본 연구는 도축돈의 난소로부터 난자를 채취하여 체외배양시킨 후 세포 안정제와 원심분리 그리고 OPS를 이용한 유리화동결 하였다. 동결 융해한 수정란을 경산돈에 외과적 또는 비외과적으로 이식하여 자돈을 생산하는 것을 목적으로 수행하였다. ${\cdot}$ 도축돈 난소로부터 채란되어진 돼지 미성숙난은 Funahashi 등(1994) 방법에 따라 체외 성숙-수정-배양하였다. 체외배양액은 glucose-free NCSU 23을 이용하였으며, 5일째에 10% Fatal bovine serum (FBS)을 첨가 배반포로 발달을 유도하였다. ${\cdot}$ 체외배양된 수정란은 7.5${\mu}$g.mL cytochalasin B에 30분 처리 후 13,000 rpm에 13분간 원심 분리하였고, ethylene glycol(EG) 동결액으로 처리한 뒤 OPS를 이용하여 동결${\cdot}$융해하였다. ${\cdot}$ 동결수정란과 비동결수정란을 plastic straw에 loading 한 후 3두에는 경산돈에 외과적 방법으로 각각 100개, 100개의 동결수정란과 대조군으로 34개의 비동결수정란을 이식하였고 다른 3두에는 비외과적 방법으로 각각 150개, 150개의 동결수정란과 대조군으로 100개의 비동결수정란을 각각 이식하였다. 외과적이식돈의 대조군에 사용한 신선수정란은 비경산돈 3두에서 채란하였다. ${\cdot}$이식 결과 6두 모두 지연성 발정을 보였으며 이중 동결수정란 이식돈은 임상적으로 정상이였으나 비동결수정란은 이식한 경우는 자궁내막염과 복강탈장이 관찰되었다. 주요 원인은 시술시 기술의 미숙과 야외수술에 의한 감염, 난자의 이동과 수송에 의한 영향 그리고 주입 미숙 등이 주요 원인인 것으로 생각되며 융해 후 생존효율이 높은 수정란의 준비, 이식 기술의 개선과 자궁상태가 청결한 비경산돈의 이식으로 임신율을 높일 수 있을 것으로 기대된다.
Although the idea that obese people consume higher calorie diets is widely accepted, many dietary surveys have shown that obese people do NOT consume larger amounts of energy. We had an opportunity to study the relationship between calorie intake and obesity in Korea from the data contained in the '98 National Health and Nutrition Examination Survey of Korea. The survey was executed nationwide for two months - from Nov. 1 to Dec.30 in 1998. The survey included 10,876 (aged >10 years) subjects of whom 9,771 underwent health examinations. Surveyors visited each household and checked health status, measured anthropometry and blood pressures, collected blood and urine samples, and interviewed from the health questionnaires. Well-trained dietitians evaluated the food consumption of 11,525 subjects over the age of 1 year with the 24-hour recall method. The number of subjects from whom a complete health examination and food consumption information was obtained was 8,004. Subjects were classified by BMI (< 20, 20-22, 22-24, 24-26, 26-28, 28 $\leq$) and into newly diagnosed patients with DM (FBS $\geq$ 126 mg/㎗), hypertension (SBP $\geq$ 140 mmHg or DBP $\geq$ 90 mmHg) and hyperlipidemia (Total cholesterol $\geq$ 220 mg/㎗ or TG $\geq$ 200 mg/㎗). Our main results were as following:1) their average energy intake was 2,029.6 $\pm$ 908.5 ㎉ and BMI is 22.6 $\pm$ 3.4 kg/$m^2$;2) a comparison of nutrient intakes by BMI level did not show a significant difference of energy intake even though BMI increased (BMI, < 20: 1,999 ㎉ ∼ 28 $\leq$: 2,028 ㎉);and 3) Even in newly diagnosed patients with diabetes, hypertension or hyperlipidemia, their energy consumption was not significantly increased as BMI increased (from BMI 20). There are several possible explanations for these results:1) Reduced physical activity caused the weight of obese people to increase even with the same energy intake;2) people underreported their energy consumption;or, people intentionally reduced their energy consumption due to self-image regarding their obesity. We might also hypothesize that there is a metabolic problem conceiving obese people, because calorie intake was not higher in obese people than in non-obese people in Korea. Further research is necessary for re-evaluating these current conclusions.
Objective: To evaluate the effects of recombinant FSH (rFSH) and urinary FSH (uFSH) on the gene expressions of human endometrial stromal cells in vitro. Methods: Endometrial tissue was obtained from a pre-menopausal women undergoing hysterectomy. Primary endometrial stromal cells were isolated and in vitro cultured with FBS-free DMEM/F-12 containing 0, 10, 100, and 1, 000 mIU/ml of rFSH and uFSH for 48 hours, respectively. Total RNA was extracted from the cultured cells and subjected to real time RT-PCR for the quantitative analysis of progesterone receptor (PR), estrogen receptor $\alpha/\beta$ (ER-$\alpha/\beta$), cyclooxygenase 2 (Cox-2), leukemia inhibitory factor (LIF), homeobox A10-1 and -2 (HoxA10-1/-2). Results: Both hormone treatments slightly increased (< 3 folds) the expressions of PR, ER-$\beta$ and HoxA10-1/-2 gene. However, ER-$\alpha$ expression was increased up to five folds by treatments of both FSH for 48 hours. The LIF expression by the 10 mIU/ml of uFSH for 12 hours was significantly higher than that of rFSH (p<0.01). After 24 hours treatment of two kinds of hormones, the expression patterns of LIF were similar. The 100 and 1, 000 mIU/ml of rFSH induced significantly higher amount of Cox-2 expression than those of uFSH, respectively (p<0.05). Conclusion: This study represents no adversely effect of exogeneous gonadotropins, rFSH and uFSH, on the expression of implantation related genes. We suggest that rFSH is applicable for the assisted reproductive technology without any concern on the endometrial receptivity.
Hyperlipidemia is one of the major factors causing the atherosclerosis of coronary arteries and well-documented modifiable risk factors of stroke, especially of the ischemic type. For Insulin-Dependent Diabetes Mellitus sufferers, if blood sugar is appropriately maintained, lipid and lipoprotein are normal, but if blood sugar is inappropriately maintained or clinical Diabetic nephropathy induces metabolic disorder of lipid, then Total cholesterol, low density lipoprotein cholesterol, triglyceride and very low density lipoprotein cholesterol levels go up and high density lipoprotein levels go down. The purpose of this study is to evaluate the effect of treatment with Ojeok-san and to observe the changes in Fasting Blood Sugar(FBS), 2 Hours Postprandial Blood Sugar(PP2h), Haemoglobin A1c(HbA1c), Total Cholesterol(T-Chol) and Triglyceride(TG). After the treatment, Fasting Blood Sugar decreased from 149mg/dl to 89mg/dl. 2 Hours Postprandial Blood Sugar decreased from l85mg/dl to 110mg/dl. Haemoglobin A1c decreased from 6.3% to 5.7%. Total Cholesterol decreased from 268mg/dl to 217mg/dl. And Triglyceride decreased from 438mg/dl to 265mg/dl. These results support a role for oriental medical therapy in treating Diabetic Hyperlipidemia. Further case studies of herbal treatment of this ailment are needed.
Tongue examination is the most unique and important diagnostic method of oriental medicine. It reveals patients condition and give some information about direction of therapy and background of disease as well as produces clue of duration of disease changing that grasps it from outside. The aims of this study show that results of tongue examination is related to somewhat special pattern. we study 27 patients(age of means: 63.01 years old, male: 14, female: 13) who come to Wonkwang University Oriental-Medicine Hospital at Chonju with diabetes mellitus or diabetes mellitus complications. Tongue colors of this study result in pale-red 8 cases, pale 6 cases, red 6 cases, crimson 5 cases, blue-green-purple 2 cases and tongue fur of this study result in white-fur 16 cases, yellow-fur 7 cases, black-fur 1 case, none-fur 3 cases. And the condition of tongue fur with grimy and thin result in thin-white-fur 12 cases, white-grimy-fur 4 cases, thin-yellow-fur 5 cases, grimy-yellow-fur 2 cases, black-fur 1 case. Means level of fasting glucose during 7 days was $223.24{\pm}32.l7mg/dl$ and postprandial 2hours was $286.37{\pm}24.54mg/dl$ There were no changes in tongue body and tongue color but changes occur in tongue fur with 9cases in this period. 5 cases of patient make a difference between FBS(fasting blood glucose) and postprandial blood glucose level more than l00mg/dl (2 cases of patient with thin-white-fur gradually turned to slight-yellow-fur. There were no changes in 2 cases of patient with crimson-none-fur and pale-white-fur. 1 case of patient with slimy-yellow-fur turned to black fur.) 11 cases of patient had lesser than $10\%$ hemoglobin $A_lC$ and tongue color of these patient were pale-red 5cases, pale 2 cases, red 2 cases, crimson 2 cases. 16 cases of patient had more than $10\%$ Hemoglobin $A_1C$ and tongue color of these patients were pale-red 3 cases, pale 4 cases, red 4 cases, crimson 3 cases, blue 2 cases. This result shows that quantity of Hemoglobin $A_1C$ make a somewhat role in tongue color. The above results show that tongue color, fur color, condition and change of fur in diabetes mellitus patients is various in pale-red, pale, crimson, none-fur. So it is difficult to give an exact diagnosis on pathology of diabetes mellitus only with tongue examination because there are a little matches between blood glucose level, prevalence-period, short-term blood glucose regulation and tongue and fur colors.
This study was carried out to investigate the effective genetic resources preservation system using the frozen boar semen. The porcine oocytes were matured for 44 hours in NCSU-23 medium with or without 10% Porcine Follicle Fluid (PFF), 0.5 ${\mu}g/ml$ porcine FSH, 0.5 ${\mu}g/ml$ equine LH, 1.0 ${\mu}g/ml$ 17 $\beta$-estradiol ($E_2$) and 10 ng/ml Epidermal Growth Factor (EGF) under mineral oil at $38.5^{\circ}C$ in humidified atmosphere of 5% $CO_2$ in air. After 44 h of culture, the oocytes were inseminated with frozen-thawed semen and fresh semen prepared with mTBM medium for 6 h. Later, set of 50 presumptive zygotes were transferred into 4-well dish (500 ${\mu}l$) of IVC medium. for embryos freezing, slow-freezing and vitrification methods were used as a cryopreservation. Differences among treatments were analyzed using General Linear Model Procedure by SAS Package (version 6.12) differences were considered significant when p<0.05. Following IVF and IVC, the rates of cleavage and blastocysts formation were significantly higher (p<0.05) in hormone supplemented group than that of hormone-free group (25.7 vs, 12.1). The development rates to cleavage and blastocysts were significantly higher in PZM-5 group than NCSU-23 group (60.3%, 46.6% vs 27.4%, 11.1%). Further improvement was achieved when PZM-5 was supplemented with FBS. Cleavage rates was significantly higher in fresh semen source group than frozen semen (66.7% vs 43.7%). However in blastocysts rates was similar two groups. Post-thaw survival rates of embryos were 1.2% and 2.2% in slow-frezing and vitrification groups, respectively. The results of our study suggest that it is still possible to improve the culture conditions and boar semen cryopreservation for enhance reproductive technology and animal genetic resources conservation.
Scutellaria baicalensis (SB) has widely used in the treatment for various brain diseases in the field of Oriental medicine. Biofermantation of SB can make major chemical constituents of SB to pass blood-brain barrier easily and to have more potent anti-oxidant ability. There is a little information about the contribution of fermented SB (FSB) to the formation or maintenance of the neural plasticity in the hippocampus. The purpose of this study was to evaluate effects of FSB extract on hydrogen peroxide (H2O2) - induced impairments of the induction and maintenance of long-term potentiation (LTP), an electrophysiological marker for the neural plasticity in the hippocampus. From hippocampal slices of rats, the field excitatory postsynaptic potentials (fEPSPs) were evoked by the electrical stimulation to the Schaffer collaterals - commissural fibers in the CA1 areas and LTP by theta-burst stimulation by using 64 - channels in vitro multi-extracellular recording system. In order to induce oxidative stress to hippocampal slices two different concentrations (200, 400 μM) of H2O2 were given to the perfused aCSF before and after the LTP induction, respectively. The ethanol extract of FBS with concentration of 25 ㎍/ml, 50 ㎍/ml was diluted in perfused aCSF that had 200 μM H2O2, respectively. Oxidative stress by the treatment of H2O2 resulted in decrease of the induction rate of LTP in the CA1 area with a dose - dependent manner. However, the ethanol extract of FSB prevented the reduction of the induction rate of LTP caused by H2O2 - induced oxidative stress with a dose - dependent manner. These results may support a potential application of FSB to ameliorate impairments of hippocampal dependent neural plasticity or memory caused by oxidative stress.
This study was carried out to investigate the effect of activation timing, cell cycle and passage on the development of embryos produced by cumulus cell nuclear transfer in Hanwoo (Korean cattle). Nuclear donor cumulus cells were cultured in Dulbecco's modified Eagle medium supplemented with 10% fetal bovine serum at $38.5^{\circ}C$ in a humidified atmosphere of 5% $CO_2$ in air. The 1~6 passages of serum deprived or actively dividing cumulus cells were isolated and used as donor cells. The in vitro matured oocytes were enucleated and then the isolated donor cells were introduced. One pulse of 180 volts for $15{\mu}s$ was applied to induce the fusion between karyoplast and cytoplast. The activation was done before or after the fusion. To activate, oocytes were treated with $10{\mu}M$ calcium ionophore for 5 min immediately followed by 2 mM 6-dimethylaminopurine for 3 h. The nuclear transfer embryos were cultured in $500{\mu}l$ of modified CRlaa supplemented with 3 mg/ml BSA in four well dish covered with mineral oil. After 3 days culture, culture medium was changed into modified CRlaa medium containing 1.5 mg/ml BSA and 5% FBS for 4 days. The incubation environment was 5% $CO_2$, 5% $O_2$, 90% $N_2$ at $38.5^{\circ}C$. There was no blastocyst formation when the nuclear transfer embryos were activated before the fusion, whereas, 29.9% of blastocyst formation was shown when the nuclear transfer embryos were activated after the fusion. When serum deprived and actively dividing cumulus cells were used as nuclear donor cells, the developmental rates to blastocyst were 38.5% and 40.6%, respectively. There was no significant difference between serum deprived and actively dividing cells in the developmental rates. The developmental rates to blastocyst according to 1~6 passages were 37.5~44.4%. However, there were no significant differences among passages. These results indicate that 1~6 passage cumulus cell irrespective of cell cycle could support development of nuclear transfer embryos activated after the fusion.
본 연구는 체외성숙, 수정된 돼지 수정란의 체외발달에 다양한 단백질 공급원의 첨가 및 공배양이 미치는 영향을 조사하기 위해서 수행하였다 본 실험에서 얻은 결과들을 하면 다음과 같다. 1. 체외성숙, 수정된 돼지 수정란을 BSA의 농도가 각각 0.4, 0.8 및 3.2% 첨가된 NCSU 23 배양액 내에서 체외배양하였을 때, 배반포 단계까지의 발달율은 각각 22.9, 18.4 및 14.6%로서 BSA의 농도가 높을수록 체외발달율은 감소하는 경향을 나타내었다. 높은 농도의 BSA(3.2%)에서 발달한 배반포의 평균 세포수(36.1$\pm$11.8)는 0.4 및 0.8% BSA 그룹의 평균 세포수 (각자 53.2$\pm$27.4, 61.2$\pm$22.5)보다 유의적으로 적은 수를 나타내었다 (P<0.05). 이러한 결과는 높은 농도의 BSA가 돼지 체외수정란의 체외발달을 저해한다는 것을 시사하였다. 2. FBS의 농도가 10% 및 20%로 첨가된 배양액에서 배양된 돼지 체외 수정란의 체외발달율과 평균 세포수는 차이가 없었다. 3. 생쥐나 돼지 태아섬유아세포와의 공배양은 돼지 체외수정란의 체외발달에 오히려 부정적 효과를 나타내었다. 본 연구 결과는 돼지 수정란의 체외배양에 있어서 단백질 공급원인 BSA나 FBS의 첨가 농도에 따라서는 수정란의 발달 및 질적 향상을 도모할 수 없었으며, 섬유아세포와의 공배양도 돼지 체외수정란의 발달에 부정적 효과가 있다는 것을 제시하였다.
Objective: In the current work, we investigated the cytotoxic and apoptotic effects of Thymoquinone (TQ), an active compound of Nigella sativa (N. sativa) and Cis-platinum, on normal renal epithelial (GP-293) and human renal adenocarcinoma cell lines (ACHN). Methods: GP-293 and ACHN cell lines were cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) with 10% Fetal bovine serum (FBS) and 1% penicillin plus streptomycin antibiotic. The MTT assay was used for cellular viability assessment. Viability of cells was observed using inverted light microscope 24, 48 and 72 h after exposure of the cells to various concentrations of TQ (1, 2.5, 5, 10, 50 and $100{\mu}g/ml$) and Cis-platinum (0.5, 1, 1.5, 2, 3, 6 and $12.5{\mu}g/ml$). Moreover, apoptosis was analyzed with a flow-cytometry method. The untreated cells were considered as control group. Results: Morphological changes such as reduced cell number and increased intercellular distance and reduced cell viability in ACHN and GP-293cell lines were observed in both TQ and Cis- platinum groups; however, Cis-platinum had greater effect on ACHN cell line than GP-293 cell line. In addition, GP-293 cell line was more sensitive to TQ compared to ACHN cell line. Furthermore, TQ and Cis-platinum had apoptotic effects on both ACHN and GP-293 cell lines. Conclusion: Our findings demonstrated that TQ and Cis-platinum had cytotoxic and apoptotic effects on both cell lines, However, GP-293 cell line was more sensitive to TQ. Additionally, Cis-platinum was more effective on ACHN cell line than on GP-293 cell line.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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