The effect of fermentation parameters and medium composition on the simultaneous mycelial growth and exo-polymer production from submerged cultures of Ganoderma applanatum was investigated in shake-flask cultures. The optimum initial pH for mycelial growth and exo-polymer production was 5.0 and 6.0, respectively. The optimum temperature was $25^{\circ}C$ and the optimum inoculum content was 3.0% (v/v). The optimal carbon and nitrogen sources were glucose and corn steep powder, respectively. After 12 days fermentation under these conditions, the highest mycelial growth was 18.0 g/l and the highest exo-polymer production was 3.9 g/l.
각종 버섯에 있어서 옥수수배아박과 CMS함량별 배지 첨가에 의한 미강대체효과를 균사 생장과 밀도 측면에서 고찰하였다. 본 시험을 통하여 옥수수배아박과 CMS는 미강대신 사용할 수 있는 많은 장점을 갖고 있는 영양첨가제로 확인된 결과는 다음과 같다. 1. 느타리버섯은 CMS 10%첨가시 93mm/10일 옥수수배아박 10% 첨가시 90mm/10일로 균사생장이 가장 좋았으나 균사밀도는 대조구 74mm/10일에 비해 약 현저히 균사생장과 밀도가 좋았다. 팽이버섯 수량을 고려한다면 10~30%까지 혼합하면 균사생장과 밀도 뿐만아니라 수량 증수에도 촉진적으로 작용될 것으로 추정되었다. 4. 표고버섯은 CMS 10~40%첨가시 58~52mm/10일로 옥수수배아박 10~30%첨가시 56~49mm/10일로 무처리 47mm/10일 보다 촉진적으로 작용하였다. 5) 영지버섯은 CMS와 옥수수배아박을 10~30%첨가시 각각 76~72mm/10일, 74~69mm/10일보다 촉진적으로 작용하였다.
발효기에서의 균사체 생장과 세포외다당류의 생산을 위한 최적 배양조건을 조사하기 위하여 회분식 반응기를 이용하여 연구한 결과 최적 회전속도와 통기량은 각각 200 rpm과 1.5 vvm 었다. 최적 배양 환경하에서 5L발효기(working volume 2 L)에서 배양한 결과 각각 10.21 g/L 와 3.56 g/L의 mycelial growth와 exo- polysaccharide를 얻었다.
새로운 페니실린 발효방법으로서, Penicillin chrysogenum의 포자를 담체의 미세구멍 조직에 흡착시킨 후 배양하여 얻은 균사증식담체를 이용하여 페니실린 발효를 시도하였다. 고정화 담체로써는 Celite가 가장 효율적이었으며, 이때 균사는 담체의 내부에서부터 포자가 발아하여 담체의 표면에서 증식하기 때문에 매우 안정된 biofilm growth를 얻을 수 있었다. 프라스크 배양에서 담체의 양을 5-10% 첨가하였을 때 세포의 증식과 페니실린의 생산이 전통적인 dispersed filamentous growth 에 의한 발효방법보다 현저히 증가되었다. 그러나 두 경우 모두 세포의 활성은 1900 unit/mg-cellㆍhr로 일정하였다. 균사증식 담체를 이용하여 유동층 발효조에서 반연속식으로 발효를 진행시킨 결과 페니실린의 연속생산이 가능함을 발견하였다. 그러나 발효조내에서 biofilm growth시 film두께의 조절과 페니실린 생산성을 일정수준으로 오랫동안 유지시킬 수 있는 방법이 앞으로 연구되어야 할 것으로 판단되었다.
It was discovered that ammonium phosphate in the medium played an important role in both growing mycelium and producing exopolysaccharides (EPS) from G. lucidum. In lower concentration levels of ammonium phosphate (0-3 g/l), an improved mycelial growth was observed by maintaining more filamentous morphology than in high concentrations (5-11 g/l). In addition, it was confirmed by comparing the factual dimension and frequency of the area regarding the mycelial pellets. This must be attributed to limitations of nutrient transfer by maintaining filamentous mycelium during the cultivation in a low ammonium phosphate containing medium. On the other hand, the best EPS production was observed in medium with the absence or low concentration of ammonium phosphate. The shear stress of the culture broth was greatly affected by the shear rate, as compared with that of the culture broth with high ammonium phosphate concentration. The rheological characteristics of the fermentation broth and filtrate worked well according to the Herschel-Bulkley model. It was also found that the morphological changes of the mycelium resulting from the ammonium phosphate concentration directly affected the rheological characteristics of the system and resulted in reversely affecting the EPS production levels. Based on these results, it can be concluded that delicate regulation of the ammonium phosphate concentration in the culture media should be provided in order to obtain optimal mycelial growth and/or EPS production.
Phellinus igniarius의 화학합성배지 조성 및 배양조건의 최적화 실험을 실시하였다. 또한 곡물에서 담자균사체를 배양하는 고체재료 발효방법을 개발함으로써, 기능성식품의 이용 가능성을 검토한 결과는 다음과 같다. Phellinus igniarius의 최적 영양배지로는 malt extract 7.0%, bacto soytone 0.3%, yeast extract 0.2%의 조합이었다. 그러나 대부분의 버섯 영양배지에 공통으로 첨가되는 무기염류$(KH_2PO_4,\;0.046%,\;K_2HPO_4\;0.1%,\;MgSO_4{\cdot}7H_2O\;0.05%)$의 첨가는 균사생장에 별 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 균사생장의 최적 배양온도는 $28^{\circ}C$였으며, 균사생장 최적 pH는 7.0으로 나타났다. 담자균사체의 대량배양 조건 실험을 실시한 결과, 냉침에 의해 최대수화에 도달한 곡물을 배양용기에 담고, 액체배양 후 균질화한 담자균사체를 곡물에 접종함으로써 접종초기 짧은 시간에 균사가 완전히 활착 되도록 할 수 있었다. 또한 균사 배양중기에 멸균 증류수를 첨가함으로써 균사의 활력을 유지시킬 수 있었다. Phellinus igniarius가 배양된 곡물에서 균사체량을 나타내는 glucosamine의 함량은 율무>보리>흑태>밀>메주콩>현미>수수>찹쌀의 순이었다.
느타리버섯 재배용 볏짚배지의 살균과 관련하여 균사생장에 미치는 영향을 실내에서 시험한 결과, 느타리버섯의 균사생장은 $60^{\circ}C$에서 살균한 것이 가장 우수하였고 살균온도가 높아질수록 감소되었으며, 병원균의 생장은 $121^{\circ}C$에서 가장 양호하고 온도가 낮을수록 감소되었다. 볏짚배지의 살균시간은 8, 12시간에서 느타리버섯의 균사생장이 가장 양호하였고 24시간 처리에서는 오히려 균사생장이 감소되었다. 살균시간과 침수시간에 따른 배지 pH의 변화는 침수시간이 길어지면 산도가 낮아지고 살균과 후발효후 종균접종시에는 전반적으로 균형을 이루었다. 느타리버섯 볏짚배지의 살균시간에 상관없이 균사생장정도는 $25{\sim}30^{\circ}C$에서 가장 양호하였다. 느타리버섯의 볏짚배지는 2회 살균보다는 1회 살균시 균사생장이 양호하였다. 미리 균상 내에서 전발효를 하는 경우는 오히려 정상적인 것보다는 균사생장이 불량하였다.
The optimum conditions for the submerged mycelial culture of Lentinus edodes SR-1 were elucidated to be incubation temperature of 25C, initial pH 4.0, agitation of 300 rpm, inoculation of 10.0%(v/v), and aeration of 1.0 v/v/m in TGY medium. The optimum c/n ratio and economic yield coeffcient for the submerged mycelial culture were 13.1:1 and 0.45 respectively. As the plant growth hormones test, SCM medium containing 0.5ppm of 2,4-dicholorophenoxyacetic acid increased mycelial yield in 1.1%, but 6-benzylaminopurine was not effective.
Streptomyces erythreus의 포자를 다공성의 celite를 담체로 이용하여 미세구멍조직내에 흡착 후 배양하여 얻은 균사 증식 담체를 erythromycin의 발효에 응용하였다. 이때 균사체는 담체의 내부에서부터 포자가 발아하여 담체 표면으로 성장되어 나왔기 때문에 부착성이 강하고 매우 안정한 biofilm growth를 보여 주었다. 발효시 배지중의 com steep liquor의 양을 0.8g/L 첨가하여 인산원의 농도를 40mg $KH_2PO_4/L 정도로 하였을 때 항생제 비생산 속도는 최대값 2,898$\mu$g/g.cell.hr로서 인산원이 제한되지 않은 배지에서 얻은 비생산속도 557$\mu$g/g.cell.hr보다 약 4배의 증가효과를 보였다. 유동층 반응기를 이용한 연속 발효 공정에서도 인산원의 제한에 의하며 세포의 항생제 합성 활성은 약 600시간 이상 유지 되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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