In order to improve the cryopreservatory techniques of livestock embryos, the quick freezing method which is directly plunged in liquid nitrogen via prefreezing procedure without freezing machine was carried out for mouse embryos treated with permeable and nonpermeable cryoprotectants. The viability of frozen-thawed embryos were evaluated by FDA vital dye test. The results obtained was summaried as follows: 1. A total of 720 embryos were recovered from frozen embryos for viability test. Evalution of the fluorescein diacetate(FDA) vital dye test with mice embryos were resulted of 2.3 total mean score - evaluted in orderly higher mean grade of P3 453 (63%), P2 133(18%), P1 51(7%) and P0 83(12%). 2. An all-round evalution of these combination, the highest viability was showed in 3M ethylene glycol + 0. 25M trehalose treated with the copper prefreezing. 3. Effects of permeable and nonpermeable cryoprotectants combination were evaluated by means FDA score. 3M ethylene glycol + 0.25M trehalose showed the highest survival rates of 2.8 mean FDA score. 4. Effects of permeable cryoprotectants were evaluated by mean FDA score but the results were not significantly different each other. 5. In evalution of the nonpermeable cryoprotectants, 0. 25M trehalose obtalned higher mean FDA score than of 0.25M sucrose and it was significantly different(P<0.05). 6. There was no significantly difference between copper and stainless-steel in prefreezing procedures.
This experiment was carried out to investigate the ovarian responses of the ovulation point, ovarian weight and size, the number of ovarian follicles and collected embryos, and to study the effects of the developmental stages (oocytes, 2-4 cell. 8-16 cell and morulae), additional levels of Ficoll (0, 15, 30%) on the survival rate (FDA-test) of rat embryos frozen in vitrification solution (20% glycerol + 10% ethylene glycol + 10% sucrose). Sunanarized results was as follows; 1. The mean ovulation point per head was 7, and the weight of ovaries was 0.03g. The size of ovary was 5.9 mm(L) and 4.6 mm(W), and the number of ovarian follicles over and below 2 mm was 4.7 and 8.7, respectively. The number of the collected embryos per head was 5.5 (79%). 2. 2. The FDA score of embryos frozen in 20 G 10 E 10 S without Ficoll was 2.8 (oocyte), 2.6 (2-4 cell), 3.9 (8-16 cell) and 3.6 (morula), respectively. However, there were no significant differences among treatments. 3. The FDA score of embryos frozen in 20 G 10 E 10 S with 15% Ficoll was 3.4 (oocyte), 4.0 (2-4 cell), 4.7 (8-16 cell) and 4.8 (morulae), respectively (P>0.05). 4. The FDA score of embryos frozen in 20 G 10 E 10 S with 30 % Ficoll was 3.7 (oocyte), 3.2 (2-4 cell), 4.4 (8-16 cell) and 4.4 (morulae), respectively (P>0.05). 5. As shown in the above results, the higher survival rate was obtained in the treatment of 15% Ficoll than that of 30%. And the survival rate (FDA-test)of the oocytes and 2-4 cell stages of the rat embryos was lower than that of 8~16 cell and morulae stages. It was considered that 8-16 cell and morulae could be available for the successful freezing by vitrification of rat embryos with 15% Ficoll except for oocytes.
This experiment was carried out to study the determination of survival of vitrified and thawed mammal follicular oocytes by FDA-test. Oocytes were divided into 3 groups according to attachment of cumulus cell. Group A oocytes were tightly surrounded by cumulus cell, group B oocytes were partially surrounded by cumulus cell, and group C oocytes were poorly surrounded by cumulus cell. Vitrification solution developed by our previous study (Kim et al, 1992) which consisted of permeable agent (20 % glycerol + 10 % ethylene glycol) and nonpermeable agent (30 % Ficoll + 10 % sucrose). Oocytes (7~10) loaded into 0.25 ml straw after 10 min equilibration were plunged into liquid nitrogen (- 196$^{\circ}C$) directly. The FDA-score of vitrified and thawed group A oocytes was higher in rat (4.2) than in rabbit (3.9), cow (3.8), mouse (3.4) and porcine (2.4), however that of cumulus cell was higher in rabbit (4.7) than in rat (4.1), cow (2.9), porcine (2.6) and mouse (1.4). The FDA-score of vitrified and thawed group B oocytes were 3.1 (cow), 2.9 (rabbit), 2.9 (mouse), 2.6 (rat) and 2.5 (porcine), respectively. However that of cumulus cell was higher in rabbit (3.7) than in porcine (2.6), rat (2.3), cow (1.7) and mouse (0.3). The FDA-score of vitrified and thawed group C oocytes was higher in mouse (4.1) than in cow (2.9), rabbit (2.6), rat (1.3) and porcine (1.1). As shown in the above results, The survival rates of oocytes were higher in group A than in group B and C except in mouse and cow. These results suggest that the survival of cumulus cell as well as follicular oocytes can be reliably judged by their fluorescence with FDA-test.
Effects of the glycerol addition and removal medium containg 10% sucrose on the mouse embryo survival after freezing in a liquid introgen container were determined using the FDA test. The summarized results are the following. 1. The FDA score was higher (P<0.05) when embryos were frozen in the glycerol addition medium with sucrose that the one without it(3.4 vs 3.0). 2. No difference in the score was found between the glycerol removal medium containing 10% sucrose(3.2) and PBS+10% sucrose(3.3). 3. The score was higher(P<0.01) at morular stage than blastocyst stage of embryos.
Studies were carried out to find the freezing media which gives no ice crystals in single(glycerol, ethylene glycol, dimethyl sulfoxide(DMSO)) and mixture solutions(glycerol+propylene glycol, glycerol+ethylene glycol) of permeable cryoprotectants in vitrification solution and to study effects of VS on the survival of vitrified mouse morulae. The results are summarized as follows: 1. In toxicity test of permeable cryoprotectants, 30% glycerol of single solution showed the highest FDA-score(4.1) in mouse morulae frozen compared among other single solutions. The FDA-score(4.1) of 30% glycerol was higher than 30% ethylene glycol(3.6) and DMSO(1.4( (P<0.05). 2. 20, 30 or 40% single solution of permeable cryoprotectants containing m-PBS with 10% sucrose and 20% BSA was not crystallized during cooling, but crystallized during warming. However, the 30% mixture solution of the two permeable cryoprotectants was not crystallized both during cooling and warming.3. When mouse morulae were frozen in 30% mixture solutions of two permeable cryoprotectants(glycerol and propylene glycol, glycerol and ethylene glycol), highest FDA-score(4.5) was obtained in a mixture solution of 20% glycerol and 10% ethylene glycol(20G10E) than other 30% mixture solutions(10G20E, 15G15E, 20G10P, 15G15P, 10G20P) and there was significant difference between 20G10E and 10G20E(P<0.05).
위성 자료의 성능이 크게 개선됨에 따라 최근에는 위성을 이용하여 광범위한 영역에 대한 실시간 안개 탐지 알고리즘들이 개발되고 있다. 한반도 주변을 관측하는 기상위성 중 관측주기가 10분으로 시간해상도가 가장 우수한 GEO-KOMPSAT-2A/Advanced Meteorological Imager (GK2A/AMI)는 공간해상도가 500 m이다. 반면 GEO-KOMPSAT-2B/Geostationary Ocean Color Imager-II (GK2B/GOCI-II)는 해상도가 250 m지만, 1시간 주기로 관측하고 가시채널만 보유하고 있다. 따라서 본 연구에서는 한반도 주변에서 발생하는 안개를 10분 및 250 m 해상도로 탐지하기 위해 GK2AB 융합 안개 탐지 알고리즘(Fog Detection Algorithm, FDA)인 GK2AB FDA를 개발하였다. GK2AB FDA는 세 파트로 구성된다. 첫 번째로 현업 운용중인 GK2A 안개 탐지 알고리즘(GK2A FDA)으로 10분 및 500 m 해상도로 안개를 탐지한다. 두 번째 단계에서는 두 위성 자료 간 시공간 일치, 태양천정각과 파장역 차이를 보정한 GK2A normalized visible (NVIS)의 10분 변화량을 이용하여 GK2B NVIS를 10분 간격으로 외삽한다. 마지막 단계에서는 외삽된 GK2B NVIS, 태양천정각, GK2A FDA 산출물 등을 입력자료로 기계학습(의사결정나무)을 이용하여 개발된 GK2AB FDA로 지리적위치에 따라 안개를 탐지(250 m, 10분)한다. GK2AB FDA의 훈련에는 6개 사례, 검증에는 4개 사례가 이용되었다. GK2AB FDA의 정량적 검증에는 지상관측 시정, 풍속 그리고 상대습도 자료를 이용하였다. GK2AB FDA는 GK2A FDA에 비해 공간해상도가 4배 증가함에 따라 안개 및 비안개 화소가 보다 자세히 구분되었다. 또한 검증방법에 관계없이 GK2A FDA에 비해 probability of detection (POD)은 높고 Hanssen-Kuiper Skill score (KSS)는 높거나 비슷함을 보여 안개 탐지 수준이 개선된 것으로 보인다. 하지만 일부 사례에서는 GK2AB FDA의 false alarm ratio (FAR)와 Bias가 크게 나타나 안개를 과대탐지하는 문제를 보이고 있다.
This study was carried out to test the effects of fluorescein diacetate(FDA 0${mu}ell$/ml, 0.5${mu}ell$/ml, 5${mu}ell$/ml, 10${mu}ell$/ml or 0${mu}ell$/ml, 5${mu}ell$/ml in PBS) treated before culture on the survival of vitrified mouse morulae in vitrification solution(20% glycerol+glycerol+10% ethylene glycol+30% ficoll+10% sucrose). The results were summarized as follows; 1. The survival rate of FDA-tested fresh mouse morulae after 24 hours culture was over 96%((P4.8) in the control or treatment groups with various levels of FDA. Because the rate of mouse morulae which developed to hatched blastocysts was higher with the various levels of FDA treatment(67%) than control(50%), it was considered that toxicity of FDA did not affect the survival of mouse morulae. 2. When mouse morulae were FDA-tested in FDA 0(control), 0.5, 5, and 10${mu}ell$/ml treatment after vitrification, the development rate to expanded blastocyst were 66, 82, 64 and 76%, and FDA scores were P4.2(84%), P4.7(94%), P4.2(84%) and P3.9(78%), respectively. There were no significant differences between control and FDA treatments, but there were significant difference between 0.5${mu}ell$/ml)94%) and 10${mu}ell$/ml(78%) treatment(P<0.01). 3. The survival rates of cultured mouse morulae according to FDA-scores(P0=non-fluorescence; P1~P5=according to their fluorescence) after vitrification were P5;92%, P4;67%, P3;42% and P2.P0;0%, respectively. 4. Implantation rates of morulae stage embryos cultured into early blastocysts and implanted into uterine hornes vitrification were 14 and 11% embryos treated control(0${mu}ell$/ml) and FDA 5${mu}ell$/ml and the normal fetus development was 2% embryos for both treatments. Results of this percent study indicated that toxicity of FDA does not affect not only the survival of fresh and vitrified mouse morulae but also the development rate and implantation of fetus after transfer as well. The development rates of mouse morulae with the FDA score of P5, P4 and P3 were 92, 67 and 42%, respectively, it was considered that FDA-test was fit for the judge of survival.
This study was done with mouse embryo to assess effects of freezing media containing sucrose, freezing metods(1-F, 0.3$^{\circ}C$/min;2-F, 3-5$^{\circ}C$/min;3-F, 15$^{\circ}C$min;4-F, LN2 vapour) and cell freezers on the embryo survival determined using the FDA test. The results are summarized as follows. 1. The FDA score obtained with 1, 2, 3 and 4-F was 3.8, 3.6, 3.2 and 3.2, respectively. There was a significant difference(P<0.05) between 1-F, 3-F and 2-F, 4-F. 2. The score at the morular stage(3.8) higher(P<0.005) than the blastocyst stage of embryos(3.2). 3. No difference (P>0.05) was found between the score obtained with a automatic embryo freezer(4.0) and a liquid nitrogen container(3.7).
This study was done with mouse embryos to determine effects of the freezing media with or without 10% sucrose, and seeding methods (pincette, no seeding, liquid nitrogen gas phase and copper wire coiled straw) on embryo survival were determined using the FDA test. The summarized results are the following. 1. The FDA score found with copper wire coiled straw, no seeding, pincette and liquid nitrogen gas phase was 3.6, 3.6, 3.3 and 3.0, respectively. There were no significant differences. 2. The embryo score shows higher (P<0.05) survival rate using a freezing medium with sucrose than the one without it. Among the seeding procedure, better resutls are copper wire coiled straw and no seeded. 3. The results suggest that copper wire coiled seeding no seeding be as good as seeding when the mouse embryos were frozen in a liquid nitrogen container using both the freezing and dilution media containing 10% sucrose.
This study was carried out to study effects of the addition level of acetamide and non-permeable cryoprotectants(Ficoll, sucrose) in VS(20% glycerol+10% ethyleneglycol) and equilibration time on the survival of vitrified mouse morulae. The results are summarized as follows: 1. When 10, 15 and 20% of acetamide were added to the new vitrification solution(20G 10E), FDA-scores of embryos were 4.4(control), 4.4(10%), 3.6(15, 20%), respectively. The addition of acetamide did not affect the survival of forzen-thawed morulae(P<0.05). 2. The survival rate betwen 5 min(3.5) and 10 min(4.6), 10 min(4.6) and 20 min(3.2) of equilibration in 10% sucrose, and 20 min(3.2) and 5 min(4.0), or 10 min(4.3) in 20% sucrose were significantly different(P<0.05). The highest survival(4.6) rate was obtained in mouse morulae equilibrated in VS(20G 10E) containing 10% sucrose for 10 minutes. 3. FDA-score of morulae frozen in the new vitrification solution containing 0, 10, 20 and 30% Ficoll was 4.5, 4.2, 4.4 and 4.6, respectively and had no significant effect among concentrations of Ficoll(P>0.05). The development rate after culture(24h) was 89%(20% Ficoll) and 93%(30% Ficoll), respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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