Cell-Cell interaction and the extracellular matrix (ECM) are belisved to play essential roles during in vitro culturing of primary hepatocytes in the control of differentiation and in the maintenance of tissue spcific functions. The objective of this study was to examine the effects of degree of cell-cell contact (DCC) on liver sperific function of rat promary hepatocytes. Hepatocyte aggregates with various with various degrees of cell-cell contantact, I. e., dispersed cell, longish aggregate, rugged aggregate, and smooth spheroid were obtained at 1, 5-6, 15-20, and 36-48 hrs, respectively in suspension cultures grown in spinner flasks embedded in Caalginate bead and collagen gel in order. The may result from mass transfer limitation and shear damage caused by agitation during aggregation. The rugged aggregate showed a higer viability and albumin secretion rate than the dispersed cells or the other aggregates. This result indicates the possible enhancement of a bioartificial liver's (BAL) performance using primary hepatocytes and the reduction in time to prepare a BAL through optimization of the immobilization time.
Recent 2 decades, including in vitro maturation (IVM), assisted reproductive technologies (ARTs) achieved noteworthy development. However the efficiency of ARTs with in vitro matured oocytes is still lower than that with in vivo oocytes. To overcome those limitations, many researchers attempted to adapt co-culture system during IVM and consequently maturation efficiency has been increased. The beneficial effects of applying co-culture system is contemplated base on communication and interaction between various somatic cells and oocytes, achievement of paracrine factors, and spatial effects of extracellular matrix (ECM) from somatic cell surface. The understanding of co-culture system can provide some information to narrow the gap between in vitro and in vivo. Here we will review current studies about issues for understanding cu-culture system with various somatic cells to improve in vitro maturation microenvironment and provide bird view and strategies for further studies.
CD29 $({\beta}1-integrins)$ is one of major adhesion molecules involved in regulating cell adhesion, migration and morphological changes. In this study, we investigated the regulatory role of CD29 in monocytic functions using monocytic cell line U937 cells. CD29 was found to be one of highly expressed membrane proteins in U937 cells, according to flow cytometric analysis. The activation of CD29 by agonistic antibody MEM101A and extracellular matrix protein (ECM) fibronectin strongly induced cell-cell and cell-fibronectin adhesions. However, blocking antibodies to CD98 and CD147 showed different inhibitory features in these two adhesion events. Furthermore, U0126, an ERK inhibitor, only blocked cell-cell adhesion but not cell-fibronectin adhesion, indicating that cell-cell or cell-fibronectin adhesion events may be regulated by different molecular mechanisms. Meanwhile, CD29 activation also enhanced ROS generation but not phagocytic ability, and similarly radical scavenger N-acetyl-L-cysteine strongly blocked CD29-mediated cell-cell adhesion, implying that ROS may play a critical role in up-regulating cell-cell adhesion. Therefore, our data suggest that the activation of CD29 may be critically involved in regulating monocytic cell-mediated cell-cell adhesion and ROS generation.
Kim, Sung Eun;Cho, Yong Woo;Kang, Eun Jung;Kwon, Ick Chan;Lee, Eunhee Bae;Kim, Jung Hyun;Chung, Hesson;Jeong, Seo Young
Fibers and Polymers
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제2권2호
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pp.64-70
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2001
A three-dimensional, porous collagen/chitosan complex sponge was prepared to closely simulate basic extracellular matrix (ECM) constitutes, collagen and glycosaminoglycan. The complex sponge was prepared by a lyophilization method and had the regular network with highly porous structure, suitable for cell adhesion and growth. The pores were well interconnected, and their distribution was fairly homogeneous. The complex sponge was crosslinked using 1-ethyl-3-(3-dimethyl aminopropyl) carbodiimide (EDC) and N-hydroxysuccinimide (NHS) to increase its boilogical stability and enhance its mechanical properties. The crosslinking medium has a great effect on the inner structure of the sponge. The homogeneous, porous structure of the sponge was remarkably collapsed in an aqueous crosslinking medium. However, the morphology of the sponge remained almost intact in a water/ethanol mixture crosslinking milieu. Mechanical properties of the collagen/chitosan sponge were significantly enhanced by EDC-mediated crosslinking. The potential of the sponge as a scaffold for tissue engineering was investigated using a Chinese hamster ovary cell (CHO-K1) line.
Galectin-3 plays an important role in cell development, differentiation and cancer metastasis, including cell-cell/extracellular matrix (ECM) interactions and is supposed to have an effect of apoptosis on T-cells in thymic clonal selection. In this study, to know the effect of galectin-3 on thymocyte development, we used recombinant human galectin-3 (rHgal-3) from Escherichia coli, JM105, which was inserted with human gal-3 gene-transformed plasmid vector (prGal-3) to express human galectin-3. Expressed rHgal-3 was confirmed by western blot using the culture supernant of hybridoma (M3/38) producing monoclonal antibody to human galectin-3. Sepharose gel affinity chromatography was used to purify the expressed rHgal-3. Thymocytes and hepatocytes from 6-week-old male BALB/c mice were incubated with rHgal-3 and showed marked increase of apoptotic population on analysis using flow cytometry with 7-AAD in a dosedependent manner. However, rHgal-3 failed to induce apoptosis on hepatocytes. Interestingly, this apoptotic effect was not inhibited by lactose, a specific lectin domain inhibitor. From these results, we concluded that extrinsic -3 induces apoptosis on mouse thymocytes, and galectin-3 may have an apoptotic effect on T-cells in thymic clonal selection.
The improtant components of extracellular matrix(ECM) are collagen and chondroitin sulfate. The hydrophobic surface of collagen is one of the determining factors of diameter of collagen fiber and also is closely related to the aging phenomena. The controlling mechanism of the diameter of collagen fiber influenced by the interaction with chondroitin sulfate was evaluated using bis-ANS as a hydrophobic probe. Hydrophobic surface area of collagen molecule shielded by chondroitin sulfate was evaluated. Relative fluorescence intensity of collagen in thepresence of chondroitin sulfate was measured using bis-ANS as a hydrophobic probe. The fluorescence intensity decreased with the increase in chondroitin sulfate up to 3.8 chondroitin sulfate/collagen(mole/mole). Further increase in the ratio of chondroitin sulfate to collagen did not change the fluorescence intensity. Similar changes in the relative fluorescence intensity were observed for both rat tail and lathyrific rat skin collagen. The fluorescence intensity indicated by the binding between bis-ANS and hydrophobic sites of collagen was pH dependent, and the shielding effect of collagen-chondroitin sulfate interaction could not be detected at pH above 6.0. This is probably due to the charge repulsions caused by negative charged collagen molecules at higher pH.
We investigated the effect of bovine lactoferricin (Lfcin-B), a peptide derived from bovine lactoferrin, on activation of intestinal epithelial cells in IEC-6 intestinal cell, and protection against in vivo rotavirus (RV) infection. Treatment with Lfcin-B significantly enhanced the growth of IEC-6 cells and increased their capacity for attachment and spreading in culture plates. Also, Lfcin-B synergistically augmented the binding of IEC-6 cells to laminin, a component of the extracellular matrix (ECM). In the analysis of the intracellular mechanism related to Lfcin-B-induced activation of IEC-6 cells, this peptide upregulated tyrosine-dependent phosphorylation of focal adhesion kinase (FAK) and paxillin, which are intracellular proteins associated with cell adhesion, spreading, and signal transduction during cell activation. An experiment using synthetic peptides with various sequences of amino acids revealed that a sequence of 9 amino acids (FKCRRWQWR) corresponding to 17-25 of the N-terminus of Lfcin-B is responsible for the epithelial cell activation. In an in vivo experiment, treatment with Lfcin-B one day before RV infection effectively prevented RV-induced diarrhea and significantly reduced RV titers in the bowels of infected mice. These results suggest that Lfcin-B plays meaningful roles in the maintenance and repair of intestinal mucosal tissues, as well as in protecting against intestinal infection by RV. Collectively, Lfcin-B is a promising candidate with potential applications in drugs or functional foods beneficial for intestinal health and mucosal immunity.
Su-hyang Han;Je Yeong Ko;Eun Seo Kang;Jong Hoon Park;Kyung Hyun Yoo
BMB Reports
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제56권7호
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pp.374-384
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2023
Fibrosis is a pathological condition that is characterized by an abnormal buildup of extracellular matrix (ECM) components, such as collagen, in tissues. This condition affects various organs of the body, including the liver and kidney. Early diagnosis and treatment of fibrosis are crucial, as it is a progressive and irreversible process in both organs. While there are certain similarities in the fibrosis process between the liver and kidney, there are also significant differences that must be identified to determine molecular diagnostic markers and potential therapeutic targets. Long non-coding RNAs (lncRNAs), a class of RNA molecules that do not code for proteins, are increasingly recognized as playing significant roles in gene expression regulation. Emerging evidence suggests that specific lncRNAs are involved in fibrosis development and progression by modulating signaling pathways, such as the TGF-β/Smad pathway and the β-catenin pathway. Thus, identifying the precise lncRNAs involved in fibrosis could lead to novel therapeutic approaches for fibrotic diseases. In this review, we summarize lncRNAs related to fibrosis in the liver and kidney, and propose their potential as therapeutic targets based on their functions.
Objectives : Forsythiae Fructus has been reported to have anti-inflammatory effects in many diseases, and Corydalis Tuber has been used as a pain suppressor in Eastern Asia. However, the protective effects of individual water extract of Forsythiae Fructus (FF) and Corydalis Tuber (CT) and the mixture of FF and CT (FC) on chronic pancreatitis (CP) were not well-investigated. Therefore, we investigated the protective effects of FF, CT, and FC on CP in mice. Methods : To induce CP, cerulein was injected 6 times a day, 4 times a week for 3 weeks. 1 h before the every cerulein injection, 200 mg/kg of FF, CT, or FC was intraperitoneally injected to mice. Histological analysis of pancreas was examined by hematoxylin and eosin stain and collagen deposition was examined by Masson's trichrome stain. Fibrogenic parameters such as α-smooth muscle actin (α-SMA), extracellular matrix (ECM) deposition, and fibrotic cytokines such as transforming growth factor (TGF)-β1 and platelet-derived growth factor (PDGF) were also analyzed by immunofluorescence stain and real-time PCR. Results : Histological damages in pancreas were inhibited by pre-treatment of FF or FC but not CT. α-SMA and ECM in pancreas were inhibited by pre-treatment of CT or FC but not FF. Moreover, the expression of TGF-β1 and PDGF in pancreas were inhibited by FF, CT or FC. Conclusions : Our results suggest that FC have protective effect on CP in mice through inhibition of α-SMA, ECM, TGF-β1 and PDGF in pancreas, and these findings could suggest new clinical strategy for CP.
Photosensitized peroxidation of membrane lipids has been implicated in skin pathologies such as phototoxicity and premature aging. We have previously reported that syriacusin compounds isolated from Hibiscus Syriacus inhibited lipid peroxidation. Here, we investigated whether syriacusins could be effective inhibitor to skin aging using ultraviolet-irradiated human dermal fibroblast cells (HDFCs). Syriacusins A, B, and C inhibit the activity of human neutrophil elastase (HNE), a serine protease to degrade extracellular matrix (ECM) proteins including elastin, with $IC_{50}s$ of 8.0, 5.2, and $6.1\;{\mu}M$, respectively. No changes in cell viability were detected by syriacusins A and B in UV-B ($10\;mJ/cm^2$) irradiated HDFCs. Matrix metallo-proteinase (MMP)-1 expression in HDFCs was increased by UV-B irradiation. MMP-1 expression in UV-B irradiated HDFCs was decreased by $10\;{\mu}M$ and $20\;{\mu}M$ syriacusin A to 50% and 20% of untreated control, respectively. Syriacusin B treated with $20\;{\mu}M$ reduced MMP-1 expression in UV-B irradiated HDFCs to 60% of untreated control. Syriacusin A also inhibited MMP-2 expression accompanying the increase of type-I pro-collagen in UV-B irradiated HDFCs. These results demonstrate that syriacusin A could be a more effective compound to inhibit skin aging caused by UV irradiation. It suggests that syriacusins A and B might be developed as possible agents to treat or prevent skin aging.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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