Leptin is a circulating non-glycosylated protein that is mainly produced in adipocytes. Leptin acts in the brain to regulate food intake and energy expenditure. Previously we reported our success in the isolation of a partial cDNA of the long form of the leptin receptor, OB-Rb, from rat spleen, and showed that leptin might also play a role in peripheral immune organs. In the present study, for the first time, the complete coding region of OB-Rb cDNA was cloned from rat splenocytes, and its nucleotide sequence was determined. The cDNA was then further expressed in E. coli and mammalian cells, thereby confirming the functional integrity of this receptor. Prokaryotically overexpressed OB-R protein was then used as an immunizing antigen in BALE/c mice to produce leptin receptor-specific antibodies. By using them, we confirmed the cell surface expression of OB-Rb in transfected CHO cells. It is our belief that the reagents, as produced in this study, will be of great use in further studies of the biological role of rat leptin.
The nontoxic B subunit of cholera toxin (CTB) can significantly increase the ability of proteins to induce immunological tolerance after oral administration, when it was conjugated to various proteins. Recombinant CTB offers great potential for treatment of autoimmune disease. Here we firstly investigated the feasibility of silkworm baculovirus expression vector system for the cost-effective production of CTB under the control of a strong polyhedrin promoter. Higher expression was achieved via introducing the partial non-coding and coding sequences (ATAAAT and ATGCCGAAT) of polyhedrin to the 5' end of the native CTB gene, with the maximal accumulation being approximately 54.4 mg/L of hemolymph. The silkworm bioreactor produced this protein vaccine as the glycoslated pentameric form, which retained the GM1-ganglioside binding affinity and the native antigenicity of CTB. Further studies revealed that mixing with silkworm-derived CTB increases the tolerogenic potential of insulin. In the nonconjugated form, an insulin : CTB ratio of 100 : 1 was optimal for the prominent reduction in pancreatic islet inflammation. The data presented here demonstrate that the silkworm bioreactor is an ideal production and delivery system for an oral protein vaccine designed to develop immunological tolerance against autoimmune diabetes and CTB functions as an effective mucosal adjuvant for oral tolerance induction.
This study was to examine expression of the recombinant full-length adiponectin (recombinant adiponectin) in insect ovarian cell culture system and to characterize structural properties of the recombinant adiponectin secreted in medium. Gene construct encoding the recombinant adiponectin contained N-terminal collagen-like domain (110 Amino Acids, AAs), C-terminal globular domain (137 AAs) and C-terminal peptides for detection with V5 antibody (26 AAs included adaptor peptide) and purification using the 6xHis tag (6 AAs). The approximate molecular weight of the product (monomer) was 35 kDa. Molecular mass species of the expressed recombinant adiponectin were monomer (~35 kDa), dimer (~70 kDa), trimer (~105 kDa) and hexamer (~210 kDa). The major secreted species were the LMW forms, such as monomer, dimer, and trimer. There was MMW of hexamer as minor form. HMW multimers (~300 kDa) were shown as a tracer or not detected on the SDS-PAGE in several experiments (data not shown). The multimer forms in this study were not compatible to those in animal or human serum and adipose tissue by other researcher's study in which the major multimer forms were HMW. By protein denaturing experiments with reducing reagent (${\beta}$-MeOH), anionic detergent (SDS) and heat ($95^{\circ}C$) on the SDS-PAGE, not all adiponectin multimers seemed to have disulfide bond linked structure to form multimers. The recombinant adiponectin which expressed in insect ovarian cell culture system seemed to have the limitation as full physiological regulator for the application to animal and human study.
By a sequential action of ${\beta}$-ketothiolase and acetoacetyl-CoA reductase, two molecules of acetyl-CoA re converted into D-3-hydroxybutyryl-CoA, a substrate for PHB synthase to form poly-3-hydroxybutyryl-CoA, a substrate for PHB synthase to form poly-3-hydroxybutyrate (PHB) of rhodobacter sphaeroides. The ${\beta}$-ketothiolase gene, phbA, and acetoacetyl-CoA reductase gene, phbB, were cloned and analyzed for their expression. Enzyme activities of ${\beta}$-ketothiolase and acetoacetyl-CoA reductase showed constitutive levels during aerobic and photoheterotrophic growth of R. sphaeroides. In addition, no difference of each enzyme activity was observed between cells grown aerobically and photoheterotrophically. The constitutive level of the enzyme activities are regulated according to the growth phases along with growth conditions. Thus, phbAB expression is not determinative in regulating the PB content. On the other hand, phbA-deleted cell AZI accumulated only $10\%$ PHB of the wild-type, and an elevated dosage of phbAB in trans in R. sphaeroides resulted in a higher content of PHB, indicating that phbAB codes for the enzymes responsible for providing the main supply of subsyrate for PHB synthase. PHB formation by an alternative pathway that does not does not depend on the phbA-and phbB-coding enzymes is also proposed.
The historicism and romanticism of John Galliano's designs are rivaled only by the spectacular and theatrical nature of his fashion shows; romantic silhouette, the complexity of the cut and, of course, the painstaking attention to historical detail. Galliano's approach is very much that of a British designer in that he absorbs wildly diverging historical and cultural elements to invent new hybridizations of the contemporary. Galliano started his career as part of the wildly uninhibited avant-garde London design scene. His designs were twisted and artfully torn, weired and also beautiful. The purpose of this study is to investigate the Comic Expression depicted on John Galliano's works by borrowing the Comic. The Comic or the Comedy is a kind of art form that signifies exciting effects, and so, is a means of raising a laugh. The similar concepts of the Comic already were depicted by means of transformation and distortion of form, satire, fantastic pastiche and reversion of substances on Cubism, Dada, Surrealism, Pop Art and Postmodernism. Therefore, John Galliano selected the quixotic expressional methods to seek for having playful fun. The aesthetics of the Comic is the beauty based on quantitative or qualitative contradiction between expectations and realizations. That is, the Comic is characterized by getting rid of stress through laugh with clarifying a subject of contradiction. This study found that John Galliano's designs are expressed the quixotic comic on Historical image, Exotic image and Primitive image to make a complaint against the social evils.
한국미생물생명공학회 2001년도 Proceedings of 2001 International Symposium
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pp.62-72
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2001
The N-carbamoyl-D-amino acid amidohydrolase (D-carbamoylase) gene (dcb) from Agrobacterium tumefaciens AM 10 has been successfully cloned and expressed in Escherichia coli. Expression of D-carbamoylase gene under the 17 promoter in different host strains showed that the optimal expression was achieved in E. coli JM109 (DE3) with a 9-fold increase in enzyme production compared to the wild-type strain. The co-expression of the GroEL/ES protein with D-carbamoylase protein caused an in vivo solubilization of D-carbamoylase in an active form. The synergistic effect of GroEL/ES at 28$^{\circ}C$ led to 60 % solubilization of the total expressed target protein with a 6.2-fold increase in enzyme activity in comparison to that expressed without GroEL/ES and 43-fold increase in enzyme activity compared to A. tumefaciens AM 10. Attempts to express D-carbamoylase in an altered redox cytoplasmic milieu did not improve the enzyme production in an active form. The Histidyl-tagged D-carbamoylase was purified in a single step by Nickel-affinity chromatography and was found to have a specific activity of 9.5 U/mg protein.
This study aimed to analyze the expression of Hybrid in Contemporary Hair Design that is one kind of total fashion. In this research, by background of the hybrid characteristics of the messes culture art, the hybrid characteristics of the hair design has been defined as characters which is the mixture of timeless spaces, styles, sexes, unsuitable elements and cultures. The results of analysis by the expression of the hybrid hair design after 2000 is like this. As the researching, the hybrid characteristics of the hair design by the mixture of unsuitable elements and styles have been presented the highest. The result of the frequency of the apparition in the hair design molding elements according to the expression of the hybrid hair design, the hybrid characteristics of the unsuitable elements and style has been presented ideological form and the artificial form was the highest. The case of the hybrid of the activated texture, the unsuitable elements, style and timeless space has been presented excellently one after another. In the color tone, the mixture of the style, the unsuitable elements and timeless space has been presented one by one. The case of the hybrid of the image, the unsuitable elements that is the highest the frequency of the apparition was presented the image of the avant-garde, the fantastic and humor one after another.
This paper focuses on the response of architectural form to the technological characteristics in the institute facilities. For this, we study the meaning of technology in the aspect of physical, formal and social concepts and their architectural expression and sort by grouping through analyzing 27 cases of foreign current Institute facilities. Conclusions can be summarized as followings: 1) Vocabulary of technology in physical concept is presented by the environmental control through the experimental surface such as louver and glazing and the independent exposed equipment. 2) Vocabulary of technology in physical concept is presented using the machine like aesthetics by exposing the structural members and designing the exterior form using dynamical images. 3) The expression of social meaning in technology is presented by standardization, parts assembling through mass production system, the unit material for expression of today's industrial society. The expressions of technological language in the institute facilities are used not only one vocabulary but comprehensive ones.
International Journal of Internet, Broadcasting and Communication
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제15권4호
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pp.160-165
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2023
The pixel art style evolved from the shortcomings of computer image display technology has gradually transformed from a technical limitation into a widely recognized form of artistic expression since development in the early 20th century. This study analyzes the application and characteristics of the expandability of pixel art style design content in sub industries such as physical goods, environmental design, website design, digital art and illustration in the design field. It aims to explore the visual expression and sustainable development form of pixel art style under the development of new media technology that contradicts traditional technological concepts. The research results show that although the pixel art style generally pursues external visual features such as pixelated visual effects, sawtooth and matrix arrangements, its expansion in the art field shows a unique diversity of visual expressions. It has become an important means to convey nostalgic emotions and cultural values. Through this research, we hope to inspire more academic researchers and technology practitioners to explore the development potential of the pixel art style in emerging fields and promote its innovative application in design practice.
RhRnBp and Peysn5 are the proteins related to carbohydrate synthesis. RhRnBp originated form human was expressed as inclusion body in E. coli. Peysn5 originated form actinomadura was expressed as low level and inclusion body in E. coli. Ub, Trx, MalE and NusA is used as fusion partner to RhRnBp and Peysn5. The solubility of all fusion protein is NusA > MalE> Trx > Ub. Expression level of RhRnBp fusions in $37^{\circ}C$ is higher than that in $25^{\circ}C$. However in the case of Peysn5. Expression levels in $25^{\circ}C$ were higher. MalE fusion had highest activity in RhRnBp fusions. There were no activity in Peysn5.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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