This study evaluated the influence of cell stage of donor nucleus on nuclear injection, electrofusion and in vitro development in the rabbit to improve the efficiency of nuclear transplantation in the rabbit. The embryos of 8-, 16- and 32-cell stage were collected from the mated does by flushing viducts with Dulbecco's phosphate buffered saline(D-PBS) containing 10% fetal calf serum(FGS) at 44, 54 and 60 hours after hCG injection. The blastorneres separated from these embryos were used as donor nucleus. The ovulated oocytes collected at 14 hours after hCG injection were used as recipient cytoplasm following removing the nucleus and the first polar body. The separated blastomeres were injected into the enucleated oocytes by micromanipulation and were electrofused in 0.28 M mannitol solution at 1.5 kV /cm, 60 $\mu$sec for three times. The fused oocytes were cocultured with a monolayer of rabbit oviductal epithelial cells in M-199 solution containing 10% FGS for 72~120 hours at 39$^{\circ}C$ in a 5% $CO_2$ incubator. The cultured nuclear transplant embryos were stained with Hoechst 33342 solution and the number of cells were counted by fluorescence microscopy. The successful injection rate of 8-, 16- and 32-cell-stageblastomeres into enucleated oocytes was 86.7, 91.0 and 93.9%, respectively. The electrofusion rate of 8-, 16- and 32-cell-stage blastomeres with enucleated oocytes was 93.3,89.3 and 79.0%, respectively. Development of blastomeres to blastocyst was similar with 8-,16- and 32-cell-stage donor nuclei(26.2, 25.8 and 26.6%, respectively, P<0.05). The mean number of cell cycle per day during in vitro culture in nuclear transplant embryos which received 8-, 16- and 32-cell- stage nuclei was 1.87, 1.81 and 1.43, respectively.
Kim, Song Yeon;Hwang, Tae Sung;An, Soyon;Hwang, Gunha;Go, Woohyun;Lee, Jong Bong;Lee, Hee Chun
한국임상수의학회지
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제38권3호
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pp.135-142
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2021
The aim of this study was to evaluate the contrast effect if a saline flush following low-volume contrast medium bolus improves vascular and parenchymal enhancement using a saphenous vein in abdominal CT for small animals. Six clinically healthy beagle dogs underwent abdominal contrast-enhanced CT. They were divided into nine groups (each group, n = 6), according to the volume of contrast medium 1, 2, and 3 mL/kg, and volume of the saline solution 0, 5, and 10 mL. Dynamic CT scanning was performed at the hepatic hilum level. The maximum contrast enhancement, time to maximum enhancement, and time to equilibrium phase were calculated from the time attenuation curves. Mean attenuation values for all groups were measured in the aorta, portal vein, and liver. After contrast enhancement, grading of image quality regarding surrounding artifacts and evaluation of the hepatic hilum structures was performed. For comparison of the effect of the contrast material and saline solution doses, differences in mean attenuation values between the contrast medium 2 mL/kg without saline flush group and the remaining groups, and between contrast medium 3 mL/kg without saline flush group and the remaining groups, were analyzed for statistical significance. There were no significant differences between with and without saline flushing at the same contrast medium dose groups. There were no significant differences in peak values between the 3 mL/kg dose of contrast medium alone and the 2 mL/kg dose of contrast medium with saline solution flush. However, there was a significant difference in peak values between the 3 mL/kg dose of the contrast medium without the saline flush group and the 2 mL/kg dose of the contrast medium alone group. Grades of the artifacts were not significantly different in the saline flush regardless of the dose of the contrast medium. Using 2 mL/kg of contrast medium with saline solution flush resulted in similar liver parenchyma attenuation, compared with using 3 mL/kg of contrast medium without saline solution flush. In CT evaluation of hepatic parenchymal diseases, using 2 mL/kg of contrast medium with saline solution flush may yield decreased risk of contrast nephropathy and cost-saving.
The long term goal of this research is to develop an efficient procedure for large scale production of genetically identical or cloned animals. To improve nuclear transpalntation efficiency in the rabbit, this study evaluated the age of nuclear recipient oocytes on the different steps of nuclear transplantation. The ovulated oocytes in different ages were collected from the superovulated does by flushing oviducts with Dulbecco's phosphate buffered saline(D-PBS) supplemented with 10% fetal calf serum(FCS) from 13 to 15, 17 to 20 and 23 to 26 hours after hCG injection. The denuded oocytes were used as nuclear recipient cytoplasm following enucleation by micromanipulation. The blastomeres separated from the 8-cell embryos were used as nuclear donor. The enucleated oocytes receiving a blastomere in the perivitteline space were fused in the 0.28 M mannitol solution at 1.5 kV/cm, 60 sec for three times. The fused oocytes were co-cultured with the monolayered rabbit oviductal epithelial cells in TGM-199 solution with 10% FCS for 72 hours at 37$^{\circ}C$ in a 5% $CO_2$ incubator. The cultured nuclear transplant embryos and in vivo developed embryos collected at 72 hours after hCG injection were stained with Hoechst 33342 dye. Their cell numbers were counted under a fluorescent microscope. The results obtained were summarized as follows ; 1. The aged oocytes(20 hrs. post hCG) showed significantly(P<0.05) higher fusionrates(70 ~ 90%) than the recently ovulated oocytes(30.8%) 2. The aged oocytes which were electrically activated and fused at 20 hours developed to blastocyst at significantly(P<0.05) high rate, while none of the recently ovulated oocytes developed to blastocyst. 3. Even though the aged oocytes at 23~26 hours showed higher fusion rate(85.7%), not only they were inadequate to manipulate but also their developmental potential to blastocyst was highly impaired. 4. The developmental potential in vitro of nuclear transplant embryos was significantly retarded than in vivo deveolped embryos.
토양정화를 위한 토양 세정 및 세척 공정에서 계면활성제 선택 기준과 가장 중요한 설계인자는 오염물질의 용해도이다. 계면활성제의 오염물질 용해도는 오염물질과 평형상태를 만든 후 Dichrolomethane을 이용한 추출, 증발, 농축 등의 전처리과정을 거쳐야 한다. 따라서 계면활성제 용액 내 유류 오염 물질의 용해도 분석은 많은 시간과 재료를 필요로 한다. 계면장력은 계면활성제용액과 유류오염물질 사이에 유지되는 힘을 지칭하는 것으로 용해도와 밀접한 관계를 가진다. 본 연구는 계면활성제용액과 경유 간 계면장력과 용해도를 측정하여 계면장력과 용해도간 상관관계를 정립하므로 신속한 계면 장력 측정을 통한 용해도를 가늠할 수 있는 방안을 제시하였다. 계면장력과 유류용해도간 상관관계를 평가한 결과 두 특성은 기하급수적인 반비례관계를 보였다. 즉, 계면장력이 5 dyne/cm 이상조건에서 경유의 용해도는 크게 차이를 보이지 않다가 1 dyne/cm 이하에서 경유의 용해도는 급격하게 증가하였다. 앞으로 계면활성제용액 간 계면장력을 우선적으로 측정해 본다면 토양정화에 적합한 계면활성제 종류 및 농도를 매우 신속하고 효율적으로 선택할 수 있을 것으로 판단된다.
본 연구에서는 관형보다 단위시간당 투과량이 월등히 많은 다채널 세라믹 분리막을 사용하였으며, 고도정수처리 혼성공정은 모듈 내부와 다채널 정밀여과막 외부 사의의 공간에 입상활성탄(GAC)을 충전하여 구성하였다. 정수 원수 중의 자연산 유기물(NOM)과 미세 무기 입자를 대체하기 위해, 휴믹산(humic acid)과 카올린(kaolin) 모사용액을 사용하였다. 유기물질의 영향을 살펴보기 위해 일정한 30mg/L의 카올린 농도에서 휴믹산(humic acid)의 농도를 $2{\sim}10\;mg/L$로 변화시켰다. 그 결과, 막오염의 저항($R_f$)과 투과선속(J)은 휴믹산의 농도에 따라 큰 영향을 받았다. 또한 역세척 주기(FT)의 영향을 살펴본 결과, 더 짧은 FT는 빈번한 역세척으로 막오염의 감소와 투과선속의 향상에 더 효과적이었다. 그러나 운전비용을 고려하면, 최적 FT조건은 8분이였다. 한편, 이 다채널 정밀여과막 및 GAC 혼성공정을 호소수에 적용한 결과, 평균 처리효율은 탁도 98.02%, $UV_{254}$ 흡괌도 75.64%, 총용존고형물(TDS) 7.18%, 화학적산소요구량 84.73%이었다.
중금속과 총 석유 탄화수소(TPH)로 동시 오염된 복합오염 토양을 정화하기 위해 펜톤 산화와 토양 세정법에 활용되고 있는 $H_2O_2$와 sodium dodecyl surfate (SDS)를 활용하여 강화된 동전기를 연구하였다. 또한, 토양 고유의 특성 차이 및 전극액 농도에 따른 정화 효율의 영향을 확인하기 위해 토양과 농도를 달리하여 실험하였다. 인공적으로 오염시킨 토양에서 10% $H_2O_2$와 20mM SDS를 활용한 실험에서 중금속 정화 효율이 가장 높게 나타났으며, 반면에 같은 농도의 용산 토양 실험에서 토양 고유의 높은 산 완충능력으로 중금속 정화 효율이 떨어졌다. 20% $H_2O_2$와 20mM SDS으로 전극액 농도를 높인 실험을 통해 높은 전류는 토양의 pH에 영향을 주었으며, 이로 인해 중금속 정화에 영향을 미쳤다. TPH의 정화 효율의 경우 용산토양의 높은 산 완충능력과 유기물 함량으로 인해 인공적으로 오염시킨 토양에 비해 산화 효율이 저하되었다. 게다가 40mM의 sodium dodecyl surfate (SDS)의 농도가 주입될 경우, SDS의 scavenger 영향 때문에 TPH 정화에 악영향을 주었다. 토양 고유의 구성성분 및 전극액 농도가 동전기-펜톤 공정의 전기화학적 현상 및 전기삼투유량, 오염물질 정화에 매우 큰 영향을 주는 인자로 판명되었다.
Large scale production of cloned embryos requires the technology of multiple generational nuclear transfer(NT) by using NT embryos itself as the subsequent donor nuclei. In this work we investigated comparatively the effects of enucleated oocytes treated with ionomycin and 6-DMAP on the electrofusion rate and in vitro developmental potential in the first and second NT embryos. The embryos of 16-cell stage were collected from the mated does by flushing oviducts with Dulbecco's phosphate buffered saline(D-PBS) containing 10% fetal calf serum(FCS) at 47 hours after hCG injection. The recipient cytoplasms were obtained by removing the nucleus and the first polar body from the oocytes collected at 15 hours after hCG injection. The enucleated oocytes were pre-activated by 5 min incubation in 5$\mu$M ionomycin and 2 hours incubation in 2 mM 6-DMAP at 19~20 hours post-hCG before microinjection. In the first and second generation NT, the unsynchronized 16-cell stage embryos were used as nuclear donor. The separated donor blastomeres were injected into the enucleated activated recipient oocytes by micromanipulation and were electrofused by electrical stimulation of single pulse for 60 $\mu$sec at 1.25kV/cm in $Ca^2$+, $Mg^2$+ - free 0.28 M mannitol solution. In the non-preactivation group, the electrofusion and electrical stimulation was given 3 pulses for 60 $\mu$sec at 1.25 kV/cm in 100$\mu$M $Ca^2$+, $Mg^2$+ 0.28 M mannitol solution. The fused oocytes were co-cultured with a monolayer of rabbit oviductal epithelial cells in TCM-199 solution containing 10% FCS for 120 hours at 39$^{\circ}C$ in a 5% $CO_2$ incubator. The results obtained were summarized as follows: 1. In the first generational NT embryos, the electrofusion rate of preactivated and non-activated oocytes(80.4 and 87.8%) was not significantly different, but in the second generational NT embryos, the electrofusion rate was significantly(P<0.05) higher in the non-activated oocytes(85.7%) than in the preactivated oocytes(70.1%). 2) In the first and second generational NT embryos, the developmental potential to biastocyst stage was significantly(P<0.05) higher in the preactivated oocytes(39.3 and35.7%) than in the non-preactivated oocytes(16.0 and 13.3%). No significant difference in the developmental potential was shown between the first and second generational NT embryos derived from the preactivated oocytes. In conclusion, it may be efficient to use the oocytes preactivated with ionomycin and 6-DMAP for the multiple production of cloned embryos by recycling nuclear transfer.
폐보존방법을 개선시키기 위하여 많은 보존액들이 개발되고 있다. 본 연구의 목적은 가장 많이 알려진 세포외액형 폐보존액인 저포타슘 덱스트란(LPD)용액과 tiehalose를 포함하는 새로 개발된 세포외액형 폐보존액인 ET-Kyoto용액의 폐 보존효과를 비교분석하여 앞으로 있을 폐이식에 대비하고자 한 것이다. 12마리의 가토로부터 폐장블록을 적출하여 $10^{\circ}C에서$ 4시간동안 보관한 다음 혈액으로 재순환시키는 폐장분리관류모형을 이용하였다. 각군은 6마리씩의 토끼로 구성되었고 LPD용액과 ETK용액을 각각 100 mL/kg씩 주입하였다. 폐보존액 주입전에 20$\mu\textrm{g}$의 prostaglandin El을 사용하여 폐동맥수축을 예방하였다. 60분간의 재관류후 유출혈액의 산소분압은 Em군에서 LPD군보다 $높았으며(486.5\pm80.3$ mmHg versus 432.5 $\pm$ 82.9 mmHg at FiO2 1.0, p-value = NS), 평균 폐동맥압은 비슷하였다(33.7 $\pm2.2$ mmHg versus $35.5\pm2.0$ mmHg, p-value = NS). 흡기말기도내압은 ETK군에서 현저히 $낮았으며(8.0\pm0.6$ mmHg versus 11.8 $\pm$ 1.4 mmHg, p-value : 0.02), 습윤중량은 두군간의 통계학적인 차이는 $없었다(70.2\pm6.9%$ versus 78.5 $\pm$ 6.1%). 상기 결과로 두가지 \ulcorner보존액은 임상적으로 사용가능할만큼 만족할만한 보존기능을 확인 할 수 있었다. 그러나 두 군간의 보존효과에서는 현저한 차이가 없었다.
장기이식 수술의 개발과 성공은 신장, 간장, 췌장, 심장 및 폐와 이식을 가능하게 하였으나 공여 장기 의 후송, 장시간 보관의 어려움과 이식 중에 발하는 허혈성 손상에 대한 예방에 많은 문제가 있었다. 현 재까지 폐의 장기 보존에 있어서 그 보존용액에 대해서는 많은 연구가 있었으나 혓태학적 연구가 부족 한 것 같다. 따라서 본 연구의 목적은 기존의 Euro-Collin용액과 University of wisconsin용액의 효과를 시간에 따 른 형태학적 변화와 폐의 수분도의 변화를 관찰함으로써 냉한에 보존된 폐의 변화의 차이를 알아보는데 있다. 방법은 황견을 세 군으로 나누어 보존액을 Group 1(n:5)은 normal saline으로, Group 2(n:5)는 Euro-Collins solution으로, Group )(n:6)는 University of Wisconsin solution등으로 나누어 60시 간까지 냉한에 보존하면서 시간에 따른 형태학적 변화와 폐의 수분율의 변화를 관찰하였다. 결과를 보면 폐의 수분율은 보존 후 6시간부터 증가하여 12시간 후 최대치가 되나,각군 별로는통계 적 인 차이는 없었다. 형 태학적 인 변화로는 제 1군에서 5예 중 1예에서 냉한 보존 1시간 후 자장 먼저 al- veolar septum의 변화를 \ulcorner였고, 2군은 냉한 럴존 6시 간 후부터 5예 중 )예에서 alveolar septum의 distor- tion과 swelling이 있었으며 또 pneumocyte의 변화를 보였고, 3군에서는 6시간 후에는 5예 중 I예에서, 12시간 후에는 5예 중 4예에서 alveolAr septum의 swelling을 보였다. 또 pneumocyte에 대한 변화는 1군 에서는 24시간 후부터, 2군에서는 48신간 후부터, 3군에서는 냉한 보존 60시 간 후에 나타났다 이와 같이 세포의 형태학적 보존은 3군에서 잘 되는 것으로 나타났다.두 군간에 퇴원일자가 P value 0.03으로 의의 있게 흥강경으로 수술한 군에서 짧았다. Group C는 평균연령 45.8세, 수술시간 105분, 통증제거 3.2회, 흥관삽관 6.1일이 었으며 진단율은 81.8 % 였고 group D는 평균연령 53.3세, 수술시간 121분, 통증제거 2.6회, 흥관삽관 10.5일이었으며 진단율 은 100%였다. 수술과 관련된 합병증으로 Group A는 수술중 혈액 량감소성쇽과 심장마비가 각각 1예씩 있었으나 회 복이 되었고수술후농흥과출혈이 각각 1예씩, 일시적 호흡정지 1예, 흉관 7일 이상유지가)예 있었다. Group B에서는 성Til마비와 흥관 7일 이상 유지가 각각 2예씩 있었으며 Horner's 증후군과 brachial neuropathy가 각각 1예씩 있었다. 본 저자들은 비디오 흥강경을 이용한 종격동 종양의 제거를 비교적 안전하게 하였으며 입원기간도 짧 고 수술과 관련된 이병율 및 사망율도 적어 환자를 적절히 선택함으로서 비디오 흥강경수술이 종격동종 괴 절제시 에 좋은 치료방법이라고 사료된다.지수가 유의한 증가를 보였는데 이는 수술 \ulcorner 동반된 폐동맥 성형술등의 영향이 있었음을 감안하여야 할 것으로 생각되었다. 한편 수술전 폐동맥 크기에 대한 지표로서 폐동맥 지수(PAI)와 McGoon 비(MGR)와는 다음과 같은 유의한 상관관계가 있 음을 알 수 있었다 상관식 : PAI : MGRxl18.0-12.4. 결론적으로 양방향성 상대정맥-폐동맥 단락술이 동맥혈내 산소포화도는 증가시키나 폐동맥 지수는 단기간의 본 연구에서는 증가하지 않는 것으로 나타났다. 향후 박동성 양방향성 상대정맥-폐동맥 단락 술이나 또는 Blalock-Taussig 단락술등이 폐동맥의 성 장에 미치는 영 향에 대한 연구가 필요할 것으로 생각된다.0s, in addition to the topics which were interested in before
Objectives : Acne, one of the most common disorders in dermatology clinic, is a chronic inflammatory disease which has the symptoms of comedones, papules, pustules, cysts, nodules and scars mainly on the face. Although some of pathologic findings are suggested, but the exact causes and mechanisms are not yet known in Western Medicine. Hwangryeonhaedok-Tang(HRHDT) is an antiinflammatory, antipyretic and detoxifying herb decoction. In this report, we would like to share our experience of acne treatment with HRHDT. Methods : We had treated several patients with acne, facial flushing and uprising febrile sensation on face using oral administration and external application of HRHDT. HRHDT is basically made up with Scutellariae Radix, Coptidis Rhizoma, Phellodendri Cortex and Gardeniae Fructus. In this trial, several other herbs were added according to the individual patient's accompanying symptoms. After the decoction of herbs in amount for 10 days, $Yogourmet^{(R)}$ Kefir Starter 10 g was added to the herbal solution that was then fermented in an incubator at $25^{\circ}C$ for 72 hours, and divided into 30 doses. Results : Photographies were taken before and after the treatment. The severities of acne were evaluated with these photos according to the Korean Acne Grading System(KAGS). As results, we observed dramatic clinical improvements and the decreases of KAGS grades after the average treatment period of 8 weeks. The medication was orally administered 3 times a day and the external treatment was applied average twice a week during the whole treatment period. Conclusions : From these results, HRHDT may be considered as a good prescription for the febrile and toxic type of acne patients.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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