Stromal cell-derived factor (SDF-1) is a CXC chemokine that selectively activates the CXCR4 chemokine receptor. Fibronectin is an intracellular matrix component that binds integrin and mediates cell-matrix adhesion. Activation of the integrin receptor can occur in two ways: by ligand binding (outside-in signaling), and in response to intracellular events (inside-out signaling). In the current study we showed that SDF-$1{\alpha}$ inhibited adhesion of T lymphocyte Jurkat cells resulting from binding high concentrations of fibronectin as well as that of THP-1 monocytes. The effect of SDF-$1{\alpha}$ on fibronectin-mediated adhesion was partly reversed by the CXCR4 receptor antagonist T140. Our results suggest that an SDF-1/CXCR4 signal pathway modulates fibronectin-mediated lymphocytes adhesion.
CD29 $({\beta}1-integrins)$ is one of major adhesion molecules involved in regulating cell adhesion, migration and morphological changes. In this study, we investigated the regulatory role of CD29 in monocytic functions using monocytic cell line U937 cells. CD29 was found to be one of highly expressed membrane proteins in U937 cells, according to flow cytometric analysis. The activation of CD29 by agonistic antibody MEM101A and extracellular matrix protein (ECM) fibronectin strongly induced cell-cell and cell-fibronectin adhesions. However, blocking antibodies to CD98 and CD147 showed different inhibitory features in these two adhesion events. Furthermore, U0126, an ERK inhibitor, only blocked cell-cell adhesion but not cell-fibronectin adhesion, indicating that cell-cell or cell-fibronectin adhesion events may be regulated by different molecular mechanisms. Meanwhile, CD29 activation also enhanced ROS generation but not phagocytic ability, and similarly radical scavenger N-acetyl-L-cysteine strongly blocked CD29-mediated cell-cell adhesion, implying that ROS may play a critical role in up-regulating cell-cell adhesion. Therefore, our data suggest that the activation of CD29 may be critically involved in regulating monocytic cell-mediated cell-cell adhesion and ROS generation.
근세포 융합에 있어서 당단백질의 역할을 세포내 glycosylation의 저해제인 tunicamycin을 이용하여 검토하였다. 근세포가 읖합하기 전 여러 시기에 tunicamycin을 0.04091m숙 농도로 처리하면 세포내 glycosylation과 근세포 융합은 크게 감소되지만, 단백질 합성률과 creatine kinase 활성은 별로 변하지 않는 점으로 미루어 보아 근세포 표면의 당단백질은 세포간의 recognition과 adhesion에 관여하는 것으로 추정할 수있었다. 따라서, 표지된 Con A 염색법을 써서 근세포 원형질막의 당단백질의 변화를 검토해 본 결과 tunicamycin을 처리한 경우 원형질막 당단백질의 대부분이 감소됨을 볼 수 있었으며, 아울러 근세포내 단백질의 분해속도는 증가하고 fibronectin은 감소하는 현상을 관찰할 수 있었다. 한편, fibronectin(20 ug/ml) 을 tunicamycin과 같이 처리한 경우에는 융합이 억제되지 않았다. 이상의 결과들은 tunicamycin이 근세포가 adhesion하는데 필요한 세포막표면의 fibronectin의 유용성을 감소시킴으로써 근세포의 융합을 억제할 가능성을 제시하는 것이다.
배양 계배 근세포의 분호과정에서 fibronectin양의 변화를 immunoblotting법을 써서 정량해 본 결과 근세포의 분화에 따라 감소함을 알 수 있었다. 이처럼 근분화과정에서 fibronectin의 수준이 변하는 이유를 알아보기 위해서 fibronectin의 28,000 dalton(28 kDa)의 amino terminal fragment와 85,000 dalton (85kDa)의 cell binding fragment의 근원세포와의 상호작용에 관해 조사하여 보았다. 125 l-28 kDa fragment가 근원세포와 특이하게 결합하는 양상은 시간 경과에 따라 변하여 60분이내에 최대 수준에 도달하였다. 아울러 28 kDa fragment는 125 I-28 kDa fragment의 결합을 억제하였으나, 85 kDa fragment의 결합은 억제하지 않았다. 이러한 사실은 28 kDa fragment fibronectin수용체와 결합하고 cell adhesion수용체와는 결합하지 않음을 암시하는 것이다. 따라서 fibronectin수준의 감소는 근원세포에 존재하는 fibronectin수용체의 감소와 연관되는 현상으로 추정할 수 있었다.
The inner shell of the chestnut (Castanea crenata S. et Z., Fagaceae) has been used as an anti-wrinkle/skin firming agent in East Asia, and preliminary experiments have found that a 70% ethanol extract from this plant material can prevent cell detachment of skin fibroblasts from culture plates. In order to examine the molecular mechanisms underlying this phenomenon, its effects on the expression of adhesion molecules, such as fibronectin and vitronectin, were investigated using the mouse skin fibroblast cell line, NIH/3T3. Using fixed-cell ELISA, Western blotting and immunofluorescence cell staining, it was clearly demonstrated that the chestnut inner shell extract enhanced the expression of the cell-associated fibronectin and vitronectin. Scoparone (6,7-dimethoxycoumarin), isolated from the extract, also possessed similar properties. These findings suggest that the enhanced expression of the adhesion molecules may be one of the molecular mechanisms for how the chestnut inner shell extract preventing cell detachment and may be also responsible for its anti-wrinkle/skin firming effect.
1. 연구 목적 Fibronectin은 세포외기질의 주요성분인 거대 당단백질로서, 조골세포의 부착과 증식 및 이동능에 중요한 역할을 담당한다고 알려져 있다. 이러한 fibronectin의 조골세포에 대한 영향을 실제 임상에 적용하기 위해서, 전체 fibronectin 단백질을 사용하는 것은 면역학적으로나 경제적으로 많은 단점을 안고 있어서, 유효한 반응단위만을 추출하여 활용하는 것이 바람직한 방법으로 알려져 있다. 이 연구의 목적은 세포부착에 주로 관여하는 fibronectin type III분절 중 10번 도메인이 조골양 세포에 미치는 영향을 전체 fibronectin단백질과 fibronectin type III 7-10 도메인 분절과 비교, 관찰하는 것이다. 2. 연구 방법 사람의 fibronectin을 기초로 한 적절한 primer로서, 유전자 재조합법을 이용하여 fibronectin type III 10 도메인과 fibronectin type III 7-10 도메인 분절을 얻었으며, 전체 fibronectin분자는 상용으로 준비하여 24-well 세포배양 용기에 도포하였다. 배양된 조골양세포(HOS cell)를 $1x10^5$ cells/well의 농도로 각 well에 분주하여 $37^{\circ}C$에서 1시간 배양을 하였다. Cell adhesion assay를 실시하기 위해 10% formaldehyde로 고정시키고 1% Crystal Violet으로 염색하여 광학현미경을 관찰 후 2% SDS를 처리하여 microplate reader기를 이용하여 570nm에서 혼탁정도를 측정하였다. 음성대조군으로는 RPMI 용액을 사용하였다. 동일한 방법을 이용하여 준비된 $35mm^2배양접시에 HOS cell을 $37^{\circ}C$에서 4일간 배양 후, MTS assay를 이용하여 세포 증식도에 미치는 영향을 관찰하였다. 6일째 405nm에서 활성화된 세포에서 분비된 p-nitrophenol을 이용한 alkaline phosphatase activity를 측정하였다. 3. 결과 및 고찰 Fibronectin type III 10 도메인은 HOS cell에 대한 생물학적인 효과면에서, 전체 fibronectin 분자 및 fibronectin type III 7-10 분절과 통계적으로 유사한 세포부착도를 보여주었으며, 세포증식도와 alkaline phosphatse 활성도면에서도 큰 차이가 나타나지 않았다. 이상의 연구결과로 볼 때, fibronectin type III 10 도메인이 조골세포의 증식을 목적으로 사용하는 생체재료의 표면개질 부착물질로 응용할 수 있는 가능성이 있다고 하겠다.
G-Rh1에 의한 단핵구 세포주인 U937 세포의 유착조절 능을 조사하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. G-Rh1은 CD29 항체 (MEM101A) 처리에 의해 유도된 세포-세포간 유착현상을 유의적으로 억제하였다. 2. G-Rh1은 fibronectin처리에 의해 유도된 U937 세포-fibronectin간 유착현상을 유의적으로 억제하였다. 3. G-Rh1은 CD29의 세포표면 발현 수준을 유의적으로 감소시켰다. 최근 활발히 G-Rh1의 약리작용 연구들이 진행되고 있다. 특별히, 본 화합물은 항알러지, 피부염증질환 치료효과, 항암효과 및 여성호르몬 유사기능 등이 있는 것으로 보고된 바있다. CD29-매개성 세포유착과정이 다양한 염증과정, 알러지 반응 및 암세포의 이동 및 전이성과 관련이 있다는 관점에서 볼 때 본 연구결과는 이들 약물이 갖는 치료기전의 하나가 CD29 기능저해에서 비롯될 수 있음을 제시한다고 하겠다. 이후 G-Rh1의 억제 기능에 관한 기전 이해를 위해 세포유착 유도 신호전달 단백질의 활성을 포함한 다양한 분자적 수준에서의 추가적인 실험들을 진행하고 한다.
Diethylstilbestrol (DESB) is a synthetic estrogen not only that routinely prescribed, but also that known to be a teratogen. In this study, we found a novel pharmacological feature that DESB is able to positively modulate CD29 $({\beta}1-integrin)$ function. Thus, DESB up-regulated homotypic cell-cell adhesion of monocytic U937 cells mediated by CD29. However, DESB did not increase the surface level of CD29 and its binding activity to ligand (fibronectin), according to flow cytometric analysis and cell-fibronectin adhesion assay. Instead, the DESB-mediated up-regulation of cell-cell adhesion was blocked by several signaling enzyme inhibitors. Treatment of U0126 [an extracellular signal-regulated kinase (ERK) inhibitor], SB20358 (a p38 inhibitor) or Rp-8-pCPT-cGMP (a protein kinase G inhibitor) clearly inhibited DESB-mediated up-regulation of cell-cell adhesion induced by CD29. However, estrogen receptor antagonist ICI 182,780 failed to abrogate DESB effect. Therefore, our data suggest that DESB may up-regulate CD29-mediated cell-cell adhesion via modulating intracellular signaling enzymes such as ERK, PKG, and p38, independent of estrogen receptor function.
Chinese Hamster Ovary( CHO) cells were cultured on the surface-modified polymers described in the previous study( "Polymer Surfaces for Cell Adhesion. 1. Surface Modification of Polymers and ESCA Analysis, " J. of KOSOMBE, Vol. 10, No. 1, 43-51, 1989). Among the physicochemical treatment methods. the chloric acid treatment was found to be the best method of rendering the polymer surfaces adhesive for CHO cells probably due to the high density of hydroxyl groups on the surface. Among the biological methods, the fibronectin treatment was best for CHO cell-compatibility probably due to specific active sites existed on the tell-binding domains of the fibronectin structure. When we compare the cell-compatibility of the chloric acid - and the fibronectin -treated PET surfaces, the number of cells attached on the surfaces were increased by 460.5 % and 559.0 % and, respectively, after 32 hr CHO cell culture, compared to that of untreated PET.eated PET.
Monocyte interaction with fibronectin (FN) mediates specific cell surface receptors and results in cell attachment and differentiation. Several cell-mediated activities for various fragments of FN have been documented. To investigate the regulatory mechanisms of monocyte differentiation by cell binding domains of FN and their receptors, cell attachment-, cell migration-, and its respective inhibition assay were carried out. Monocyte recognizes 38-kDa domain distinctively from its recognition of 85-kDa domain, and the heparin-binding site of the 38-kDa fragment is not involved in monocyte adhesion. Based on these experimental results, it can be suggested that monocvte/macrophase interacts with at least two different sites in FN, which is critical step in cell adhesion and (or) migration.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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