• 한국응용곤충학회지
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• 제20권1호
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• pp.6-14
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• 1981

모자익 Virus병에 감염된 마늘인편에 열처리, 화학치료제의 효과를 본 시험결과는 다음과 같다. 수중 또는 기중 열처리에 있어서 공히 $37^{\circ}\~57^{\circ}C$에서 35일간-1시간의 처리로서는 마늘 Virus의 불활성 화효과가 없었고, $62^{\circ}\~72^{\circ}C$에 $90\~5$분간의 처리로서 마늘엽에 나타난 병징이 감소되기는 하였으나 식물체의 생장력이 매우 약화되었으므로 열처리로서는 마늘 Virus를 완전히 불활성화 시킬 수 없었다. 마늘 인편을 $10\~50ppm$의 Malachite Green, 동농도의 2,4-Dichlorophenoxy Acetic Acid 또는 $20\~100ppm$의 Quinhydrone 수용액에 24시간 침윤처리한 후에 식재생장한 마늘엽에 모자익 병징은 감소되었으나 고농도에서 마늘의 생육이 억제되었다. $10\~50ppm$의 Naphthyl Activ A챵에 침윤한 마늘 인편을 식재 하였을 때에도 생장한 마늘엽에 모자익 병징이 감소되기는 하였으나 완전히 없어지지는 않았다. 수정한 Murashigh-Skoog 배지에 $0.5\~1.5ppm$의 Naphthyl Acetic Acid를 가용하여 마늘의 조직을 배양하였을 때에는 신생한 마늘식생체내에 Virus가 불활성화되어 엽에는 모자익 병징이 나타나지 않았으며 조직세포내에는 봉입체가 형성되지 않고, 정상적인 핵을 가진 건전한 식물체를 얻을 수 있었다.

• 식물병연구
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• 제19권3호
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• pp.233-236
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• 2013

본 실험은 강원도 마늘 주산지인 삼척시와 정선군의 바이러스 감염 정도를 조사하기 위해 수행되었다. 지역별 100개 시료의 검정을 위해 4종 primer(GLV, LYSV, GCLV, OYDV)를 이용한 RT-PCR 검정을 하였다. 진단 결과 삼척시와 정선군 두 지역에서 바이러스 감염율이 GLV 95%, LYSV 95%, GCLV 92%, OYDV 33%로 조사되었다. 본 조사에 사용된 마늘 검정 시료는 적어도 한 개 이상의 바이러스에 감염되어 있는 것으로 확인되었다. GLV, LYSV, GCLV 3종류의 바이러스 복합감염과 GLV, LYSV, GCLV, OYDV 4종류 바이러스의 복합감염이 각 60%와 25%로 나타났다. GLV, LYSV, GCLV는 두 지역 모두에서 고르게 나타나는 반면 OYDV는 삼척시 보다는 정선군에서 많이 감염되어 있는 것으로 조사되었다. 현재 전국 및 강원도 마늘 포장에서 바이러스 감염은 매우 심각하다. 따라서 마늘의 바이러스 무병종구 및 종구갱신 기술개발이 필요하다.

• The Plant Pathology Journal
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• 제31권1호
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• pp.90-96
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• 2015

Garlic generally becomes coinfected with several types of viruses belonging to the Potyvirus, Carlavirus, and Allexivirus genera. These viruses produce characteristically similar symptoms, they cannot be easily identified by electron microscopy (EM) or immunological detection methods, and they are currently widespread around the world, thereby affecting crop yields and crop quality adversely. For the early and reliable detection of garlic viruses, virus-specific sets of primers, including species-specific and genus-specific primers were designed. To effectively detect the twelve different types of garlic viruses, primer mixtures were tested and divided into two independent sets for multiplex polymerase chain reaction (PCR). The multiplex PCR assays were able to detect specific targets up to the similar dilution series with monoplex reverse transcription (RT)-PCR. Seventy-two field samples collected by the Gyeongbuk Agricultural Technology Administration were analyzed by multiplex RT-PCR. All seventy two samples were infected with at least one virus, and the coinfection rate was 78%. We conclude that the simultaneous detection system developed in this study can effectively detect and differentiate mixed viral infections in garlic.

• 한국식물병리학회:학술대회논문집
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• 한국식물병리학회 1994년도 Proceedings of International Symposium on BIOLOGICAL CONTROL OF PLANT DISEASES Korean Society of Plant Pathology
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• pp.86-102
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• 1994

To understand the molecular structure and pathogenesis mechanism of Korean garlic viruses, we have isolate cDNA clones for garlic viruses. The partial nucleotide sequences of 24 cDNA clones were determined and that of six clones containing poly (A) tail were compared with those of other plant viruses. One of those clones, V9 has 81.8% similarity in nucleotide sequence and 93.0% in deduced amino acid sequence, respectively, to the coat protein gene for garlic mosaic virus (GMV). Northern blot analysis with the clone V9 demonstrated that the genome of GMV is 7.8 kb long and has poly (A) tail. The anti-coat protein antibody for GMV recognizes 35 kDa polypeptide which could be the coat protein of GMV from infected garlic leaf extract or virus preparation. Clone G7 has about 62% of deduced amino acid sequence identity with the members of potyvirus group. Northern blot analysis with the clone G7 demonstrated that the genome of the potyvirus I garlic is 9.0 kb long and has poly (A) tail. The third clone, S81, shows 42% amino acid identity to the potexvirus. The other clones are under the characterization. To test the possibility of producing garlic virus resistant plant, we have designed a hairpin type ribozyme to cleave V9 RNA at the middle of the coat protein gene. From the cleavage reactions in vitro with two different sizes of RNA substrates, V9SUB (144 nucleotides) and V9 RNA (1,361 nucleotides), the ribozyme can cleave V9 sequence effectively at the predicted site. To study the activity of the ribozyme in vivo, plant transformation is in progress. Further possibilities to produce garlic virus resistant plant will be discussed.

• Applied Biological Chemistry
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• 제38권1호
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• pp.55-62
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• 1995

한국 마늘 바이러스의 유전자 구조와 병 발생 메카니즘을 연구하기 위하여, 바이러스가 감염된 마늘잎으로부터 바이러스 입자를 분리하고 RNA를 추출하였다. 그 virus RNA를 이용하여 마늘 바이러스 cDNA 유전자 은행을 만들어 일부 clone의 염기 서열을 결정하였다. 여기에서 얻은 cDNA clones 중에서 poly(A) tail을 갖는 clone S81를 분리하고 873 bp의 전체 염기서열을 결정하였다. Clone S81의 염기서열을 다른 식물 바이러스와 비교한 결과 potexvirus의 껍질단백질 부분의 염기서열과 $30{\sim}40%$의 유사성을 보여주었다. Clone S81은 바이러스 RNA의 3' 말단 부위에 해당하고, 껍질단백질의 N-terminal 3개 아미노산이 빠진 open reading frame (ORF) 및 3'-noncoding region을 포함하고 있다. 3' 말단 부분에는 바이러스 복제과정에서 cis-acting element로 작용한다고 여겨지는 hexamer motif와 polyadenylation signal이 존재한다. 이 clone을 probe로 하여 Northern blot을 실시한 결과 genome의 크기는 7.5 knt라는 것을 알 수 있었고 clone S81은 potexvirus의 cDNA clone이라는 결론을 얻었다. 한국 마늘에서 이 바이러스의 분포 양상을 알아보기 위해 껍질단백질에 대한 항체를 만들었다. 먼저 발현벡터를 이용하여 대장균에서 대량으로 발현시키고 affinity chromatography로 껍질단백질을 정제하였다. 그 단백질을 토끼에 주사하여 껍질단백질에 대한 항체를 얻었다. 이 항체를 사용하여 다양한 지역에서 재배되는 마늘잎의 추출액에 대해 immunoblot을 실시하였다. 그 결과 분자량 29,000과 27,000 위치에서 signal을 보였다. 분자량 27,000 단백질이 29,000이 분해되어 생긴 산물인지 알아보기 위하여 그 추출액을 $37^{\circ}C$에서 시간을 달리하여 incubation한 후 immunoblotting하였다. 그 결과도 마찬가지로 같은 위치에서 signal을 보여줬다. 따라서 한국 마늘에는 재배되는 지역에 따라 다소 다르기는 하지만 대체로 두 종류의 potexvirus로 감염되어 있다고 추정된다.

• 한국식물병리학회:학술대회논문집
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• 한국식물병리학회 1997년도 Proceedings of special lectures on Recent Research Trend of Plant Pathology
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• pp.22-25
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• 1997

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제17권11호
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• pp.1833-1840
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• 2007

Viruses in garlic plants (Allium sativum L.) have accumulated and evolved over generations, resulting in serious consequences for the garlic trade around the world. These viral epidemics are also known to be caused by aphids and eriophyid mites (Aceria tulipae) carrying Potyviruses, Carlaviruses, and Allexiviruses. However, little is known about viral epidemics in garlic plants caused by eriophyid mites. Therefore, this study investigated the infection of garlic plants with Allexiviruses by eriophyid mites. When healthy garlic plants were cocultured with eriophyid mites, the leaves of the garlic plants developed yellow mosaic strips and became distorted. In extracts from the eriophyid mites, Allexiviruses were observed using immunosorbent electron microscopy (ISEM). From an immunoblot analysis, coat proteins against an Allexivirus garlic-virus antiserum were clearly identified in purified extracts from collected viral-infected garlic plants, eriophyid mites, and garlic plants infected by eriophyid mites. A new strain of GarV-B was isolated and named GarV-B Korea isolate 1 (GarV-B1). The ORF1 and ORF2 in GarV-B1 contained a typical viral helicase, RNA-directed RNA polymerase (RdRp), and triple gene block protein (TGBp) for viral movement between cells. The newly identified GarV-B1 was phylogenetically grouped with GarV-C and GarV-X in the Allexivirus genus. All the results in this study demonstrated that eriophyid mites are a transmitter insect species for Allexiviruses.

• Applied Biological Chemistry
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• 제38권1호
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• pp.49-54
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• 1995

한국 마늘에 감염된 바이러스의 종류와 병 발생 메카니즘을 구명하기 위하여, 마늘 바이러스 cDNA clone들을 분리하였다. 24개 cDNA clone들의 부분적인 염기 서열을 결정하였고, 이 중 poly(A) tail을 가진 5개 clone들의 염기 서열을 결정하였다. 이를 이미 알려진 다른 식물 바이러스와 비교했을 때, clone V9은 일차구조가 carlavirus와 유사성을 보이므로 GLV cDNA clone으로 여겨진다. Northern blot 결과로부터 GLV genome의 크기는 8.5 knt이고, poly(A) tail을 가지고 있다는 것을 알 수 있었다. clone V9의 3' 말단부분에는 바이러스 복제과정에서 cis-acting element로 작용한다고 여겨지는 hexanucleotide motif(5'-ACCUAA)가 존재한다. 또한 carlavirus의 껍질 단백질 subgenomic RNA의 5' 말단에 보존되어 있는 5'-TTAGGT도 나타난다. 이들은 모두 carlavirus의 특징들이다. 껍질 단백질 유전자를 pRSET-A 발현 벡터에 재조합하고, E. coli BL21에서 발현시켰다. 발현된 껍질 단백질을 $Ni^{2+}$ NTA affinity chromatography에 의해 정제하였다. 껍질 단백질을 토끼에 주사하여 항체를 만든 후, immunoblot을 한 결과 GLV 껍질 단백질에 해당하는 24 kDa polypeptide가 인지되었다. 또한 다양한 마늘 품종에 대해서 immunoblot을 한 결과, GLV 껍질 단백질의 크기와 GLV의 감염정도가 마늘 품종에 따라서 차이가 있다는 것을 알 수 있었다.

• 한국식물생명공학회:학술대회논문집
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• 한국식물생명공학회 2002년도 춘계학술대회
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• pp.33-40
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• 2002

동양물산 중앙기술연구소에서 개발한 다신초 (multiple shoot) 증식기술을 이용하면 1회 계대배양으로 신초의 수가 약 15배 증가하고 1년에 10회의 계대배양이 가능하므로 계산상 1개의 신초로부터 5,700억개 (1510)의 신초 생산ㅇ 가능하므로 유전적으로 동질의 씨마늘을 단기간에 대량증식시키는 것이 가능하다 이러한 기술을 우수한 형질을 가진 마늘종에 적용하여 현재 국내${\cdot}$외 여러 지역에서 적응성 및 안정성 생산성 검정 실험을 수행하여 산업화 진입을 준비하는 단계에 도달하였다. 수년에 걸친 검정 시험 결과 조직배양 씨마늘을 이용할 경우 최대 50% 이상의 증수효과는 물론 상품성이 증대되는 효과도 확인하여 우리 나라 마늘산업의 국제 경쟁력을 향상시키고 능민 소득 증대에 크게 기여할 수 있을 것으로 판단된다. 또한 조직배양을 통해 대량생산된 무병주 씨마늘을 농가 위탁, 계약재배 등을 통해 증식하여 실수요 농가에 보급하는 체계를 갖추게 된다면 타 주요작물에 비해 상대적으로 미진한 종구 보급체계도 확립될 수 있을 것이다. 더불어 국제경쟁력을 갖춘 기술력, 원가 등을 기반으로 국내뿐만 아니라 일본, 미국 등 국외지역에도 공급지역을 확대할 수 있을 것으로 기대된다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제29권3호
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• pp.171-177
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• 2002

동양물산 중앙기술연구소에서 개발한 다신초 (multiple shoot)증식기술을 이용하면 1회 계대배양으로 신초의 수가 약 15배 증가하고 1년에 10회의 계대배양이 가능하므로 계산상 1개의 신초로부터 5,700억 개 (1510)의 신초 생산이 가능하므로 유전적으로 동질의 씨마늘을 단기간에 대량증식시키는 것이 가능하다. 이러한 기술을 우수한 형질을 가진 마늘종에 적용하여 현재 국내·외 여러 지역에서 적응성 및 안정적 생산성 검정 시험을 수행하여 산업화 진입을 준비하는 단계에까지 도달하였다. 수년에 걸친 검정시험 결과 조직배양 씨마늘을 이용할 경우 최대 50%이상의 증수효과는 물론 상품성이 증대되는 효과도 확인하여 우리나라 마늘산업의 국제경쟁력을 향상시키고 농민 소득 증대에 크게 기여할 수 있을 것으로 판단된다. 또한 조직배양을 통해 대량생산된 무병주 씨마늘을 농가 위탁, 계약재배 등을 통해 증식하여 실수요 농가에 보급하는 체계를 갖추게 된다면 타 주요작물에 비해 상대적으로 미진한 종구 보급체계도 확립될 수 있을 것이다. 더불어 국제경쟁력을 갖춘 기술력, 원가 등을 기반으로 국내뿐만 아니라 일본, 미국 등 국외지역에도 공급지역을 확대할 수 있을 것으로 기대된다.