• 한국동물학회지
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• 제39권3호
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• pp.292-298
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• 1996

안점의 꽃갯지렁이(Pseudopotamilla occelata)의 난자형성중 난황단백질의 전구체인 체강액 단백질(CP)은 수용체에 의해 중개되는데 이러한 수용체 중개에 의한 난모세포내로의 유입은 GTP-binding protein에 의해 조절되는 것으로 확인되었다. 체강액 단백질(CP)을 가장 활발히 투과시키는 중기 난모세포내로의 125 I-CP의 유입은 GTP에 의해 촉지되었고, GTP 유사체인 GTPrS나 GTP$\beta$S의 효과를 금입자로 표지된 체강액 단백질을 이용하여 전자현미경으로 확인해 본 결과, gold-labeled CP는 난황립에 집중되었고, 이러한 현상도 GTP에 의해서는 촉진되었고 GTPrS에 의해서는 억제되었다.

• BMB Reports
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• 제28권1호
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• pp.72-78
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• 1995

Time-dependent inactivation of E. coli GTP cyclohydrolase I with a 2',3'-dialdehyde derivative of GTP (oGTP) was directed to the active site of the enzyme, and was dependent on the concentration of oGTP. The kinetics of inactivation were biphasic with a rapid reaction occurring immediately upon exposure of the enzyme to oGTP followed by a slow rate of inactivation. The $K_i$ value of oGTP for the enzyme was 0.25 mM. Inactivation was prevented by preincubation of the enzyme with GTP, the substrate of the enzyme. At 100% inactivation, 2.3 mol of [8.5'-$^3H$]oGTP were bound per each enzyme subunit, which consists of two identical polypeptides. The active site residue which reacted with the affinity label was lysine. oGTP interacted selectively with the ${\varepsilon}$-amino group of lysine in the GTP-binding site to form a morpholine-like structure which was stable without sodium borohydride treatment. However, triphosphate group was eliminated during the hydrolysis step. To identify the active site of the enzyme, [8.5'-$^3H$]oGTP-labeled enzyme was cleaved by endoproteinase Lys-C, and the $^3H$-labeled peptide was purified by HPLC. The amino acid sequence of the active site peptide was Pro-Ser-Leu-Ser-Lys, which corresponds to the aminoterminal sequence of the enzyme.

• Journal of Plant Biology
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• 제39권2호
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• pp.85-92
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• 1996

Small GTP-binding proteins are divided into three major group: Ras, Rho and Ypt/Rab. They have the conserved regions designed G1 to G5 that are critical in GDP/GTP exchange, GTP-induced conformational change and GTP hydrolysis. We isolated and characterized genomic DNA or cDNAfragments encoding G1 to G3 domains of small GTP-binding protein Rab and Rho from several plant species using two different PCR-based cloning strategies. Seven rab DNA fragments were isolated from 4 different plants, mung-bean, tobacco, rice and pepper using two degenerate primers corresponding to the GTP-binding domain G1 and G3 in small GTP-binding proteins. The amino acid sequences among these rab DNA fragments and other known small GTP-binding proteins shows that they belong to the Ypt/Rab family. Six rho DNA fragments were isolated from 5 different plants, mung-bean, rice, Arabidopsis, Allium and Gonyaulax using the nested PCR method that involves four degenerate primers corresponding to the GTP-binding domain G1, G3 and G4. The rho DNA fragments cloned show more than 90% homology to each other. Sequence comparison between plant and other known Rho family genes suggests that they are closely related (67 to 82% amino acid identity). Sequence analysis and southern blot analysis of rab and rho in mung-bean suggest than thses genes are encoded by multigene family in mung-bean.

• BMB Reports
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• 제39권5호
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• pp.492-501
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• 2006

Since differentiation therapy is one of the promising strategies for treatment of leukemia, universal efforts have been focused on finding new differentiating agents. In that respect, we used guanosine 5'-triphosphate (GTP) to study its effects on K562 cell line. GTP, at concentrations between 25-200 ${\mu}M$, inhibited proliferation (3-90%) and induced 5-78% increase in benzidine-positive cells after 6-days of treatments of K562 cells. Flow cytometric analyses of glycophorine A (GPA) showed that GTP can induce expression of this marker in more mature erythroid cells in a time- and dose-dependent manner. These effects of GTP were also accompanied with inhibition of DNA synthesis (measured by [$^3H$]-thymidine incorporation) and early S-phase cell cycle arrest by 96 h of exposure. In contrast, no detectable effects were observed when GTP administered to unstimulated human peripheral blood lymphocytes (PBL). However, GTP induced an increase in proliferation, DNA synthesis and viability of mitogen-stimulated PBL cells. In addition, growth inhibition and differentiating effects of GTP were also induced by its corresponding nucleotides GDP, GMP and guanosine (Guo). In heat-inactivated medium, where rapid degradation of GTP via extracellular nucleotidases is slow, the anti-proliferative and differentiating effects of all type of guanine nucleotides (except Guo) were significantly decreased. Moreover, adenosine, as an inhibitor of Guo transporter system, markedly reduced the GTP effects in K562 cells, suggesting that the extracellulr degradation of GTP or its final conversion to Guo may account for the mechanism of GTP effects. This view is further supported by the fact that GTP and Guo are both capable of impeding the effects of mycophenolic acid. In conclusion, our data will hopefully have important impact on pharmaceutical evaluation of guanine nucleotides for leukemia treatments.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제44권1호
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• pp.55-61
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• 2016

본 연구에서는 $BH_4$를 대체할 수 있는 유용물질인 세피아프테린의 생산성 증대를 위하여 GTP 생합성 경로의 유전자들을 동시에 발현할 수 있는 재조합 대장균을 제작하였다. 세피아프테린을 생산할 수 있는 재조합 대장균에서 gmk, ndk 및 guaA-guaB 유전자를 동시에 발현함으로써 세포 내 GTP의 농도가 대조구에 비해 약 200% 이상 증가하였고 $126.1{\pm}9.3mg/l$의 세피아프테린이 생산되었는데 이 결과는 대조구보다 세피아프테린의 생산량이 약 43% 증가된 것이다. GTP 생합성에 관여하는 개별 유전자의 단독 발현 또는 두 가지 유전자의 동시 발현은 세포 내 GTP 농도 향상 큰 영향을 미치지 못했지만 네 가지 유전자 모두를 동시에 발현하는 경우는 세포 내 GTP 농도를 유의적으로 증가시킨다는 것이 확인되었다. 결론적으로 세포 내 GTP 생합성에 관여하는 guaA-guaB, gmk 및 ndk 유전자를 동시에 발현함으로써 재조합 대장균에서 세피아프테린의 생산성 증가를 달성하였다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제13권7호
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• pp.980-985
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• 2000

Influences of Japanese green tea powder (GTP) supplementation to commercial diet on laying performance and egg quality were studied by using 60 laying hens. The experimental diet with or without 0.6% GTP was given ad libitum to the birds during the period from 6 to 71 weeks of age. The birds started egg production from 21 wk of age regardless GTP feeding. Body weight, feed intake, egg weight tended to decrease with GTP supplementation, while egg production rate tended to increase. Haugh unit score was significantly increased with GTP, which accompanied with the increased albumen height. These were observed almost throughout the laying period over 50 wk. Gel proportion in thick albumen was decreased as storage time is prolonged, then higher values of the gel proportion were recorded in the eggs from GTP group. Thick albumen of the eggs from GTP-fed layers had more carbohydrate than that from control layers. All these indicate physical stability of thick albumen in the eggs from GTP group. Thiobarbituric acid content of egg yolk tended to remain lower in the eggs from GTP group during 5-10 days of storage at room temperature. Levels of egg yolk cholesterol and yolk lipid were significantly reduced by GTP feeding. There were no significant differences in eggshell weight, shell thickness and shell strength between the two groups. Thyroid gland and liver from hens slaughtered at 71 wk of age did not differ in weight irrespective of GTP feeding. The present results suggest that GTP could modify components of edible part of egg, leading to the characteristics favourable to consumers such as high durability of thick albumen and less cholesterol in yolk, without altering general performance of the layers throughout this year round experiment.

• Journal of Yeungnam Medical Science
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• 제10권2호
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• pp.360-368
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• 1993

세포막 정보전달 경로에서 수용체에 전달된 정보를 세포내로 전달하는데 조절 단백질로 알려진 GTP 결합단백질을 소외 뇌조직으로부터 정제하고 그 분자량등을 관찰하였다. 분쇄한 소의 뇌조직으로부터 세포막을 분리 해내고 1% cholate를 이용하여 세포막 단백질을 얻었으며 DEAE-Sephacel column chromatography를 시행하였다. 여기서 얻은 GTP 결합단백질은 다시 Ultrogel AcA 34 column chromatography, heptylamine-Sepharose column chromatography 순으로 실시하여 $GTP{\gamma}S$와 결합하는 단백질 분획을 모았고 활성도와 일치하는 분획을 얻었다. 전기영동으로 관찰한 결과 $Go{\alpha}$가 분자량 39,000 dalton. $G{\beta}$가 36,000 dalton인 band를 확인하였고 나머지 다른 단백질도 함께 관찰되어 heptylamine-Sepharose 분획을 다시 DEAE-Sephacel column에 적용하여 순수한 band를 구하였다. GTP 결합단백질의 활성화는 GTP가 결합될 때 ${\alpha}$부분과 결합하고 ${\beta}{\gamma}$는 떨어져 나간다. 그러므로 heptylamine-Sepharose column분획의 활성도에서 $Go{\alpha}$의 band 분획과 곡선의 활성도가 일치하고 ${\beta}$는 곡선이 하향하는 분획에서 전기영동상에 관찰되었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제36권10호
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• pp.1263-1270
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• 2007

난소절제 흰쥐에서 녹차가공품(GTP)의 항동맥경화 효과를 분석하여 폐경기 증후 개선을 위한 기능성식품으로의 활용 가능성을 확인하고자하였다. 본 연구에 사용된 GTP는 경남하동 소재 화개제다(花開製茶)로부터 제공받았다. 실험 동물은 10주령의 Sprague-Dewley 암컷 흰쥐로 평균 체중 $279{\pm}2g$인 실험 동물을 완전임의배치로 한 군당 10마리씩 4군으로 나누어 양쪽 난소를 절제한 후(OVX) 실험 식이를 제공하였다. Sham 대조군은 실험군과 동일한 스트레스를 주기 위해 난소를 절제하지 않고 개복수술만 실시한 후 실험하였다. 난소 절제 후 2주간 배합사료를 급여한 후 Sham-대조군(Sham-C)과 OVX-대조군(OVX-C)은 AIN' 76에 기초해서 제조한 콜레스테롤 첨가 식이를, OVX 실험군은 콜레스테롤 첨가 식이에 GTP 5%(OVX-G 5%)와 20%(OVX-G 20%)로 함유한 실험 식이를 조제하여 6주간 급여하였다. 식이 조제시 Ca함량은 총 식이의 0.4%수준으로 GTP첨가량 5%(Ca 함량 50%와 $CaCO_3$ 50%)와 GTP 첨가량을 20%(Ca함량 0.4%)로 조정하였으며 Sham-E와 OVX-C는 20% GTP 수준의 Ca 함량과 동일한 양으로 $CaCO_3$로 조정하여 첨가하였다. 혈청의 TG농도는 OVX-C군에 GTP 20%를 첨가한 식이를 섭취한 군에서 유의적으로(p<0.05) 낮은 수준을 보였다. 총 콜레스테롤 농도에 대한 HDL-C 농도비(%)는 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 유의적으로(p<0.05) 높았으며 $TNF-{\alpha}$ 수준은 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 유의적으로(p<0.05) 감소하였다 간의 TG와 TBARS 수준은 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 감소하는 경향을 보였으며 GTP의 첨가가 간에서의 GSH함량 및 항산화 효소계의 활성을 증진시키는 것으로 나타났다. GTP를 첨가한 식이를 섭취한 실험군의 1일 변중의 총 지방 및 TG 배설량은 유의적인 차이는 보이지 않았으나 OVX-C군에 비해 다소 높은 경향을 보였으며 총 콜레스테롤 배설량은 OVX-C군에 비해 높은 수준이었다. 난소 절제 흰쥐에서 5% GTP를 제공받은 군에 비해 20% GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 혈액과 간에서의 지질농도 감소와 항산화 효소의 활성이 높은 수준을 보여 GTP의 첨가량이 높을수록 더 효과적인 것으로 나타났다. 이상의 결과들로 미루어 볼 때 난소절제 흰쥐에서 GTP 첨가가 변의 총지질과 TG및 콜레스테롤 배설을 증가시켜 혈청과 간의 총 지질 농도와 TG및 총콜레스테롤 농도를 감소시키는 것과 관련이 있는 것으로 보이며 GTP의 섭취가 체내 총 지질 농도를 감소시켜 항 동맥경화 작용을 나타내는 것으로 사료된다. 따라서 녹차가공품의 폐경기 고지혈증 개선을 위한 기능성식품으로의 가능성을 보여 준다고 할 수 있다.

• Journal of Nutrition and Health
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• 제31권1호
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• pp.28-35
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• 1998

This study was done to investigate the relationship between ultrasonograph fat density (ULFD) using objective measurement and serum enzymes for testing liver function in 101 healthy adults(43 males and 58 females). Average serum enzyme activities in males and females were GOT27.111U/L and 22.46IU/L, GPT 34.06IU/L and 18.501U/L, and ${\gamma}$-GTP 37.67IU/L and 17.201U/L, respectively. Males showed significantly higher activities of GPT and ${\gamma}$-GTP than females. ULFD of the obese group (BMI$\geq$25) was significantly higher than that of the nonobese group. GOT, GPT, and ${\gamma}$-GTP tended to be high in the obese group. GPT and ${\gamma}$-GTP of the high TG group (TG$\geq$170) tended to be markedly high for males, but not for females. GPT was positively correlated with ULFD, body weight , and weight-to-height, ratio, and ${\gamma}$-GTP was positively correlated with body weight, weight-to-height ratio. BNI, and KI. ULFD and ${\gamma}$-GTP were positively correlated with serum TG. These results suggests that , among serum enzymes for testing liver function, GPT has a close relationship with ULFD using objective measurement, while GOT does not. Also , ${\gamma}$-GTP has a close relationship with parameters for obesity.

• 한국동물학회지
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• 제37권1호
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• pp.40-48
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• 1994

세포분화에 따른 Small GTP-binding protein의 역할을 밝히기 위하여 Retinoic acid(RA)와 dibutyryl cyclic AMP(dbcAMP)로 분화를 유도한 F9 기형암종세포의 형태적인 변화와 함께 Small GTP-binding protein의 분포를 조사하였다. RA와 dbcAMP를 처리한 세포는 분화유도 5일경(초기 분화 단계)에 분명한 세포의 경계를 보이기 시작하여 7일경(분화 후기 단계)에는 거의 모든 세포가 등근 분화된 형태로 전환되었다. 이 분화과정 동안 세포막에는 많은 microvilli와 lamellopodia 같은 구조물이 나타났다. 아울러 초기 분화 단계에 많은 량의 laminin이 발현되었으며 분화 후기에 microtubule의 재분포가 관찰되었다. 세종류의 Small GTP-binding protein(25 23, 21 KD)이 F9 세포의 막성분과 세포질에서 관찰되었으며 분화가 진행됨에 따라서 세단백질 모두 증가되는 양상을 보였다 이러한 결과는 Small GTP-binding protein이 F9 세포의 분화에 특별한 기능을 가지고 있음을 시사해 주고 있다.