6호
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    • pp.461-465
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    • 1991
  • Silica-based gel filtration chromatography has been used to characterize molecular weight of proteins. However, the molecular weight measured by this method was distorted by protein-silica interactions like hydrophobic and electrostatic forces. Therefore, we characterized protein-silica interaction using two forms of phytochrome (124 kDa) having different hydrophobicity and surface charge. PH and ionic strength affected the retention time of phytochrome suggesting that electrostatic force is the major interaction between protein and silica surface.

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꿀벌부채명나방 종령유충에서 유약호르몬 결합단백질의 정제와 특성 (Purification and Characterization of a Juvenile Hormong Binding Protein from Whole Body Homogenates of the Wax Moth, Galleris mellonella Final Instar Larvae)

  • 안기흥;전상학;이경로
    • 한국응용곤충학회지
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    • 제37권1호
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    • pp.59-64
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    • 1998
  • 꿀벌부채명나방 종령유충의 whole body에서 gel filtration 방법으로 유약호르몬 결합 단백질을 분리, 정제하였다. 분리된 단백질은 column chromatography법과 전기영동법에 의해 등가성을 확인하였다. 이 결합단백질은 전기 영동법에 의해 32K, gel filtration 에 의해 28K의 상대적 분자량을 나타냈다. 또한, JH III에 대한 해리도는 3.9$\times$${10}^{-7}$M로 확인되었다.

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Serratia marcescens ATCC 25419가 생산하는 Acetolactate Synthase Isozyme의 특성 (The Properties of Acetolactate Synthase Isozyme Produced by Serratia marcescens ATCC 254 19)

  • 김종탁;김승수
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제20권1호
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    • pp.25-33
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    • 1992
  • Serratia marcescens ATCC 25419를 질소원이 풍부한 BHI 배지에서 황산 암모늄 분별 침전을 시킨 후 DAEA-Sephacel chromatography, Phenyl-Sepharose hydrophobic chromatography, Sephacryl S-400 gel filtration, native gel elution을 거쳐 ALS isozyme Rf 0.83을 분리하였다. 분리한 ALS isozyme Rf 0.83의 native 형태는 gel filtration을 이용하여 분자량을 측정한 결과, 531,400이었고, SDS-PAGE를 수행한 결과 55,000의 large subunit와 38,900의 small subunit로 구성된 multimer임을 알 수 있었다.

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인유(人乳) 및 우유(牛乳)로부터 Secretory Immunoglobulin A의 분리(分離) 및 면역화학적(免疫化學的) 특성(特性)에 관(關)한 연구(硏究) (Studies on the Isolation and Immunochemical Properties of SIgA from Human and Bovine Milk)

  • 이조윤;김종우
    • 농업과학연구
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    • 제22권1호
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    • pp.82-95
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    • 1995
  • 본(本) 연구(硏究)는 한국인(韓國人) 산모(産母)로 부터 수집한 초유(初乳) 및 Holstein종(種)으로 부터 수집한 초유(初乳) 중에 존재하는 Secretory immunoglobulin A의 분리방법(分離方法)을 검토하고 분리(分離)된 분획들의 면역화학적(免疫化學的) 특성을 비교 검토하여 향후 인공영양(人工營養)에 대한 시험(試驗) 자료를 얻고자 하였으며 그 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 인유(人乳) 초유(初乳) 중의 SIgA는 Sephadex G-200과 Sepharose 6B를 통한 gel-filtration 만으로도 순수한 상태로 분리(分離) 정제할 수 있었으나, 우유(牛乳) 초유(初乳) 중의 SIgA는 gel-filtration을 반복하는 방법(方法)으로는 순수한 상태로 분리(分離) 및 정제할 수 없었으며, gel-filtration으로 얻어진 SIgA rich fraction을 모아서 DEAE를 실시한 결과(結果) 또한 마찬가지로 SIgA를 순수한 상태로 분리(分離)할 수는 없었다. 2. 인유(人乳) 초유(初乳)로 부터 gel-filtration을 통하여 분리(分離)한 분획들을 Immunoelectrophoresis 및 Double immunodiffusion 방법(方法)으로 면역화학적(免疫化學的) 특성을 살펴본 결과(結果), 첫번째 peak의 분획에서 IgM이 존재하고 있음을 확인할수 있었으며 두번째 peak의 분획에서 SIgA가 순수한 상태로 존재하고 있음을 확인할수 있었다. 반면에 우유(牛乳) 초유(初乳)로 부터 gel filtration 및 DEAE를 통하여 분리(分離)한 분획들을 같은 방법(方法)으로 면역화학적(免疫化學的) 특성을 살펴본 결과(結果), SIgA rich fraction 중에는 IgG가 다량(多量)으로 혼재(混在)되어 있음을 확인할 수 있었다. 3. 우유(牛乳) 초유(初乳)에서 분리(分離)한 SIgA rich fraction의 Fragment를 SDS-PAGE로 분자량을 측정해 본 결과(結果), Secretory component가 77,000-80,000, Heavy chain이 50,000-60,000, Light chain이 25,000-27,000 dalton으로 나타났으며 J-chain은 Light chain과 중복되어 분자량 측정이 어려웠다. 이와같은 결과(結果)는 인유(人乳) 초유(初乳) 중에 존재하는 SIgA Fragment 분자량과 유사한 결과(結果)를 보여주었다.

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개 혈소판에서 변형성장인자 베타의 분리에 관한 연구 (Study on the Purification of Transforming Growth Factor-$\beta$ in Canine Platelets)

  • 권오경;홍성혁
    • 한국임상수의학회지
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    • 제11권1호
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    • pp.389-392
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    • 1994
  • To purify transforming growth factor type beta(TGF-$\beta$) in canine platelets, Sephadex G-75 gel filtration and semipreparative HPLC were carried out. The column of $2.0 {\times}120cm$ was used for gel filtration and one inch semipreparative column filled with SP-Toyopeal for HPLC. Electrophoresis and bioassay using African green monkey kidney cell were used for identification of TGF-$\beta$ Crude TGF-$\beta$ of 2.75mg was extracted from 5.2g of the platelets by the treatment of acid/ethanol. In gel filtration of crude TGF-$\beta$, 4 peaks were observed at the detection of spectrophotometer at 280nm. Electrophoresis and bioassay identified the 3rd peak TGF-$\beta$. Linear gradient elution from 0 to 3M NaCl in sornipreparative HPLC showed TGF-$\beta$ at 1.5M NaCl. Gel filtration was less expensive and useful method for the purification of TGF-$\beta$.

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Saccharomycopsis lipolytica Isocitrate Lyase의 정제와 성질 (Purification and Properties of Isocitrate Lyase from Saccharomycopsis lipolytica)

  • 조석금
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제15권6호
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    • pp.420-424
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    • 1987
  • Saccharomycopsis lipolytica ATCC 44601 과 MX9-11RX8 온도감수성 변이균주의 isocitrate lyase는 조추출액을 ammonium sulfate 분획, Toyo Peal HW-55F gel filtration, DEAE-Cellulose ion exchange chromatography 등의 방법에 의하여 각각 54배, 87배 분리 정제되었다. 정제효소의 subunit 분자량은 59,000이고 Sephadex G-200 gel filtration에 의한 native enzyme 은 230,000이므로 이 효모의 isocitrate lyase는 같거나 비슷한 subunit 4개로 구성된 tetramer이며, 최적 pH는 6.9이었다.

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매미나방(Lymantria dispar)에서 Juvenile Hormone Binding Protein(JHBP)의 확인 및 정체 (Identification and Isolation of Juvenile Hormone Binding Protein from Hemolyrnph of Lymantria dispar L.)

  • 이인희;김학열
    • 한국동물학회지
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    • 제34권2호
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    • pp.196-202
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    • 1991
  • 매미나방 종령유층 혈림프내에 존재하는 JHBP을 Dextran Coated Charcoal (DCC)binding assay와 gel filtration에 의해서 확인하였고, JHBP의 pI값은 5.3으로 밝혀졌다. JHBP의 정저는 혈림프단백질을 먼저 PEG로 침전시킨 후 ion exchange chromatography와 gel filtration 방법을 통하여 행하였다. 정체된 fraction의 JH에 대한 binding activity는 [3H] JH-III의 radioactivity 측정과 DCC binding assay를 통해 확인하였고, 정체된 단백질의 순수도는 각 정체단계에 따라 전지영동을 하여 확인하였다.

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Calcium chloride 피브로인 용해물의 Gel Filtration Chromatography에 의한 순수분리 및 효소 가수분해 효과 (Pure-Separation of Calcium chloride-treated Silk Fibroin Hydrolysate by Gel Filtration Chromatography and Effect of It's Enzymatic Hydrolysis)

  • 여주홍;이광길;이용우
    • 한국잠사곤충학회지
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    • 제41권3호
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    • pp.211-215
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    • 1999
  • The pure-separation of calcium chloride-treated fibroin hydrolysates could be carried out using gel filtration chromatography. Also, the effect of its enzymatic hydrolysis was investigated in order to find out the enhancement of their functionality. The average molecular weight(Mw), solubility and free amino acid compositions of three hydrolysates samples (calcium chloride, calcium chloride-flavourzyme and calcium chloride-thermoase)were measured to compare their characteristics. The molecular weight of calcium chloride hydrolysate was about Mw 46,800 and it can be reduced to Mw 12,500 and 1,070 upon the enzymatic hydrolysis by flavourzyme and thermoase, repectively. A solubility of calcium chloride-treated samples shows about 60% while calcium chloride/enzyme-treated samples are perfectly soluble (100% solubility). The total amino acid composition of calcium chloride enzymatic hydrolysates are much higher than that of calcium chloride hydrolysate.

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항선충성 Bacillus thuringiensis 108균주의 분리와 특성 (Isolation and Characterization of a Nematicidal Bacillus thuringiensis strain 108)

  • 이재훈;류은주;김광현
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제35권3호
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    • pp.250-254
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    • 2007
  • 식물 뿌리혹 선충인 Meloidogyne incognita에 살충성이 있는 Bacillus thuringiensis 108 균주를 분리 선별하였다. 이 균주는 Gram양성이며, 포자를 형성하고, 운동성이 활발하며, lecithinase 및 catalase활성을 나타내었다. 이 균주가 생산하는 결정형 내독소(d-endotoxin)는 bipyramid형이었고, 편모항원성에 따른 균주의 동정 결과 serotype 3으로 표준 균주인 B. thuringiensis subsp. kurstaki의 편모항원성과 일치하였다. B. thuringiensis 108균주의 항선충성 물질은 Sephadex G-25 gel filtration, 활성탄 흡착 chromatography, Silica gel 흡착 chromatography 및 Sephadex G-10 gel filtration을 이용하여 정제를 하였다. 최종 정제단계인 Sephadex G-10 gel filtration 후에 항선충 물질의 $LC_{90}$$1.2\;{\mu}g/ml$이었다. B. thuringiensis 108 균주가 생산하는 항선충성 물질은 $100^{\circ}C$ 열처리에서 안정하였으나 autoclave($110^{\circ}C$ 30 min)를 했을 때는 그 독성이 완전히 소실되었다.