Incubation of purified laminin1-nidogen1 complexes with $[{\gamma}-^{32}P]-ATP$ in the presence of the catalytic subunit of the protein kinase A (cAMP-dependent protein kinase) resulted in the phosphorylation of the alpha chain of laminin-1 and of the nidogen-1 molecule. Aminoacid electrophoresis indicated that phosphate was incorporated on serine residues. The phosphorylation effect of laminin-1 on the process of self assembly was studied by turbidometry. In these experiments, the phosphorylated laminin-1 showed a reduced maximal aggregation capacity in comparison to the non-phosphorylated molecule. Examination of the laminin-1 network under the electron microscope showed that the phosphorylated sample formed mainly linear extended oligomers, in contrast to controls that formed large and dense multimeric aggregates. Heparin binding on phosphorylated laminin-1 in comparison to controls was also tested using solid-phase binding assays. The results indicated an enhanced heparin binding to the phosphorylated protein. The results of this study indicate that laminin1-nidogen1 is a substrate for protein kinase A in vitro. This phosphorylation had an obvious influence on the lamininl-nidogen1 network formation and the heparin binding capacity of this molecule. However, further studies are needed to investigate whether or not this phenomenon could play a role in the formation of the structure of basement membranes in vivo.
Prostaglandin $E_2$ ($PGE_2$), a major product of cyclooxygenase, binds to four different prostaglandin $E_2$ receptors (EP1, EP2, EP3, and EP4) which are G-protein coupled transmembrane receptors (GPCRs). Although GPCRs including EP receptors have been shown to be associated with their specific G proteins, recent evidences suggest that GPCRs can regulate MAPK signaling via non-G protein coupled pathways including Src. EP2 is differentially expressed in various tissues and the expression of EP2 is induced by extracellular stimuli. We hypothesized that an increased level of EP2 expression may affect MAPK signaling. The overexpression of EP2 in HEK 293 cells resulted in significant increase in intracellular cAMP levels response to treatment with butaprost, a specific EP2 agonist, while overexpression of EP2 alone did not increase intracellular cAMP levels. However, EP2 overexpression in the absence of $PGE_2$ induced an increase in the level of p38 phosphorylation as well as the kinase activity of p38, suggesting that up-regulation of EP2 may promote p38 activation via non-G protein coupled pathway. Inhibition of Src completely blocked EP2-induced p38 phosphorylation and overexpression of Src increased the level of p38 phosphorylation, indicating that Src is upstream kinase for EP2-induced p38 phosphorylation. EP2 overexpression also increased the Src activity and EP2 protein was co-immunoprecipitated with Src. Furthermore, sequential co-immunoprecipitation studies showed that EP2, Src, and ${\beta}$-arrestin can form a complex. Our study found a novel pathway in which EP2 is associated with Src, regulating p38 pathway.
Cha, Seung Keun;Kim, Se Hyun;Ha, Kyooseob;Shin, Soon Young;Kang, Ung Gu
Korean Journal of Biological Psychiatry
/
v.20
no.4
/
pp.159-165
/
2013
Objectives Mechanisms of clinical synergistic effects, induced by co-treatments of lithium and valproate, are unclear. Extracellular signal-regulated kinase (ERK) has been suggested to play important roles in mechanisms of the action of mood stabilizers. In this study, effects of co-treatments of lithium and valproate on the ERK1/2 signal pathway and its down-stream transcription factors, ELK1 and C-FOS, were investigated in vitro. Methods PC12 cells, human pheochromocytoma cells, were treated with lithium chloride (30 mM), valproate (1 mM) or lithium chloride + valproate. The phosphorylation of ERK1/2 was analyzed with immunoblot analysis. Transcriptional activities of ELK1 and C-FOS were analyzed with reporter gene assay. Results Single treatment of lithium and valproate increased the phosphorylation of ERK and transcriptional activities of ELK1 and C-FOS, respectively. Combined treatments of lithium and valproate induced more robust increase in the phosphorylation of ERK1/2 and transcriptional activities of ELK1 and C-FOS, compared to those in response to single treatment of lithium or valproate. Conclusions Co-treatments of lithium and valproate induced synergistic increase in the phosphorylation of ERK1/2 and transcriptional activities of its down-stream transcription factors, ELK1 and C-FOS, compared to effects of single treatment. The findings might suggest potentiating effects of lithium and valproate augmentation treatment strategy.
Low density lipoproteins (LDL) play important roles in the pathogenesis of atherosclerosis. Diabetes is associated with accelerated atherosclerosis leading to cardiovascular disease in diabetic patients. Although LDL stimulates the proliferation of arterial smooth muscle cells (SMC), the mechanisms are not fully understood. We examined the effects of native LDL and glycated LDL on the extracellular signal-regulated kinase (ERK) pathway. Addition of native and glycated LDL to rat aorta SMCs (RASMCs) stimulated ERK phosphorylation. ERK phosphorylation was not affected by exposure to the $Ca^{2+}$ chelator BAPTA-AM but inhibition of protein kinase C (PKC) with GF109203X, inhibition of Src kinase with PP1 ($5{\mu}M$) and inhibition of phospholipase C (PLC) with U73122/U73343 ($5{\mu}M$) all reduced ERK phosphorylation in response to glycated LDL. In addition, pretreatment of the RASMCs with a cell-permeable mitogen-activated protein kinase kinase (MEK) inhibitor (PD98059, $5{\mu}M$) markedly decreased ERK phosphorylation in response to native and glycated LDL. These findings indicate that ERK phosphorylation in response to glycated LDL involves the activation of PKC, PLC, and MEK, but is independent of intracellular $Ca^{2+}$.
Integrin-linked kinase 1 (ILK1) regulates several protein kinases, including PKB/Akt kinase and glycogen synthase kinase ${\beta}$. ILK1 is also involved distinctively in the cell morphological and structural functions by interacting with the components of the extracellular matrix or integrin. According to the information of serum- and glucocorticoid-induced kinase 1 (SGK1) substrate specificity (R-X-R-X-X(S/T)-${\phi};{\phi}$ indicates a hydrophobic amino acid), two putative phosphorylation sites, $Thr^{181}\;and\;Ser^{246}$, were found in ILK1. We showed that ILK1 fusion protein and two fluorescein-labeled ILK1 peptides, $FITC-^{174}RTRPRNGTLN^{183}$ and $FITC-^{239}CPRLRIFSHP^{248}$, were phosphorylated by SGK1 in vitro. We also identified that 14-3-3 ${\theta}\;{\varepsilon}\;and\;{\xi}$, among several 143-3 isotypes $({\beta},\;{\gamma},\;{\varepsilon},\;{\eta},\;{\sigma},\;{\theta},\;{\tau}\;and\;{\xi})$ formed protein complex with ILK1 in COS-1 cells. Furthermore, the phosphorylation of $Ser^{246}$ by SGK1 induced the binding with 14-3-3. It was also demonstrated that 14-3-3-bound ILK1 has reduced kinase activity. Thus, these data suggest that SGK1 phosphorylates $Thr^{181}\;and\;Ser^{246}$ of ILK1 and the phosphorylation of its $Ser^{246}$ makes ILK1 bind to 14-3-3, resulting in the inhibition of ILK1 kinase activity.
We have studied the effects of excitatory amino acids on the expression of the c-fos and c-jun mRNA in rat C6 glioma cells. The glutamate, $N-methyl-_D-aspartate$ (NMDA), and kainic acid (KA) increased c-fos mRNA level in a concentration-dependent manner. However, they did not affect c-jun mRNA level. In addition, forskolin and phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) increased c-fos mRNA level. Furthermore, PMA increased c-jun mRNA level whereas forskolin downregulated c-jun mRNA level. The glutamate, NMDA and KA, at a concentration of 0.25 mM, did not affect the basal c-fos and c-jun mRNA levels, and also did not affect forskolin- and PMA-induced responses. Furthermore, both forskolin and PMA itself increased the phosphorylation of ERK (extracellular signal regulated kinase) and CREB (cyclicAMP responsible element binding protein) proteins. The KA, NMDA, and glutamate did not affect forskolin- induced increase of ERK and CREB phosphorylation. The KA decreased PMA-induced increase of phosphorylation of ERK and CREB proteins, whereas glutamate and NMDA did not affect the phosphorylation of ERK and CREB proteins induced by PMA. These findings suggest that, in C6 glioma cells, c-fos mRNA induction induced by EAAs is not mediated by phosphorylation of ERK and CREB proteins.
Park, Jeong-Ho;Kim, Min-Seob;Ham, Seokran;Park, Eon Sub;Kim, Koung Li;Suh, Wonhee
Biomolecules & Therapeutics
/
v.28
no.1
/
pp.98-103
/
2020
Marfan syndrome (MFS), a connective tissue disorder caused by mutations in the fibrillin-1 (Fbn1) gene, has vascular manifestations including aortic aneurysm, dissection, and rupture. Its vascular pathogenesis is assumed to be attributed to increased transforming growth factor β (TGFβ) signaling and blockade of excessive TGFβ signaling has been thought to prevent dissection and aneurysm formation. Here, we investigated whether galunisertib, a potent small-molecule inhibitor of TGFβ receptor I (TβRI), attenuates aneurysmal disease in a murine model of MFS (Fbn1C1039G/+) and compared the impact of galuninsertib on the MFS-related vascular pathogenesis with that of losartan, a prophylactic agent routinely used for patients with MFS. Fbn1C1039G/+ mice were administered galunisertib or losartan for 8 weeks, and their ascending aortas were assessed for histopathological changes and phosphorylation of Smad2 and extracellular signal-regulated kinase 1/2 (Erk1/2). Mice treated with galunisertib or losartan barely exhibited phosphorylated Smad2, suggesting that both drugs effectively blocked overactivated canonical TGFβ signaling in Fbn1C1039G/+ mice. However, galunisertib treatment did not attenuate disrupted medial wall architecture and only partially decreased Erk1/2 phosphorylation, whereas losartan significantly inhibited MFS-associated aortopathy and markedly decreased Erk1/2 phosphorylation in Fbn1C1039G/+ mice. These data unexpectedly revealed that galunisertib, a TβRI inhibitor, showed no benefits in aneurysmal disease in MFS mice although it completely blocked Smad2 phosphorylation. The significant losartan-induced inhibition of both aortic vascular pathogenesis and Smad2 phosphorylation implied that canonical TGFβ signaling might not prominently drive aneurysmal diseases in MFS mice.
Recently, we reported that high extracellular calcium increased receptor activator of nuclear factor-${\kappa}B$ ligand (RANKL) expression via p44/42 mitogen-activated protein kinase (p44/42 MAPK) activation in mouse osteoblasts. However, the mechanism for p44/42 MAPK activation by high extracellular calcium is unclear. In this study, we examined the role of intracellular calcium increase in high extracellular calcium-induced RANKL induction and p44/42 MAPK activation. Primary cultured mouse calvarial osteoblasts were used. RANKL expression was highly induced by 10 mM calcium treatment. Ionomycin, a calcium ionophore, also increased RANKL expression and activated p44/42 MAPK. U0126, an inhibitor of MEK1/2, an upstream activator of p44/42 MAPK, blocked the RANKL induction by both high extracellular calcium and ionomycin. High extracellular calcium increased the phosphorylation of proline-rich tyrosine kinase 2 (Pyk2), one of the known upstream regulators of p44/42 MAPK activation. Bisindolylmaleimide, an inhibitor of protein kinase C, did not block RANKL induction and p44/42 MAPK activation induced by high extracellular calcium. 2-Aminoethoxydiphenyl borate, an inhibitor of inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3) receptor, blocked the RANKL induction by high extracellular calcium. It also partially suppressed the activation of Pyk2 and p44/42 MAPK. Cyclosporin A, an inhibitor of calcineurin, also inhibited high calcium-induced RANKL expression in dose dependent manner. However, cyclosporin A did not affect the activation of Pyk2 and p44/42 MAPK by high extracellular calcium treatment. These results suggest that 1) the increase in intracellular calcium via IP3-mediated calcium release is necessary for RANKL induction by high extracellular calcium treatment, 2) Pyk2 activation, but not protein kinase C, following the increase in intracellular calcium might be involved in p44/42 MAPK activation, and 3) calcineurin-NFAT activation by the increase in intracellular calcium is involved in RANKL induction by high extracellular calcium treatment.
Endocytosis is a process by which cells absorb extracellular materials via the inward budding of vesicles formed from the plasma membrane. Receptor-mediated endocytosis is a highly selective process where receptors with specific binding sites for extracellular molecules internalize via vesicles. G protein-coupled receptors (GPCRs) are the largest single family of plasma-membrane receptors with more than 1000 family members. But the molecular mechanisms involved in the regulation of GPCRs are believed to be highly conserved. For example, receptor phosphorylation in collaboration with ${\beta}$-arrestins plays major roles in desensitization and endocytosis of most GPCRs. Nevertheless, a number of subsequent studies showed that GPCR regulation, such as that by endocytosis, occurs through various pathways with a multitude of cellular components and processes. This review focused on i) functional interactions between homologous and heterologous pathways, ii) methodologies applied for determining receptor endocytosis, iii) experimental tools to determine specific endocytic routes, iv) roles of small guanosine triphosphate-binding proteins in GPCR endocytosis, and v) role of post-translational modification of the receptors in endocytosis.
Both topoisomerase $II{\alpha}$ and $II{\beta}$ east as phosphoproteins in the cells. Recently it was reported that DNA topoisomerase $II{\alpha}$ associates with and is phosphorylated by the extracellular signal-regulated kinase 2 (ERK2). Also, ERK2 stimulates the activity of topoisomerase II by a phosphorylation-independent manner [Shapiro et al., (1999) Mol. Cell. Biol. 19, 3551-3560]. In this study, a yeast two-hybrid system was used to investigate the binding site between topoisomerase $II{\alpha}$ or $II{\beta}$ and ERK2. The two-hybrid test clearly showed that topoisomerase $II{\beta}$ residues 1099-1263, and topoisomerase $II{\alpha}$ residues 1078-1182, mediate the interaction with ERK2, and that the leucine zipper motifs of topoisomerase $II{\alpha}$ and $II{\beta}$ are not required for its physical binding to ERK2. Our results suggest that topoisomerase $II{\beta}$ residues 1099-1263, and topoisomerase $II{\alpha}$ residues 1078-1182, may be common binding sites for activator proteins.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.