유기산 생산균인 L. casei Y, Str. faecium C, Str. faecalis, Cl. butyricum M, B. toyoi를 사료첨가제와 발효유로부터 분리 확인하여 이들 균주가 자돈의 대장균증 설사를 유발시키는 E. coli $A_2$, E. coli G$_7$에 대하여 in vitro에서는 어떤 항균효과를 나타내는지 조사한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. L. casei Y, Str. faecium C, Str. faecalis, B. toyoi Cl. butyricum M을 각각 배양한 BL broth 3일 배양액은 모두 E. coli $A_2$와 E. coli G$_7$에 대하여 항균효과를 나타내었고, 이들 배양액을 E. coli $A_2$와 E. coli G$_7$에 대한 발육 Disc 확산시험 결과 그 저지환 직경은 각각 15mm와 17mm, 14mm와 15mm, 13mm와 14mm, 11mm와 13 mm, 10mm와 12mm 였다. 2. 유기산 생산 능력이 우수한 균일수록 E. coli $A_2$와 E. coli G$_7$에 대한 항균력이 높게 관찰되었으며, L. casei Y와 Str. faecium C가 이들 두 대장균에 대하여 높은 항균력을 나타내었다. 3. 유기산 생성균과 대장균(E. coli $A_2$, E. coli G$_7$)을 BL broth 에 혼합 배양할 때 E. coli $A_2$와 E. coli G$_7$은 배양액의 pH가 5.0 이하일 때 생육억제 되었고, pH 4.5 이하였을 때 사멸되었다. 4. 생성된 유기산은 배양액의 pH를 저하시킴과 동시에 항균성 물질로 직접 작용하여 E. coli $A_2$와 E. coli G$_7$의 생육저해 또는 사멸을 유도하였다. 5. E. coli $A_2$가 E. coli G$_7$보다 유기산 생산균의 대사산물에 대하여 더 높은 내성을 갖고 있었다.
Kim, Eun-Young;Shin, Min-Sang;Rhee, Joon-Haeng;Hyon E. Choy
Journal of Microbiology
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제42권2호
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pp.103-110
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2004
In order to understand the molecular basis of selective expression of stationary-phase genes by RNA polymerase containing$\sigma$$\^$38/ (E$\sigma$$\^$38/) in Escherichia coli, we examined transcription from the stationary-phase promoters, katEP, bo1AP, hdeABP, csgBAP, and mcbP, in vivo and in vitro. Although these pro-moters are preferentially recognized in vivo by E$\sigma$$\^$38/, they are transcribed in vitro by both E$\sigma$$\^$38/ and E$\sigma$$\^$70/ containing the major exponential $\sigma$, $\sigma$$\^$70/. In the presence of high concentrations of glutamate salts, how-ever, oldy E$\sigma$$\^$38/ was able to efficiently transcribe from these promoters, which supports the concept that the promoter selectivity of $\sigma$$\^$38/-containing RNA polymerase is observed only under specific reaction con-ditions. The examination of 6S RNA, which is encoded by the ssr1 gene in vivo, showed that it reduced E$\sigma$$\^$70/ activity during the stationary phase, but this reduction of activity did not result in the elevation of E$\sigma$$\^$38/ activity. Thus, the preferential expression of stationary-phase genes by E$\sigma$$\^$38/ is unlikely the con-sequence of selective inhibition of E$\sigma$$\^$70/ by 6S RNA.
In eukaryotic cells, various proteins are anchored to the plasma membrane through glycosylphosphatidylinositol (GPI). To study the biosynthetic pathways and modifications of GPI, various mutant cells have been isolated from the cells of Chinese hamster ovaries (CHO) supplemented with several exogenous genes involved in GPI biosynthesis using aerolysin, a toxin secreted from gram-negative bacterium Aeromonas hydrophila. Alpha toxin from Gram-positive bacterium Clostridium septicum is homologous to large lobes (LL) of aerolysin, binds GPI-anchored proteins and possesses a cell-destroying mechanism similar to aerolysin. Here, to determine whether alpha toxins can be used as an isolation tool of GPI-mutants, like aerolysin, CHO cells stably transfected with several exogenous genes involved in GPI biosynthesis were chemically mutagenized and cultured in a medium containing alpha toxins. We isolated six mutants highly resistant to alpha toxins and deficient in GPI biosynthesis. By genetic complementation, we determined that one mutant cell was defective of the second subunit of dolichol phosphate mannose synthase (DPM2) and other five cells were of a putative catalytic subunit of inositol acyltransferase (PIG-W). Therefore, C. septicum alpha toxins are a useful screening probe for the isolation of various GPI-mutant cells.
The specimens were collected from 89 diarrheal patients who had visited Pusan National University Hospital from June to September 1985. They were cultured and tested for the bacteriological identification of causative agents. In this study we identified 5 strains of Salmonella species, 5 strains of Shigella species, 2 strains of Y. enterocolitica, and 17 strains of enteric pathogenic E. coli. Enteric pathogenic E. coli were classified into enterotoxigenic E. coli, enteropathogenic E. coli, and enteroinvasive E. coli by serological type. We tried to isolate V. cholerae and V. parahaemolyticus too but we cannot find them out.
Using microarray analysis, we determined those Salmonella genes induced at the entry of stationary phase, and subsequently discovered that uncharacterized yliH was induced most dramatically. We set out to establish the molecular mechanism underlying the stationary phase induction of yliH under the standard culture condition, LB with vigorous aeration, by analyzing its promoter activity in various mutant backgrounds, lacking stationary phase ${\sigma}$, $RpoS^-$, or stringent signal molecules ppGpp, ${\Delta}relA$${\Delta}spoT$. It was found that the stationary phase induction of yliHp was partially dependent on rpoS but entirely dependent on ppGpp. DNA sequence analysis revealed that the Salmonella yliH gene is composed of 381 base-pair nucleotides, with overall amino acid sequence revealing 76.38% amino acid identity and 88.98% similarity with Escherichia coli yliH, although no motif from data base was noted for its possible role. Recently however, it has been reported that yliH in E. coli was implicated in biofilm formation and motility by repressing these activities (Domka et al., 2006). We have constructed a mutant Salmonella deleting yliH gene by allele replacement and examined its phenotype, and found that the yliH in Salmonella more or less affects motility and adherence by enhancing these activities. The effect on biofilm formation in Salmonella was uncertain. Moreover, addition of cloned yliH of E. coli into Salmonella did not reduce motility or adherence. Taken together, it appears that the pathways implicating yliH for biofilm formation and motility in E. coli and in Salmonella are somewhat different.
Sialic acid is a sugar typically found at the N-glycan termini of glycoproteins in mammalian cells. Lec3 CHO cell mutants are deficient in epimerase activity, due to a defect in the gene that encodes a bifunctional UDP-GlcNAc 2-epimerase/ManNAc kinase (GNE). Sialic acid modification on the cell surface is partially affected in these cells. We have mutagenized Lec3 CHO cells and isolated six mutants (termed C2m) deficient in the cell surface expression of polysialic acid (PSA). Mutant C2m9 was partially defective in expression of cell-surface PSA and wheat germ agglutinin (WGA) binding, while in the other five mutants, both cell-surface PSA and WGA binding were undetectable. PSA expression was restored by complementation with the gene encoding the CMP-sialic acid transporter (CST), indicating that CST mutations were responsible for the phenotypes of the C2m cells. We characterized the CST mutations in these cells by Northern blotting and RT-PCR. C2m9 and C2m45 carried missense mutations resulting in glycine to glutamate substitutions at amino acids 217 (G217E) and 256 (G256E), respectively. C2m13, C2m39 and C2m31 had nonsense mutations that resulted in decreased CST mRNA stability, and C2m34 carried a putative splice site mutation. PSA and CD15s expression in CST-deficient Lec2 cells were partially rescued by G217E CST, but not by G256E CST, although both proteins were expressed at similar levels, and localized to the Golgi. These results indicate that the novel missense mutations isolated in this study affect CST activity.
Bacteriologic diagnosis of enteric infection remains to be an important role of clinical laboratory because of the prevalence of the infection. Often the determination of etiologic agent and its susceptibility to antibiotics are of vital importance for a proper management of the infection. In our previous paper, an analysis of the isolation of enteric pathogens for the years 1969-73 was reported to clarify the status of those years. The present analysis was made based on the data obtained during the years 1974-78, to see if any change of the status was rendered. 1. During the 5-year period, from the cultures of 7,308 stool or rectal specimens 833 patients yielded enteric pathogens: 468 Shigella, 295 Salmonella, 30 Vibrio parahaemolyticus and 40 enteropathogenic Escherichia coli(EPEC). 2. Of the 295 Salmonella, 271 were S. typhi Isolation of 12 S.paratyphi-A, 1 Salmonella group B, 4 group C, 5 group D and 2 group E meant a definite increase of these sero-groups, S. typhi was most frequently isolated in August and in December, and from 30- to 39-year-old patients. 3. Of the 468 Shigella, 10 were subgroup A, 338 subgroup B, 3 subgroup C and 117 subgroup D. Most of the subgroup B belonged to type 1,2, or 3. The proportion of S. sonnei decreased from 31.3% in 1974 to 18.2% in 1978. In foreign patients, S. sonnei remained to be the frequntly isolated species. Shigella isolation was frequent in August and in 2- to 5-year-old patients. 4. V. parahaemolyticus was isolated from 30 and EPEC from 40 patients. 5. Ninty-nine per cent and 99.5% of the S. typhi isolates were susceptible to chloramphenicol and to ampicillin respectively. 92.8% of S sonnei were susceptible to ampicillin. S. flexneri type 2 was notable for their markedely decreased proportion being susceptible to ampicillin: 84.4% in 1974 and 25.6% in 1978.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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