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대장균 베타-갈락토시데이즈를 이용하여 합성된 Phenylethanol Galactoside의 NMR Spectroscopy 및 Mass spectrometry (NMR Spectroscopy and Mass Spectrometry of Phenylethanol Galactoside synthesized using Escherichia coli 𝛽-Galactosidase)

  • 이향렬;정경환
    • 한국응용과학기술학회지
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    • 제37권5호
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    • pp.1323-1329
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    • 2020
  • 대장균 효소 𝛽-gal를 이용하여 합성된 phenylethanol galactoside (PhE-gal)의 분자구조를 NMR (1H-와 13C-)과 고성능 mass spectrometry를 이용하여 분석하였다. 그 결과 PhE-gal은 1H NMR에서 2-phenylethanol (PhE)에 갈락토실기가 도입되었음을 나타내는 피크가 나타났다. 방향족 고리에서 오는 𝛿H 7.30~7.21 ppm의 피크와 𝛿H 2.88 ppm에 나타난 벤질기 위치의 CH2에서 오는 피크는 PhE가 존재함을 나타낸다. 지방족 사슬 영역인 𝛿H 4.31 ppm, 4.07 ppm과 𝛿H 3.86~3.38 ppm에서 나타나는 7개의 proton 피크로부터 단당류가 도입되었음을 확인할 수 있었다. 13C NMR 스펙트럼에서 나타난 12개의 탄소 피크 중 4개의 피크는 방향족 고리인 페닐기로부터, 또한 단당류에서 기인한 6개의 탄소피크가 존재하므로 PhE에 단당이 도입되었음을 알 수 있다. PhE-gal의 분자량을 확인하기 위하여 질량분석기로 분석한 결과 m/z가 307.1181인 PhE-gal의 sodium adduct ion ([M+Na]+)이 나타나 생성물이 PhE-gal임을 알 수 있었다. 따라서 본 연구결과 E. coli 𝛽-galactosidase에 의한 촉매반응으로 PhE에 갈락토즈가 첨가된 생성물인 PhE-gal이 성공적으로 생합성 되었음을 확인하였다.

Characterization of the active site and coenzyme binding pocket of the monomeric UDP- galactose 4'- epimerase of Aeromonas hydrophila

  • Agarwal, Shivani;Mishra, Neeraj;Agarwal, Shivangi;Dixit, Aparna
    • BMB Reports
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    • 제43권6호
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    • pp.419-426
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    • 2010
  • Aeromonas hydrophila is a bacterial pathogen that infects a large number of eukaryotes, including humans. The UDP-galactose 4'-epimerase (GalE) catalyzes interconversion of UDP-galactose to UDP-glucose and plays a key role in lipopolysaccharide biosynthesis. This makes it an important virulence determinant, and therefore a potential drug target. Our earlier studies revealed that unlike other GalEs, GalE of A. hydrophila exists as a monomer. This uniqueness necessitated elucidation of its structure and active site. Chemical modification of the 6xHis-rGalE demonstrated the role of histidine residue in catalysis and that it did not constitute the substrate binding pocket. Loss of the 6xHis-rGalE activity and coenzyme fluorescence with thiol modifying reagents established the role of two distinct vicinal thiols in catalysis. Chemical modification studies revealed arginine to be essential for catalysis. Site-directed mutagenesis indicated Tyr149 and Lys153 to be involved in catalysis. Use of glycerol as a cosolvent enhanced the GalE thermostability significantly.

1, 2-Hexanediol과 1, 2-Hexanediol Galactoside의 HaCaT Cell에 대한 세포독성 (Cytotoxic Effects of 1, 2-Hexanediol and 1, 2-Hexanediol Galactoside on HaCaT Cell)

  • 김준섭;정경환
    • 대한화장품학회지
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    • 제44권3호
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    • pp.343-347
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    • 2018
  • 화장품에 방부제(살균/보존제)로 사용되는 1, 2-hexanediol (HD)로 인한 부작용을 극복하기 위하여, Escherichia coli (E. coli)의 ${\beta}-galactosidase$ (${\beta}-gal$)를 이용하여 transgalactosylation 반응으로 1, 2-hexanediol galactoside (HD-Gal)를 합성하였다. 본 연구에서는 합성된 HD-Gal의 인간 피부세포에 대한 독성이 어느 정도인지를 HD와 비교하여 관찰하였다. HD-Gal과 HD의 세포독성은 인간 피부각질형성세포(HaCaT cell line)에 HD와 HD-Gal을 처리한 후, cell proliferation assay를 이용하여 비교 분석하였다. 또한 이때, 위상차 현미경으로 HD-Gal과 HD로 처리한 세포의 상태를 비교 관찰하였다. 그 결과, HD-Gal은 42.2 mM에서 211 mM의 농도 범위에서 세포독성이 관찰되지 않았으며, 현미경 관찰에서도 큰 변화를 관찰할 수 없었다. 그러나, HD의 경우에는 저농도에서(42.2 mM and 84.4 mM)는 세포독성이 관찰되지 않았으나, 고농도(168.8 and 211 mM)에서 매우 높은 세포독성을 나타내었고, 현미경 관찰에서는 고농도에서는 물론이고, 세포독성이 관찰되지 않은 HD의 저농도에서도 세포모양과 세포 수에서의 변화가 관찰되었다. 앞으로 세포독성이 감소된 HD-Gal이 HD의 대체제로서 안전, 건강 및 웰빙 개념의 새로운 용도로 개발될 수 있을 것으로 생각된다.

칼만 RTS 필터를 이용한 선상 중력 자료 보정에 관한 연구 (A Study on Shipborne Gravity Data Correction Using Kalman RTS Filter)

  • 황종선;한현철
    • 자원환경지질
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    • 제43권4호
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    • pp.343-348
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    • 2010
  • 선상 중력 이상값은 기상악화 및 조사 선박의 급작스런 음직임에 의해 많이 왜곡된다. 이러한 자료 왜곡은 잘못된 해석을 유발할 수 있어 필히 제거되어야 하지만 완벽하게 모든 오차를 제거할 수는 없다. 일반적으로 사용하는 교차점 오차 보정은 교차점 자체에 대한 국부적인 보정이기 때문에 교차점 오차 보정을 한 후에도 그 자료에는 많은 오차 값들이 포함되어 있다. 이러한 단점을 해소하기 위하여 교차점에서는 물론이고 모든 자료에 포함되어 있는 오차값들을 최소화하기 위하여 칼만 필터중의 하나인 Rauch-Tung-Striebel(RTS) 필터를 이용하였다. RTS 보정을 수행한결과 자료 변위 폭이 최대 15 mGal에서 2 mGal 미만으로 감소되었고 교차점에서의 오차는 4.21 mGal에서 2.95mGal로 줄어들었다. 이 결과는 RTS 방법이 교차점에서는 물론 모든 자료에 포함되어 있는 오차 값을 최소화 하는데 효율적임을 제시하고 있다.

Baculovirus-곤충세포 상호반응에 대한 생화학적 연구 -I. AcNPV의 곤충세포 감염시 배지 첨가물을 이용한 재조합 ${\beta}-galactosidase$ 생산 향상- (Biochemical Analysis of Baculovirus-insect Cell Interaction: I. Improved Recombinant ${\beta}-Galactosidase$ Production Using Medium Additives at AcNPV Infection of Insect Cells)

  • 이기웅;김태용;정인식
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제38권6호
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    • pp.485-489
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    • 1995
  • T-flask와 air-lift 생물반응기를 이용하여 Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV)의 Tn5B1-4 세포에의 감염시 fatty acid 및 lipid, mannose, folic acid, $CaCl_2$등의 배지 첨가물이 재조합 ${\beta}-galactosidase\;({\beta}-gal)$ 생산에 미치는 영향을 조사하였다. Cholesterol, tocopherol, tricaprylin 또는 mannose를 첨가하거나 folic acid를 보강첨가 했을 때 AcNPV의 재조합 ${\beta}-gal$ 생산은 향상되었으나 $CaCl_2$의 보강 첨가는 ${\beta}-gal$ 생산을 높이는데 효과적이지 못했다. Air-lift 생물반응기에서 0.34 mM cholesterol, 2.2 mM mannose 및 0.045 M folic acid를 보강 첨가한 배지를 이용하였을 때 재조합 ${\beta}-gal$ 생산은 basal medium에 비해 약 2배 정도의 증진 효과가 있었다.

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갈옷과 흰옷 및 그 의복형태의 차가 착용감에 미치는 영향 (The Effect of Differences between Gal-Ot and Undyed Clothing and clothing Types on Wear Sensation)

  • 박순자;손원교
    • 한국의류학회지
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    • 제23권1호
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    • pp.30-41
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    • 1999
  • This study was conducted to verify the advantages of Gal-Ot. Gal-Ot is defined the clothings dyed with persimmon juice. Firstly the physical properties of fabrics were examined. Secondly the wear tests were conducted. The wear tests were performed in climatic chamber controlled 3$0^{\circ}C$ air temperature 50$\pm$5% R.H and 0.2m/s air movement. Four women subjects participated in this experiment and 4 times experiments were performed per one subject. The expeimental schedule was planned following 4 steps that is sedentary posture during 30 minutes-walking the 5。slope treadmill by 70m/min during 20 minutes-sedentary posture during 20 minutes-standing posture on toward the blowing wind during 10 minutes. The results obtained is as folows : The insulation of fabric was increased with dyeing with persimmon juice. The air permeability of fabric was remarkably increased with dyeing with persimmon juice. The mean skin temperatures of subjects were apt to be higher in wearing Gal-Ot than undyed clothing. The clothing micro temperature of subjects were slightly inclined to become lower in wearing Gal-Ot than undyed clothing, The clothing micro humidity was decreasee when: the subjects were gal-Ot than wore undyed clothing, And then it brought about more comfortable on wear sensation. The differences of physiological reactions were not consistent between clothing types except for sweat rate on the back. This result may be attributed the to complex experimental schdules consisted of four steps and to a little difference between open type and close type. However I consider that the clothing type of Gal-Ot is suitable for open type because Gal-Ot is summer wear for blocking the sultry heat.

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Molecular Characterization of Cold-Inducible ${\beta}$-Galactosidase from Arthrobacter sp. ON14 Isolated from Antarctica

  • Xu, Ke;Tang, Xixiang;Gai, Yingbao;Mehmood, Muhammad Aamer;Xiao, Xiang;Wang, Fengping
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제21권3호
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    • pp.236-242
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    • 2011
  • A psychrotrophic bacterium, Arthrobacter sp. ON14, isolated from Antarctica, was shown to exhibit a high ${\beta}$-galactosidase activity at a low temperature. A genomic library of ON14 was constructed and screened for ${\beta}$-galactosidase genes on functional plates containing 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-${\beta}$-D-galactopyranoside (X-gal) as the substrate. Two different ${\beta}$-galactosidase genes, named as galA, galB, were found in ON14. Computational analyses of the genes revealed that the encoded protein GalA belongs to family 2 of glycosyl hydrolysases and is a cold-active protein, whereas GalB belongs to family 42 of glycosyl hydrolysases and is a mesophilic protein. Reverse transcription analyses revealed that the expression of galA is highly induced at a low temperature ($4^{\circ}C$ ) and repressed at a high temperature ($28^{\circ}C$ ) when lactose is used as the sole carbon source. Conversely, the expression of galB is inhibited at a low temperature and induced at a high temperature. The purified GalA showed its peak activity at $15^{\circ}C$ and pH 8. The mineral ions $Na^+$, $K^+$, $Mg^{2+}$, and $Mn^{2+}$ were identified as enzyme activators, whereas $Ca^{2+}$ had no influence on the enzyme activity. An enzyme stability assay revealed that the activity of GalA is significantly decreased when it is incubated at $45^{\circ}C$ for 2 h, and all its activity is lost when it is incubated at $50^{\circ}C$.

Inhibitory Effects of Oriental Medicinal Herbs on Enzymatic Activity of Sialyltransferases (ST3Gal I and ST6Gal I) Associated with Cancer

  • Kim, Kyoung-Sook;Kim, Cheorl-Ho;Kim, June-Ki;Lee, Young-Choon
    • Journal of Life Science
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    • 제10권1호
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    • pp.51-56
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    • 2000
  • In many cases of human cancer, the appearance of hypersialylated glycan structures is related to a precise stage of the disease ; this may depend on the elebated sialyltransferase activity during carcinogenesis. The aim of this study was to investigate the inhibitory effects of Oriental medicinal herbs on enzymatic activities of two kinds ofsialyltransferase, Gal $\beta$ 1,3GalNAc$\alpha$2,3-sialyltransferase(ST3Gal I) and Gal $\beta$ 1,4GlcNAc $\alpha$2,6-sialyltransterases(ST6Gal I), which are well known as glycosyltransterases associated with cancer. The aqueous extracts of Scutellaria Baicalensis Georgi, Coptidis Rhizoma, Glycyrrhiza urlensis Fisch, Bupleuri Radix and Platycodi Radix were prepared and tested, respectively. At concentration of 100$\mu$g, Glycyrrhiza uralensis Fisch showed the highest inhibitory effects(about 42% and 57%, respectively) on ST3Gal Iand ST6Gal Iactivities. ST3GAl I was inhibited about 23% by Scutellaria baicalensi G댁햐, but not by the other samples, whereas ST6Gal I was inhibited about 20% and 40%,respectively, by Scutellaria baicalensis Georgi and Bupleuri Radix. All inhibitory effects were obtained in a concentration-dependent manner.

발효울금의 갈락토사민 투여에 의한 흰쥐의 간독성에 대한 보효 효과 (Hepatoprotective Activity of Fermented Curcuma longa L. on Galactosamine-Intoxicated Rats)

  • 김용재;유양희;전우진
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제41권6호
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    • pp.790-795
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    • 2012
  • 본 연구는 울금의 산업적 실용화를 극대화시키기 위해 Aspergillus oryzae를 이용하여 산업용 규격에서 생산된 발효울금의 일반성분 및 미량성분 분석과 발효울금을 이용하여 동물모델에서 14일간 예비 투여하고 GalN으로 급성 간독성을 유발한 후 혈액 중 간기능 지표물질의 변화 및 간조직의 조직학적 관찰을 통해 GalN로 유발된 급성 간독성에 발효울금의 간기능 보호효과를 평가하고자 하였다. 발효울금의 일반성분은 수분 0.15%, 조지방 4.68%, 조단백 4.35%, 조섬유 6.92%, 조회분은 6.83%로 분석되었다. 발효울금의 미량성분은 P, Mg, Ca 순으로 분석되었다. 간기능 지표효소인 AST와 ALT의 활성은 발효울금 300 mg/kg/day과 silymarin 150 mg/kg/day를 투여한 군에서 GalN만을 투여한 군과 비교하여 통계적으로 유의한 결과를 나타내어 발효울금 300 mg/kg/day의 예비 투여는 GalN에 대한 급성 간독성에 대해 보호효과를 갖으며, 양성 대조군인 silymarin 150 mg/kg/day 투여와 비교하여 유사한 간독성 보호 활성을 갖는 것으로 나타났다. ALP의 경우 발효울금을 100 mg/kg/day로 투여한 군에서만 GalN만을 투여한 군과 통계적으로 유의한 감소를 나타났고 300 mg/kg/day 발효울금을 투여한 군과 silymarin 투여군은 통계적 유의차가 나타나지 않았다. 중성지방의 경우 발효울금 300 mg/kg/day 투여군만 GalN만을 투여한 군과 비교하여 통계적 유의차가 나타났으나 silymarin 투여군에서는 동일한 효과가 나타나지 않았다. GalN으로 유도된 급성 간독성의 조직병리학적 결과 GalN만을 투여한 군에서 세포괴사 및 침윤된 염증세포, 카운실만소체의 괴사가 심하게 나타났으며 300 mg/kg/day 발효울금 투여군과 150 mg/kg/day silymarin 투여군에서 간조직의 괴사 및 염증의 개선효과를 관찰할 수 있었다. 혈청 분석 및 조직병리학적 결과를 종합한 결과 GalN 유발 간독성에 대한 개선효과는 300 mg/kg/day 발효울금 투여군과 150 mg/kg/day silymarin 투여군에서 나타나는 것으로 판단할 수 있었다. 이러한 결과로부터 본 연구에서 사용한 Aspergillus oryzae로 발효하여 산업적 규격에서 생산된 발효울금은 간기능 저하 개선 기능을 갖는 새로운 기능성 소재로서 간질환과 관련된 다양한 기능성식품 개발에 이용될 수 있을 것으로 생각된다.

회분식과 연속식 2단계 생물반응기에서 AcNPV의 곤충세포에의 감염시 배지 첨가물을 이용한 재조합 $\beta$-Galactosidase 생산의 증진 (Improved Recombinant ,$\beta$-Galactosidase Production Using Medium Additives at AcNPV Infection of Insect Cells in Batch and Continuous Two-Stage Bioreactors)

  • 김지선;이기웅
    • KSBB Journal
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    • 제9권3호
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    • pp.294-298
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    • 1994
  • $CaCl_2$, glucose, frutose, glutamine, glutamate 그리고 Ii pids와 같은 배지 첨가물들이 회분식 그리고 연속식 2단계 생물반응기 시스템에셔 재조합 ${\beta}$-galactosidase (${\beta}$-gal) 생산을 증진시키는가를 조사하였다. Sf 21 세포에 AcNPV의 감염시 $CaCl_2$, frutose, glutamate, cholesterol 및 tocoph eral과 같은 배지 첨가물을 첨가하였을 때 ${\beta}$-gal 생산이 증진되었다. 30mM $CaCl_2$, 2.2mM frutose, 4.lmM glutamine, 그리고 O.34mM cholesterol이 보강된 감염 배 지를 이용한 재조합${\beta}$-gal 생산은 약 40% 의 증가를 보였다.

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