Shake flask를 사용하여 M. piperita 세포의 현탁 배양에서의 fungal elicitor, pluronic F-B8, methylcellulose의 영향에 대하여 연구하였다. 그 결과 Rhodotorula rubra라는 균주에서 추출한 fungalelicitor를 처리하여 약 2배 정도 박하정유 생산의 증가를 관찰하였고 100 rpm의 교반속도에서 낮은 농도의 Pluronic F-68, methylcellulose 첨가에 의해 박하세포의 성장이 증진되었다.
[$^3$H] 5-epi-aristolochene (5-EAS)를 담배 현탁배양세포에 투여하여 elicitor에 의해 유도된 세포가 생합성하여 배지로 방출하는 [$^3$H]-capsidiol의 량을 측정함으로써 5-EAS hydroxylase의 활성을 검정하였고, 이 반응의 전 단계에 관여하는 효소인 sesquiterpene cyclase의 발현특성과 비교하였다. 5-EAS hydroxylase는 정상세포에는 전혀 활성을 보이지 않으나 elicitor로써 cellulase를 처리한 세포는 9시간 후부터 유도를 시작하여 18시간 후에 최대 활성을 보였는데 동일한 세포내에서 유도되는 cyclase와 유사한 패턴을 보였다. Cyt P450계 효소의 특이적 억제제로 알려진 ancymidol과 ketoconazole에 의해 5-EAS hydroxylase의 활성은 강한 억제를 보인 반면 cyclase의 활성은 억제를 보이지 않아 5-EAS hydroxylase가 P450계 효소임이 시사되었다.
미치광이풀의 모상근 뱌양에 의해 의학적으로 중요한 물질인 scopolamine과 hyoscyamine 생산을 증진시키기 위해 3종의 곰팡이와 1종의 효모 유래의 생물학적 elicitor를 supernatant와 homogenate의 형태로 처리하였다. Elicitor 중 Candida albicans는 supernatant와 homogenate 모두 scopolamine 생산성을 증가시켰다. Fusarium solani의 homogenate와 C. albicans의 supernatant 처리로 hyoscyamine 함량이 증가되었다. 그러나 나머지 fungus strain도 대조구에 비해 tropane alkaloids의 생산을 다소 증가시켰다. 본 연구에서는 C. albicans가 tropane alkaloids 생산에 적합한 elicitor임으로 구명되었다. 본 연구 결과는 미치광이풀 모상근 대량배양에 의한 tropane alklaoids 대량생산에 기여할 것이다.
Isoflavonoid production in cell cultures of Pueraria tuberosa as influenced by an angiospermic parasite, Cuscuta reflexa, was studied. During the time course, maximum isoflavonoid content was recorded when Cuscuta elicitor was added on day 15 of culture. Among various concentrations of elicitor tried, $1g\;l^{-1}$ of Cuscuta elicitor was found to be the most effective. The optimized elicitation conditions were used in vessels of varying capacity where maximum yield of ${\sim}91mg\;l^{-1}$ of isoflavonoid was recorded in a 2-l bioreactor which was about 19% higher than the control cultures. In this case, puerarin content increased up to $11mg\;l^{-1}$ which was 580% higher that the value recorded in the control cultures. In the bioreactor, 8 days of elicitation was optimal for the high accumulation of isoflavonoid, giving productivity of ${\sim}4mg\;l^{-1}\;day^{-1}$. The study showed persistent high isoflavonoid yield even during scale-up. Use of a preparation of Cuscuta reflexa as an elicitor is reported for the first time. The increase in isoflavonoid content was elicitor dose-dependent and can be explored to trigger high yields of isoflavonoid/secondary metabolites in production.
Taxus wallichiana Zucc. 현탁세포배양에서 항암제 paclitaxel 생합성 연구를 수행하였다. 현탁세포배양에서 exponential phase의 최고 생장 속도는 0.14 $day^{-1}$이었으며 배가시간이 4.96 day이었다. Paclitaxel은 배양초기에 생성되지 않고 exponential phase 말기부터 서서히 생성되어 stationary phase에서도 이어지며 declined phase에서 최고치를 나타내었다. Paclitaxel의 생산을 촉진하기 위하여 elicitor를 사용하였다. 여러 elicitor 중 jasmonic acid와 cellulase가 paclitaxel의 생성을 증가시켰다. Elicitor는 접종과 동시에 투여했을 때 가장 효과가 좋았으며, jasmonic acid와 cellulase의 combination으로 효과가 더욱 증진했는데 각각 투여할 때보다 1.8배 및 3.1배 paclitaxel 생성이 증가되었다.
In order to understand the molecular interactions that occur between rice and the rice blast fungus during infection, we previously identified a number of rice blast fungal elicitor-responsive genes from rice (Oryza sativa cv. Milyang 117). Here, we report the cloning and characterization of the rice fungal elicitor-inducible gene Oshin1 (GenBank Accession Number AF039532). Sequence analysis revealed that the Oshin1 cDNA is 1067 bp long and contains an open reading frame encoding 205 amino acid residues. The Oshin1 gene shows considerable sequence similarity to the tobacco hin1 and hin2 genes. The predicted Oshin1 protein has a cysteine-rich domain at the N-terminus and is rich in leucine, serine, and alanine residues. Southern blot analysis suggests that Oshin1 gene is a member of a small gene family in the rice genome. To examine the expression of Oshin1, Northern blot analysis was conducted. Expression of the Oshin1 transcript is rapidly induced in suspension-cultured rice cells treated with fungal elicitor, salicylic acid or hydrogen peroxide. In addition, Oshin1 transcript levels are rapidly increased by treatment with $Ca^{2+}$/A23187. The expression of Oshin1 was also elevated in 3-week old leaf tissues upon ethephon application or fungal elicitor treatment. Our results suggest that the Oshin1 gene is involved in plant defense responses to environmental stresses.
Tae-Won Jang;So-Yeon Han;Da-Yoon Lee;Seo-Yoon Park;Woo-Jin Oh;Jae-Ho Park
한국자원식물학회:학술대회논문집
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한국자원식물학회 2023년도 임시총회 및 춘계학술대회
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pp.53-53
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2023
Abeliophyllum distichum, one of the Korean endemic plant, is a significant pharmaceutical plant resource. A. distichum with phenylethanoid glycoside can use to regulate the development of cancer, DNA damage with radicals, and the generation of inflammatory mediators. In this study, we investigated whether the biomass, content of phenylethanoid glycoside, and growth rate of callus derived from A. distichum (cultivar Okhwang1, CAD) change in the absence or presence of plant hormones (2,4-Dichlorophenoxyacetic acid; 2, 4-D and 1-Naphthaleneacetic acid; NAA). The results showed that the best biomass, the growth rate of callus, and the contents of phenylethanoid glycoside were cultivated on Murashige and Skoog (MS) growth medium fortified with 1 ppm 2,4-D + 2 ppm NAA after 4 weeks. In a further study, CAD was cultivated on MS growth medium fortified with an elicitor (Methyl Jasmonate, MeJA). The results showed that CAD turned to brown color and fragile form with the elicitor. HPLC-PDA analysis revealed that the contents of phenylethanoid glycoside in the elicitor-treated group were higher than in the elicitor-non-treated group. These results are consistent with the findings of Arano-Varela H et al.,'s study which is that acteoside production can increase after the treatment of MeJA. Therefore, this study can be used to develop an effective and sustainable production of useful substances as an alternative to plant cultivation.
본 연구에서는 캘리포니아 양귀비(Eschscholtzia californica) 현탁배양세포의 주요 이차대사산물인 benzophenanthridine alkaloid의 생성을 증가시키기 위해 생합성 전구체인 tyrosine, tyramine, dopamine 그리고 L-dopa를 exponential phase 말기에 투여하였다. 그리고 이때 yeast elicitor와 전구체를 동시에 투여한 것과 비교하여 보았다. 그 결과 적당량의 전구체 투여시 benzophenanthridine alkaloid의 생성은 대조구(무처리)에 비해 증가하였다. 그리고 elicitor와 전구체를 동시에 투여해 주었을 때 대조구(elicitor만 처리)에 비해 상당히 증가하였는데, 이것은 elicitor에 의해 유도된 이차대사 관련 효소에 의해 전구체의 biotransformation이 촉진된 것이라 생각된다. 이와 같이 전구체 투여에 의해 이차대사산물의 생성을 증가시키려 할 때 전구체만 투여하는 것보다는 촉진제를 동시에 투여함으로써 최종산물의 생성을 극대화시킬 수 있으리라 생각되며, 식물세포배양의 산업화에 유용하게 이용되리라 생각된다.
Plants generally produce secondary metabolites in nature as a defense mechanism against pathogenic and insect attack. In this study, we applied several abiotic elicitors in order to enhance growth and ginseng saponin biosynthesis in the hairy roots of P. ginseng. Generally, elicitor treatments were found to inhibit the growth of the hairy roots, although simultaneously enhancing ginseng saponin biosynthesis. The addition of selenium at inoculum time did not significantly affect ginseng saponin biosynthesis. However, when 0.5 mM selenium was added as an elicitor after 21 days of culture, ginseng saponin content and productivity increased to about 1.31 and 1.33 times control levels, respectively. These results suggest that processing time for the generation of ginseng saponin in a hairy root culture can be reduced via the application of an elicitor.
Guggulsterone, a hypolipidemic natural agent, is produced in resin canals of the plant Commiphora wightii. In this study, the stimulatory effects of growth retardants [ALAR (N,N-dimethylaminosuccinamic acid) and CCC (chlormequat chloride)] and fungal elicitor on guggulsterone accumulation in cell cultures of C. wightii are reported. CCC at $1\;mg\;l^{-1}$ enhanced guggulsterone content (${\sim}123\;{\mu}g\;l^{-1})$ when added on the fifth day after inoculation, while ALAR at $2.5\;{\mu}g\;l^{-1}$ increased guggulsterone content (${\sim}116\;{\mu}g\;l^{-1}$) when added on the tenth day. In a two-stage fed-batch process, combined treatment with fungal elicitor and growth retardant caused a significant increase (${\sim}353\;{\mu}g\;l^{-1}$) in guggulsterone content in cell cultures after 17 days of growth. This represents an approximately fivefold increase over the guggulsterone contents in initial cultures of this plant.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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