In order to examine the interaction of albumin with the sperm during capacitation in mouse, proteins of cauda epididymal sperm were extracted under various conditions and analyzed with SDS-PAGE. Sperm surface labeling patterms were also examined using fluorochroin~conjugated wheat germ agglutinin (WGA) and bovine serum albumin (BSA). Albumin was detached from the sperm surface during the incubation and seemed to be constituted the major protein components of the conditioned media in which sperm incubated for 90 mm. Detachment of albumin from the sperm was not affected by the Ca2+ in the medium. WGA-FITC labeling confirmed that Triton X-100 permeabilired plasma membrane overlaying the apical segment of sperm head and detached plasma membrane associated proteins having negatively charged glycoconjugates. BSA-FITC labeling of epididymal sperm occurred on the apical segment of periacrosoinal region and postacrosomal region of the head. BSA-FITC labeling was not observed in periacrosoinal region of the sperm treated with Ca2+-ionophore ~3187 (10 MM)~ whereas the postacrosome region of acrosome-reacted sperm was still labeled after the AR. These results suggest that albumin bound to the surface of epididymal sperm is detached during the capacitation process, and it might be involved In physiological change of sperm plasma membrane accompanying the capacitation.
Londonkar, Ramesh L.;Sharangouda, Sharangouda;Patil, Saraswati B.
Advances in Traditional Medicine
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제8권1호
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pp.67-72
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2008
Adult male albino rats were treated with 0.5 mg and 0.75 mg morphine/100 g body weight intraperitoneally for 30 days. All the animals were autopsied on $31^{st}$ day. Epididymis and vas deferens were dissected out, weighed and processed for histological and biochemical studies. Morphine has caused a reduction in the weight of epididymis and vas deferens in both the doses of drug treated groups. The total cholesterol content is increased while protein, DNA and RNA contents and epididymal sperm counts are decreased. The acid phosphatase content is decreased 10.12 $\pm$ 0.11 in caput, 9.26 $\pm$ 0.30 in cauda of epididymis and in vas deferens 8.14 $\pm$ 0.15 in 0.5 mg treated groups and in 0.75 mg treated rats shows 9.52 $\pm$ 0.27 in caput, 9.14 $\pm$ 0.18 in cauda of epididymis and in vas deferens 7.84 $\pm$ 0.11is decreased, whereas alkaline phosphatase is increased. The surface epithelial cell height of these ducts is reduced and secretory activity is inhibited with the disruption of epithelial cell projections. The gravimetric and histometric changes of epididymis and vas deferens may be due to non-availability of androgens in morphine treated rats.
한국산 관박쥐(Rhinolophusfemmequinum koran의 웅성생식 pattern을 알아보기 위하여, 1년 주기를 통한 정소상체 이부로의 정자유입, 정자저장 및 정자소멸에 따른 상피세포와의 상관관계를 조사하여, 다음과 같은 결론을 얻었다. 정소로부터 정자유입과 정자저장 및 정자소멸에 관련하여 볼때, 정소상체 미부는 2단계의 정화기간(cleaning time)을 가진다. 첫째로, 동면 각성시기인 4월부터 6월까지는 오래된 저장정자를 파괴시켜 새로운 정자를 받아들이기 위한 준비단계로서 둘째로, 정차과정은 7월에서 8월까지 계속되는[tl 이는 7월부터 새로운 정자와 함께 유임된 기형 정자세포,기형 정자 및 기타 잔여 노페물질을 제거하여 성숙된 정자만을 보유함으로서 곧 교미기를 맞이하기 위한 준비단계로서 정화기간을 가진다. 따라서, 1년 주기를 통한 정소상체 이부의 정화기간은 동면 각성기인 4월부터 8월까지 약 5개월에 걸쳐 이루어진다. 한편, 교미가 끝난 11월부터 동면기를 거쳐 동연 각성기 전까지의 긴 기간동안에 정소상체 미부내의 저장된 정자는 급격한 변화를 가져오지 않았다. 이는 동면동안의 낮은 물질대사율과 관련이 있다고 생각된다. 이상의 결과로 미루어 보아 정자유입, 정자저장 및 정자소멸에 따른 정소상체 미부의 조직변화는 정소상체 미부내 상피세포의 분비 및 흡수의 조절작용에 의해 변학되는것이라 여겨진다.
Kang, Sung-Sik;Kim, Ui-Hyung;Ahn, Jun Sang;Won, Jeong Il;Cho, Sang-Rae
Journal of Animal Reproduction and Biotechnology
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제36권2호
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pp.82-90
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2021
In the present study, we examined if deep uterine artificial insemination (DUAI) can improve the pregnancy rate of artificial insemination (AI) using epididymal spermatozoa (ES) in Hanwoo cattle. The estrus cycles of 88 Hanwoo cows were synchronized, and 17 cows were artificially inseminated using the DUAI method with ES, 20 cows were artificially inseminated via the uterine body (BUAI) method with ES, and as a control, 51 cows were inseminated by using the BUAI method with ejaculated spermatozoa from 1 proven bull after frozen thawing. The pregnancy rate of the DUAI method (58.8%) was higher than that of the BUAI method (25.0%, p = 0.0498). The motility of ES was examined immediately after thawing and after 3 and 6 h of incubation. The rapid progressive sperm motility of the control group was significantly higher than that of the ES group immediately after thawing and after 3 and 6 h of incubation (p < 0.05). The straight line velocity and average path velocity of the ES group after 6 h of incubation were significantly lower than those in the control group (p < 0.05). The linearity and amplitude of lateral head of ES were lower than those at 6 h (p < 0.05). The flagellar beat cross frequency and hyperactivation of ES were lower than the control spermatozoa immediately after thawing and at 3 h (p < 0.05). These motility parameters suggested that ES had a low motility and fertilization ability compared to the control spermatozoa. After frozen-thawing and 3 h of incubation, the percentage of live spermatozoa with intact acrosomes in the ES was significantly lower than that in ejaculated spermatozoa (p < 0.05). Our findings suggested that the DUAI method can overcome the low pregnancy rate of ES, despite the low motility, viability, and fertilization ability of ES.
Objective: We examined the localization and expression of H+ pumping vacuolar ATPase (V-ATPase) and cytokeratin 5 (KRT5) in the epididymis of pigs, expressed in clear and basal cells, respectively, during postnatal development. Methods: Epididymides were obtained from pigs at 1, 7, 21, 60, 120, and 180 days of age; we observed the localization and expression patterns of V-ATPase and KRT5 in the different regions of these organs, namely, the caput, corpus, and cauda. The differentiation of epididymal epithelial cells was determined by immunofluorescence labeling using cell-type-specific markers and observed using confocal microscopy. Results: At postnatal day 5 (PND5), the localization of clear cells commenced migration from the cauda toward the caput. Although at PND120, goblet-shaped clear cells were detected along the entire length of the epididymis, those labeled for V-ATPase had disappeared from the corpus to cauda and were maintained only in the caput epididymis in adult pigs. In contrast, whereas basal cells labeled for KRT5 were only present in the vas deferens at birth, they were detected in all regions of the epididymis at PND60. These cells were localized at the base of the epithelium; however, no basal cells characterized by luminally extending cell projections were observed in any of the adult epididymides examined. Conclusion: The differentiation of clear and basal cells progressively initiates in a retrograde manner from the cauda to the caput epididymis. The cell-type-specific distribution and localization of the epithelial cells play important roles in establishing a unique luminal environment for sperm maturation and storage in the pig epididymis.
It has been investigated what could be the selective marker distinguishing the immature from mature spermatozoa and whether fi -glucuronidase and fi -glucosidase are dependent on androgen in the luminal fluid of the epididymis or not. The contents of hexose, hexosamine and sialic acid in the epithelial cells, luminal fluid and spermatozoa of the epididymis were examined and the patterns of protein bands were compared in each group of the luminal fluid by SDS-PAGE. Lactate dehydrogenase, glucose-6-phosphatase, Na+ -K+ -ATPase and MgNa-ATPase showed higher activities in the cauda than the caput epididymal spermatozoa but only $Mg^2$+-ATPase activity appeared to be changed significantly. When the contents of hexose, hexosamine and sialic acid were analyzed and compared quantitatively, those of hexose were significantly different in the luminal fluid of caput and cauda epididymis, those of hexosamine in the epithelial cells and those of sialic acid in the epithelial cells and luminal fluid. When SDS-PAGE has been performed in each group, the band of MW 33-37 KD which was absent in the luminal fluid of caput epididymis appeared obviously in the luminal fluid of cauda epididymis and ako apeared in the cauda sperm crude membrane fraction. In addition, $\beta$ -glucuronidase and $\beta$ -glucosidase activities and their dependence on androgen were measured and the SDS-PAGE patiems of proteins and/or glycoproteins in the luminal fluid were examined. The activities of these two enzymes in the luminal fluid of the epididymis decreased significantly from the 5th day after castration. When testosterone was injected, the activity of $\beta$ -glucuronidase began to increase significantly from the 5th day following injection and that of $\beta$ -glucosidase from the loth day. On the other hand, the band of about MW 21 KD was newly observed in the lumen of caput epididymis when testosterone was administered.
Monocrotophos was administered orally to adult male albino mice at dose level of 3.0 mg/kg body weight/day/mice for 50 days. The treatment has found to affect spermatogenesis as well as the endocrine functions of the testis as indicated by gravimetric, histopathological and biochemical changes. The treatment has caused degenerative changes in the seminiferous tubules and Leydig cells of the testis and regression of the epididymis, seminal vesicle, vas deferens, prostate, Cowper's gland and levator ani. Similarly, cauda epididymal sperm count and sperm motility have shown significant reduction. There was a significant reduction in the protein, glycogen, sialic acid, acid and alkaline phosphatase and increase in cholesterol in the testis of monocrotophos treated mice compared with the control. The causative factors for these changes due to monocrotophos administration were discussed.
Tight junctions are constituents of the blood-epididymis barrier that play roles in regulating the unidirectional transcellular transport of ions, water, and solutes to maintain optimal conditions for sperm maturation and storage. Claudin 1 (Cldn1) and 4 (Cldn4) are known as tight junction proteins and are expressed in the basolateral membranes as well as tight junctions in the epididymis of rodents. Here, we examined the expression and localization of Cldn1 and 4 to determine the function of these proteins in the pig epididymis. Cldn1 was highly expressed in the basolateral membrane of epithelial cells in the caput and corpus regions of the epididymis. In the cauda region, however, Cldn1 labeling was significantly decreased in the basolateral membrane of epithelial cells. In contrast, labeling indicated that Cldn4 was expressed in the basolateral membrane in the cauda region of the epididymis and was present at punctate reactive sites in the caput and corpus regions. However, in no region of the epididymis did we detect colocalization of Cldn1 and 4 with labeled ZO-1, the distribution of which is restricted to the tight junctions. Our results indicate that Cldn1 and 4 were region-specifically expressed in the pig epididymis but not present in the tight junctions of epididymal epithelium. In addition, reciprocal regulation in specific regions of the epididymis between Cldn1 and 4 may play an important role in generating an optimal luminal environment for sperm maturation and storage in the pig epididymis.
Park, Kwang-Hyun;Mok, Ji-Ye;Kim, Sung-Zoo;Kang, Hyung-Sub;Shim, Jae-Suk;Jang, Seon-Il
Journal of Physiology & Pathology in Korean Medicine
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제25권3호
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pp.482-488
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2011
Cadmium (Cd) is well known as a spermatotoxic and gonadotoxic heavy metal ion. This study was performed to assess the possible protective effect of Enerbalance on Cd-induced spermiotoxicity and testicular damage. The control group received isotonic saline; Cd group received Cd (2 mg/kg BW per day) orally; extract-treated groups were orally administrated with Enerbalance (50 mg and 100 mg/kg BW per day) and Cd for 10 days. Morphological changes of testicular tissue, sperm characteristics, oxidative/antioxidative parameters from testis, and serum sexual hormone level were determined. Enerbalance was significantely increased sperm amount in cauda epididymis without changes of ratio of epididymis/body weight and testis/body weight. Cd caused a marked decrease in epididymal sperm concentration and chemotactic sperm motility, testicular superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), Enerbalance was significantly ameliorated loss of epididymal sperm concentration, sperm chemotactic motility, antioxidative parameters, and male hormone whereas decreased abnormal architecture by testis damage. Enerbalance was successfully attenuated these adverse effects of Cd and offers a dose-dependent protection. Our study demonstrated that Enerbalance could proffer a measure of protection against Cd-induced testicular damage and spermiotoxicity by possibly reducing oxidative stress and increasing the antioxidant defense mechanism in mice.
The ethanol extract of the Crotalaria juncea seeds, which showed promising antispermatogenic and antiandrogenic activities in albino mice, was taken up further for the isolation of the active fractions present in it. Two fractions that were obtained from thin layer chromatography were subjected for testing to know their antispermatogenic and antiandrogenic activities. After preliminary trials the fraction I showed maximum antifertility activity at the dose level of 200 mg/kg body weight when administered orally to the rats for 50 days. The fraction I was found to affect spermatogenesis as well as the endocrine functions of the testis as indicated by gravimetric, histopathological and biochemical changes. Further this fraction has caused degenerative changes in the seminiferous tubules and Leydig cells of the testis. The accessory reproductive organs like epididymis, seminal vesicles, vas deferens, prostrate, Cowper's gland and Levator Ani muscle showed significant malfunction. Cauda epididymal sperm count and sperm motility were reduced significantly. The treatment has also resulted in increase in the cholesterol level and alkaline phosphatase activity, and decrease in protein, glycogen, sialic acid contents and acid phosphatase activity in testis. It is noteworthy that RIA studies have shown significant reduction in serum FSH, LH and testosterone. Scanning electron microscopic observations revealed abnormalities in sperm structure.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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