• 제목/요약/키워드: GST01

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랫드에서 D-galactosamine을 이용한 중기 발암성 검색법에서 natural killer 세포활성 및 c-myc 종양 단백질 발현에 관한 연구

  • 이영순;강경선;조재진;남기환
    • 한국응용약물학회:학술대회논문집
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    • 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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    • pp.191-191
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    • 1994
  • 본 연구는 D-galactosamine을 이용한 중기발암성 모델에서 세포성면역중의 하나인 natural killer (NK) 세포활성과 c-myc 종양단백의 발현을 알아보기 위하여 실시하였다. 수컷 6주령의 SPF SD랫드 50마리를 3개군으로 각 군당 20마리씩 나누어 배치하였다. 실험 0일에 제 1,2 군에서 DEN을 복강내로 체중 kg당 200mg 1회 투여하여 발암유발을 하였으며 대조군인 제 3군에는 saline을 투여하였다. 제 2주에 제 1군에는 강력한 발암촉진물질인 2-acetylaminofluorene (AAF)을 사료에 0.01% 투여하였으며, 제 2군은 미약한 발암촉진물질인 phenobarbital (PB)을 0.05%로 음수에 6주간 투여하였다 제 8, 15, 36주에 경시적으로 부검하였다. 제 8주에 부검시 GST-P$^{+}$ 병변이 잘 유도되어 전암병변의 유도가 잘 되었음을 확인하였다. 제 15주에 부검시 AAF를 투여한 군에서 glutathione S-transferase placental form (GST-p)에 대한 면역조직화학적 염색에서 AAF와 PB를 투여한 제 1군 및 제 2군의 간장에서는 주위조직과 한계가 명료한 GST-P$^{+}$ 증식성 결절과 병소를 관찰할 수 있었으나 기초 사료만을 투여한 제 3군은 어떠한 GST-P$^{+}$ 증식성 결절 및 병소를 관찰할 수 없었다. 랫드에서 natural killer세포는 사람이나 마우스에서 주로 자연살생능 (natural killing activity)을 보이는 LGL(lure granular lymphocyte)의 형태를 띄고 있었으며 LGL 이라고 부르는 것처럼 특징적으로 세포질 대 핵의 비율이 높고 azurophilic 과립을 세포질내에 함유하고 있으며 일반적으로 신장 형태의 핵을 가지고 있었다. 또한 세포의 크기는 small lymphocyte와 대식세포 (macrophage)의 중간 크기였다. 15주와 시험종료시 정상대조군인 제 3군의 랫드로 부터 분리한 NK 세포활성도 (% cytotoxicity)에 비하여 발암물질 투여군의 NK 활성도는 PB 투여군들의 NK활성도 보다 약간 낮았다. 랫드에서 c-myc 종양단백은 65KD 와 671KD 에서 band가 형성된 것이 관찰되었다. 시험 개시후 15주에 부검한 랫드의 간에서 c-myc 종양단백의 발현은 모든 처리군들이 대조군에 비하여 높게 발현되는. 것이 관찰되었으나 시험개시후 26주에 부검한 랫드의 간에서 c-myc 종양단백의 발현은 대조군에 비하여 차이가 거의 없었다. 따라서 랫드에서 화학적으로 유도한 간암발생 과정에서 NK 세포활성이 현저하게 억제되는 것으로 생각되며, c-myc 종양단백의 발현은 시험개시후 15주에 그 발현이 확실한 것으로 사료되어 진다.

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Chlorpyrifos 저항성 배추좀나방(Plutella xylostella L.)의 살충제 저항성 특성 (Characteristics of Resistance to Chlorpyrifos in Diamondback-moth (Plutella xylostella L.))

  • 김경주;김성수;김성문;허장현
    • 농약과학회지
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    • 제7권4호
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    • pp.288-295
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    • 2003
  • 유기인계 살충제인 chlorpyrifos에 대한 배추좀나방의 저항성 원인을 구명하기 위하여 저항성 인자로 알려진 두 가지 무독화 효소, esterases와 glutathione- S-trasferase(GST)의 활성과 작용점 효소인 acetylcholinesterase(AChE)의 insensitivity 정도를 측정하였다. 또한 chlorpyrifos와 작용점이 동일한 계통의 살충제에 대한 저항성 발달과의 상관관계를 조사하여 교차저항성 발달 특성을 검정하였다. 감수성 배추좀나방에 chlorpyrifos의 아치사량을 처리하여 160배의 저항성을 나타내도록 선발하여 실험에 사용하였다. 저항성 계통의 GST 활성은 감수성 계통의 GST 활성에 비하여 1.7배 높았으나, 감수성 계통과 저항성 계통간에 esterases 활성 차이는 없었다. 또한 chlorpyrifos의 작용점인 AChE insensitivity 측정결과 저항성 계통이 감수 성계통보다 11.6배 높았다. Chlorpyrifos 저항성 계통은 AChE을 저해하는 것으로 알려진 유기인계 및 카바 메이트계 살충제인 dichlorvos, dimethylvinphos, carbofuran에 대해서도 각각 33.6배, 17.6배, 18.7배의 insensitivity를 나타내었다. 그러나 동일한 작용점을 저해하는 phenthoate-oxon에 대해서는 1.7배의 낮은 insensitivity를 보였다. 또한 이들 약제들에 대한 교차저항성 발달정도를 측정한 결과, chlorpyrifos 저항성 계통은 dichlorvos, dimethylvinphos, carbofuran에 대하여도 각각 82배, 47배, 42배의 높은 교차저항성 발달을 나타내었으나, phenthoate에 대해서는 2.3배로 낮은 교차저항성 발달을 보여 작용점이 동일한 유사계열 약제들이라도 저항성을 유발하는 기작에는 서로 큰 차이가 있을 수 있음을 확인할 수 있었다. 본 실험 결과 AChE insensitivity 와 저항성 발달비 간에는 정의상관관계$(r=0.9951^{**},\;p^{(0.01)}$를 보이는 것으로 나타났는데, 이는 유기인계 및 카바메이트계 살충제의 저항성 발달이 AChE에 대한 insensitivity 정도와 관련 있음을 시사하는 것이다. 본 연구의 결과를 통하여 chlorpyrifos에 대한 배추좀나방의 저항성 발달은 작용점인 AChE에 대한 약제의 insensitivity가 주 요인 중 하나이며, 무독화 효소 중 GST 활성증가가 부가적인 요인이 될 수 있음을 확인할 수 있었다.

대장균을 이용한 세포사멸 유도 단백질 caspase-9의 발현에 관한 연구 (High-level Expression of Human Procaspase-9 in Escherichia coli and Purification of its GST-tagged Recombinant Protein)

  • 성영모;한철;최주연;박효진;성근혜;남민경;김상수;김인경;강성만;임향숙
    • 미생물학회지
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    • 제39권4호
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    • pp.216-222
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    • 2003
  • Caspase는 세포사멸 과정에서 중심적 역할을 하는 cysteine 단백분해 효소이다. 그 중 caspase-9은 활성이 없는 전장 단백질로 존재하지만 Apaf-1과 cytochrome c와 함께 apoptosome을 이루면 활성화된다. 활성 된 caspase-9은 다른 caspase들을 활성 시키는 중요한 기능을 갖는다. 본 연구에서는 대장균에서 전장 caspase-9 단백질을 정제하고자 pGEX 발현 시스템을 이용하였다. 그러나 일반적 배양 및 유도조건에서 caspase-9을 발현시키면 과다한 단백분해로 인하여 전장 caspase-9 단백질이 매우 적게 발현되었다. 이를 극복하기 위해 배양조건과 유도인자의 농도를 변화시키자 caspase-9의 과다한 단백분해 현상이 감소되고 전장 caspase-9의 발현 정도도 상당량 향상되었다. 본 연구에서 확립된 배양조건으로 caspase-9을 발현, 정제하면 70%이상의 순도를 가진 GST-caspase-9 단백질을 손쉽게 얻을 수 있다. 더불어 GST 융합 caspase-9이 대장균에서 발현될 때도 포유세포 내에서 절단되는 것과 동일한 위치인 Asp315 에서 자가 단백분해 반응이 일어난다는 것을 확인할 수 있었다. 본 연구에서는 caspase-9의 생화학적, 세포생물학적 기능연구에 필요한 전장 단백질을 다량으로 확보할 수 있는 간단하고 효과적인 정제방법을 제안한다.

랫드의 간압발생과정에서 홍삼의 항암효과와 자연살해세포의 (Involvement of the Enhancement of Natural Killer Cell Activity on the Anti-Cancer Effect of Red Gingseng during Rat Hepatocarcinogenesis)

  • 강경선;이영순
    • Toxicological Research
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    • 제13권1_2호
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    • pp.23-27
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    • 1997
  • This study was performed to examine the anti-cancer effect of Red Ginseng in the DENGalN-PH-induced hepatic tumor model system in rats. One hundred of male SPF Sprague-Dawley rats(6weeks old) were randomly divided into five groups. Rats in groups 1, 2, 3, and 4 were administered to diethylnitrosamine intraperitoneally 200 mg/kg body weight for the caner initiation. Rats in group 5 were given to saline as a control. On two weeks after cancer initiation, rats in groups 1 and 3 were fed on diet containing 0.01% of acethylaminofiuorene(AAF) which is strong cancer-promotor for 6 weeks, while rats in groups 2 and 4 were fed on water containing 0.05% of phenobarbital which is weak cancer.promotor for 6 weeks. Rats in groups 1 and 2 were treated with diet containing 3% of Red Ginseng for six weeks(from 9th week till 15th week after cancer initiation). Rats in all groups were necropsied time-sequencially at 8, 15, and 36 weeks. The hepatic lesions of rat treated with carcinogens expressed glutathione S-transferase placental form(GST-P) at 8 week. The GST-P positive foci of rats treated with AAF were larger than that of any other rats, while the GST-P positive foci of rats treated with AAF and red ginseng were significantly decreased. This anti-cancer effect of Red ginseng might be involved in the enhacement of natural killer cell activity. To know whether there is direct relationship between Red Ginseng and natural killer cell activity, the activity of natural killer cell was examined after treatment AAF, AAF+Red ginseng and Red ginseng only, respectively. Comparing with natural killer cell activity in AAF-treated group, natural killer cell activity was significantly activated in AAF+ Red ginseng-treated group. This indicated that Red ginseng might enhance natural killer activity after treatment carcinogen in rats. These results suggested that Red ginseng might have a cancer prevention ability by promoting natural killer cell activity during hepatocarclnogenesis.

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수정된 강제유도운동과 탄력밴드를 이용한 가압벨트 저항성 운동이 뇌졸중 환자의 상지 기능에 미치는 효과 (The Effect of Modified Constraint-induced Movement Therapy and Resistive Exercise Using Elastic Band with Pressure Belt on Affected Upper Limb Function in Stroke Patients)

  • 김태곤;김경윤;배세현
    • 대한정형도수물리치료학회지
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    • 제27권3호
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    • pp.25-36
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    • 2021
  • Background: This study aimed to investigate the effect of modified constraint-induced movement therapy (mCIMT) and resistive exercise using elastic band with pressure belt on improving upper extremity function in stroke patients. Methods: Sixteen patients with stroke were randomly assigned to a control group that received mCIMT and resistive exercise using elastic band (n=8) and an experimental group that received mCIMT and resistive exercise using elastic band with pressure belt (n=8). Over the course of four weeks, mCIMT were conducted 60 minute three times per week and resistive exercise using elastic band (with pressure belt) were conducted twice daily, three times per week. The function of the upper extremities were evaluated before, after 2 weeks and 4 weeks using the grip strength test (GST), the box and block test (BBT), and motor activity log (MAL). Results: The values for the GST, the BBT, and MAL increased in both groups as the treatment period progressed. The values for the GST (p<.01), the BBT (p<.001), and MAL (p<.001) were significantly higher in the experimental group than in the control group at 4 weeks after initiating the treatment. Conclusion: We found that mCIMT and wearing a pressure belt during resistive exercise was very useful in improving the function of the upper extremities in patients with stroke.

Consumption of Oxidized Soybean Oil Increased Intestinal Oxidative Stress and Affected Intestinal Immune Variables in Yellow-feathered Broilers

  • Liang, Fangfang;Jiang, Shouqun;Mo, Yi;Zhou, Guilian;Yang, Lin
    • Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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    • 제28권8호
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    • pp.1194-1201
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    • 2015
  • This study investigated the effect of oxidized soybean oil in the diet of young chickens on growth performance and intestinal oxidative stress, and indices of intestinal immune function. Corn-soybean-based diets containing 2% mixtures of fresh and oxidized soybean oil provided 6 levels (0.15, 1.01, 3.14, 4.95, 7.05, and $8.97meqO_2/kg$) of peroxide value (POV) in the diets. Each dietary treatment, fed for 22 d, had 6 replicates, each containing 30 birds (n = 1,080). Increasing POV levels reduced average daily feed intake (ADFI) of the broilers during d 1 to 10, body weight and average daily gain at d 22 but did not affect overall ADFI. Concentrations of malondialdehyde (MDA) increased in plasma and jejunum as POV increased but total antioxidative capacity (T-AOC) declined in plasma and jejunum. Catalase (CAT) activity declined in plasma and jejunum as did plasma glutathione S-transferase (GST). Effects were apparent at POV exceeding $3.14meqO_2/kg$ for early ADFI and MDA in jejunum, and POV exceeding $1.01meqO_2/kg$ for CAT in plasma and jejunum, GST in plasma and T-AOC in jejunum. Relative jejunal abundance of nuclear factor kappa B ($NF-{\kappa}B$) P50 and $NF-{\kappa}B$ P65 increased as dietary POV increased. Increasing POV levels reduced the jejunal concentrations of secretory immunoglobulin A and cluster of differentiation (CD) 4 and CD8 molecules with differences from controls apparent at dietary POV of 3.14 to $4.95meqO_2/kg$. These findings indicated that growth performance, feed intake, and the local immune system of the small intestine were compromised by oxidative stress when young broilers were fed moderately oxidized soybean oil.

지방산으로 유발된 비알코올지방간질환 실험모델에 미치는 생간탕가미방(生肝湯加味方)의 효과 (Effects of Saenggantanggami-bang on Nonalcoholic Fatty Liver Disease Model Induced by Fatty Acids)

  • 유재연;이장훈
    • 대한한방내과학회지
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    • 제31권2호
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    • pp.331-345
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    • 2010
  • Objectives : This study was designed to investigate the effects of Saenggantanggami-bang (SG) on nonalcoholic fatty liver disease. Methods : HepG2 cells were used in an in vitro model. HepG2 cells were divided into three groups. The Normal group was incubated with no fatty acid. The Control group was incubated with 1mM palmitic acid to introduce fat overloading. The PA-SG group was incubated with 1mM palmitic acid and various concentrations of Saenggantanggami-bang (SG). Cell viability and cytotoxicity were analyzed by MTT assay and LDH assay. Intracellular triglyceride (TG) levels, reactive oxygen species (ROS) levels, ATP amount, and GST activity were measured. Cell death pattern and protective effect of SG on cell death were studied by DNA fragmentation and caspase-3 intensity (western blot). Results : Compared with the Control group, cell viability of the PA-SG group significantly increased (P<0.01), cytotoxicity of the PA-SG group decreased (P<0.01), and intracellular TG levels and ROS levels of the PA-SG group decreased (P<0.05). In DNA fragmentation assay, necrotic pattern was observed and DNA fragment decreased in the PA-SG group. In western blot, apoptotic pattern was observed, caspase-3 intensity of the PA-SG group was reduced significantly, but there were no significant differences in intracellular ATP amount and GST activity between the control group and the PA-SG group. Conclusion : The results suggest that Saenggantanggami-bang can be a potential candidate for the clinical treatment of nonalcoholic fatty liver disease.

발효 이고들빼기(Youngia denticulata Houtt Kitamura) 에탄올 추출물이 알코올 투여로 손상시킨 흰쥐의 간독성 해소 효과 (Hepatotoxicity Reducing Effect of Ethanol Extracts from Fermented Youngia denticulata Houtt Kitamura in Ethanol-treated Rats)

  • 김미정;이현구
    • 동아시아식생활학회지
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    • 제26권5호
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    • pp.389-399
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    • 2016
  • Aspergillus oryzae로 발효시킨 이고들빼기의 에탄올 추출물이 알코올성 간독성을 유발한 SD계 흰쥐에 미치는 영향을 조사하였다. 실험군은 정상대조군(NC), 에탄올대조군(EC), 에탄올급여 및 비발효 이고들빼기 추출물 0.5% 첨가식이 급여군(ENY), 에탄올급여 및 발효 이고들빼기 추출물 0.5% 첨가식이 급여군(EFY)의 4개군(6마리/군)으로 나누어 4주간 사육하였으며, 혈청과 간 조직의 주요 지표 성분과 항산화 및 산화관련 효소활성을 측정하였다. 그 결과, EC군이 NC군에 비하여 혈중 GOT 및 GPT 활성은 각각 87.90% 및 57.02%가 높았다. 간 조직의 중성지질과 총콜레스테롤 함량은 각각 77.51% 및 18.56%, LPO 함량은 193.86%가 높았다. 반면에 GSH 함량은 29.52% 낮았다. 또, 항산화계 효소인 SOD 및 GST 활성은 각각 42.78% 및 0.94% 낮게 나타났으며, XO(O type)효소활성은 70.83% 높았다. 이로써 알코올 급여군은 전형적인 간 손상과 함께 항산화계에도 손상이 있음을 나타내었다. ENY 및 EFY군은 EC군과 비교하여 GOT 및 GPT 활성은 각각 24.73~41.99% 및 22.91~30.11%가 낮았고, 중성지질 함량은 16.65~33.33%, 총콜레스테롤 함량은 22.44~23.11%, LPO 함량은 63.34~66.13%가 감소한 반면, GSH 함량은 24.61~35.60% 증가하였다. 또, GST 활성은 유의적인 차이를 보이지 않았으나, SOD 활성은 각각 214.94% 및 261.19% 높았다. 또, XO(O type) 효소활성은 40.34~51.20% 감소하였다. EFY군은 ENY군에 비하여 GOT 및 GPT활성은 각각 22.93%, 9.34% 낮았고, 혈중 중성지질과 총콜레스테롤 및 LPO 함량은 각각 20.01%, 0.86% 및 7.59%가 낮았다. 그리고 SOD 및 GST활성은 각각 21.52% 및 0.6%가 높았고, XO(O type) 효소의 활성은 18.19% 낮았다. 이상의 결과, 발효 이고들빼기 추출물이 알코올로 유도된 간 손상 흰쥐에 대하여 간 조직 TG와 총콜레스테롤 및 LPO의 함량을 감소시키고, GOT, GPT 및 XO의 활성감소와 동시에 SOD활성을 높임으로써 간의 해독효과가 큰 것으로 판단되며, 이러한 결과는 향후 발효 이고들빼기의 성분들을 이용한 기능성식품의 개발과 이를 위한 기초자료로 활용할 수 있을 것으로 사료된다.

간발암성 물질 검색에 있어서 Glutathione S-transeferase Placental Form 양성 병소와 철 저항 병소의 유효성 비교 연구 (The Comparison of Efficacy of Glutathione S-transeferase Placental Form Positive and Iron-Resistant Lesions in the Detection of Hepatocarcinogens)

  • 강경선;김형진;이영순
    • 한국식품위생안전성학회지
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    • 제6권1호
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    • pp.1-12
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    • 1991
  • 생후 6주령된 Fischer344 랫드를 4개군으로 나누어 시험 개시 일에 diethylnitrosamine을 제 1, 2, 3 군에 복강내로 각각 체중 kg당 200mg을 1회 주사하였고, 제 4군에는 생리적 식염수를 복강내로 1회 투여하였으며, 간 변화의 증폭을 위해 시험개시 3주후에 간의 약 67%를 부분절제하였다. 제1,2 군은 시험개시 후 제 2주부터 2-acetylaminofluorene(2-AAF)를 사료에 0.02%가 되게 섞어 4주간 투여하였고, 제3군과 대조군인 제4군에는 기초 사료만을 급여하였다. 제 1,3군은 철저항병소의 검색을 위하여 시험종료 2주전에 iron dextran을 체중 100g당 0.125 mg을 주 3회 피하로 투여하였고, 시험종료 후에 모든 랫드를 부검하여, 고정제로 고정한 후 일반적인 조직표본을 만들었다. 전암병소 검색을 위해 glutathione S-transeferase placental form(GST-P)에 대한 면역조직화화적 염색과 Perl's 법에 의한 철염색을 한 후, 동일한 조직을 연속절편하여 hematoxylin & eosin 염색한 것과 비교하였고, 칼라 화상분석기로 병소의 면적을 계산하여 통계학적 분석을 하였다. 본 연구의 결과는 철 저항 nodule이 주위의 정상조직과 한계가 어느정도 굴별되어 병변을 검색할 수 있었으나 GST-P 양성 nodule에 비하여 확실하지 않았고, 또한 철저항 foci는 주위의 정상조직과 한계가 명확하게 구별할 수 없었다. 간엽 전체에 대한 병소의 면적비교는 철 저항병소의 면적이 GST-P양성 병소의 면적보다 유의성 있게 낮았다. (p<0.01). 따라서 전암병소를 검색하는데는 GST-P양성 병소에 의한 검색이 철 저항 병소에 의한 검색보다 더 민감하고 믿을만한 지표가 되는 것으로 생각된다.하고 있는 각종 지구관측위성(EOS)들이 실용화 될 2000년 대에는 일반 지구환경감시는 물론 수계환경 감시 체계구축에 획기적인 진전이 있을 것으로 기대된다.limon(Jordan et Fowler) 및 청자갈치 Allolepis hollandi Jordan et Hubbs, 장갱이란 Stichaeidae의 세줄베도라치 식nogrammus hewagrammus(Temminck et Schlegel), 장갱이 Stichaeus grigorjemi Her\ulcornerenstein, 왜도라치 Chri'olophis wui(Wang et Wang ) , 괴도라치 Chirolophis joponicus(Jordan et snyder) , 벼슬베도라치 각ectrias benjamini Jordan et Snyder, 가시베도라치 Lumpenella nigricons Matsubara, 육점날개 Ophistocentws zonope jordan et Snyder, 그물베도라치 Dictyosoma burgeri Van der Hoeven 및 황점 베도라치Dictyosoma wbrimaculata Yatsu, Yasuda et Taki, 그리고 황줄베도라치란 Pholididae의 황줄베도라치 Phoris taczanowskii(Steindachner), 오색베도라치 Phoris omotus (Girad), 베도라치 Pholis nebuloso(Temminck et Schlegel), 횐베도라치 Pholisfangi(Wang et Wang) 및 점베도라치 Pholis crossispino(Temminck et Schlegel)의 17속 25종이 분류되었다. 이중에서 Zoarchias glaber, Chirofophis oui, Alectrias benjamini, Dictyosoma mbrimaculamia 및 Pholis crassispina의 5종은

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해양 와편모조류 Prorocentrum minimum에 대한 아세트아닐라이드계 제초제 프레틸라클로르의 분자 생물학적 저해 효과 (Molecular physiological inhibitory effects of chloroacetanilide herbicide pretilachlor on marine dinoflagellate Prorocentrum minimum)

  • 김한솔;기장서
    • 환경생물
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    • 제39권4호
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    • pp.452-462
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    • 2021
  • Pretilachlor (PRE)는 전 세계적으로 사용되는 아세트아닐리드계 제초제이며 수생 광영양생물에 미치는 영향에 대해서는 알려진 바가 거의 없다. 본 연구에서 해양 와편모조류 P. minimum를 대상으로 PRE의 생리적, 분자적 독성 영향을 평가하였다. 그 결과, PRE는 P. minimum의 성장률, 색소, 광합성 지표를 유의하게 감소시켰다. 또한, 광합성 관련 유전자 PmpsbA, PmpsaA 및 항산화 단백질 PmGST의 상대적 유전자 발현율과 세포 내 ROS 증가가 유의하였다. 이는 PRE가 P. minimum의 광합성 효율 저하 및 광계 손상을 야기하며, GST가 세포 내 산화 스트레스 및 PRE의 무독화에 관여함을 보여준다. 본 연구 결과는 PRE를 비롯한 아세트아닐라이드계 제초제가 해양 와편모조류의 세포 독성을 야기하며, 광합성 저해가 스트레스의 주요 원인임을 제시한다. 다른 아세트아닐라이드계 제초제가 비표적 광영양 생물에게 미치는 독성 영향은 아직 연구가 부족하므로, 향후 연구에서 다양한 생물종을 대상으로 추가 연구가 필요하다.