• 한국식품영양과학회지
• /
• 제32권3호
• /
• pp.418-427
• /
• 2003

본 연구는 식이성 CLA 투여에 따른 MCF-7 세포에서의 항암 효과를 기전적으로 규명하여 점차 증가하는 유방암 환자의 식이 지방질의 식생활 지침서 설정에 기초 자료를 제공하는 것을 목적으로 한다. 본 연구의 결과로, 지방산 종류에 따른 증식율을 살펴보면, 48시간 배양시 LA투여군에 비하여 CLA 투여군에서 농도가 증가할수록 세포증식이 증가하는 경향이었으나 LA군과 CLA군간의 차이는 없었다. 처치 농도별로 살펴보면 LA에 비하여 72시간 배양에서 CLA농도가 15$\mu$M에서 60$\mu$M로 증가할수록 LA투여군에 비하여 증식이 감소하였고 120$\mu$M에서는 차이가 없었다. 따라서 CLA투여군은 배양시간이 길수록 농도에 따라 LA투여군보다 증식이 억제된 것으로 나타났다. 세포내 지방산 유입률은 대조군보다 LA와 CLA 투여군의 세포내 유입률이 각각 22~54%, 17~41%정도로 더 많이 유입되어 세포내 지방산 조성에 영향을 주는 것으로 보인다. LA의 경우 고농도에서 세포내로의 유입이 잘 되지 않은 것은 세포내 항상성과 관련이 있는 것으로 생각된다. 대조군보다 LA과 CLA 지방산을 48시간 배양시 지질 과산화물 생성이 50~130%증가하였고 투여량이 증가할수록 MDA의 생성이 모두 증가하였다. 그러나, 72시간 배양시 CLA 30 $\mu$M에서는 대조군과 같은 수준으로 감소하였고 120 $\mu$M에서는 LA의 과산화물 생성이 CLA군보다 1.7배가량 증가하였다. 72시간 120$\mu$M CLA처치시 항산화 효소인 GPx, GR의 활성이 높게 나타난 것은 배양시 간이 길어질수록 CLA에 대한 항산화효소 활성이 더 커지며 이는 LA군과도 큰 차이를 보였다. 따라서, CLA의 장기간 처치 경우에도 과산화물 생성이 LA군보다 적게 생성된 것은 항산화효소 활성의 역할이 있을 수 있음을 배제할 수 없겠다. 또한, 유선암 세포에 CLA를 투여 할 경우 LA투여군에 비하여 PGE$_2$와 TXA$_2$ 생성이 크게 감소하였으며 이는 AA생성의 감소와 일치하는 결과이다. 이상의 결과를 종합해 볼 때 MCF-7 유선암세포에 LA군에 비하여 CLA투여에 따른 세포증식의 차이는 없었으나 배양시간이 증가할수록 CLA농도에 따른 세포증식률이 LA군보다 감소하는 경향이 있었다. 이는 항산화효소의 증가에 의한 지질 과산화물 생성삼소와 PGE$_2$및 TXA$_2$등의 유의적인 감소가 유선암세포의 증식을 억제하는 인자로 작용할 수 있는 가능성을 시사하였다. 또한 지방산 투여 에 따른 과산화물 생성과 항산화 시스템이 유선암 세포에서는 상호기전적으로 작용하지 않았으나 이는 농도와 배양시간에 따른 CLA의 항암효과가 in vivo 실험에서 재검증 할 필요가 있음을 시사한다. 또한 장시간의 세포배양 실험시 PGE$_2$는 반감기가 짧고 다른 대사물로 쉽게 전환되는 불안전한 물질이므로 새로운 측정방법의 개발이 필요하겠다. 더욱이 CLA에 의한 항암효과가 정확히 어떤 기전에 의한 것인지 보다 깊이 있는 연구가 필요하지만 본 연구에서 얻은 에이코사노이드 대사의 변화 등은 유선암 예방 연구에 기초적인 자료가 될 것으로 생각된다.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
• /
• 제8권2호
• /
• pp.151-157
• /
• 2003

Obtaining a sufficient amount of healthy keratinocytes from a small tissue is difficult. However, ORS cells can be a good source of epithelium since they are easily obtainable and patients do not have to suffer from scar formation at donor sites. Accordingly, the current study modified the conventional primary culture technique to overcome the low propagation and easy aging of epithelial cells during culturing. In a conventional primary culture, the average yield of human ORS tells is 2.↑ $\times$ 10$^3$cells/follicle based on direct incubation in a trypsin (0.1%)/EDTA(0.02%) solution for 15 min at 37$^{\circ}C$, however, our modified method was able to obtain about 6.9 $\times$ 10$^3$cel1s/follicle using a two-step enzyme digestion method involving dispase (1.2 U/mL) and a trypsin (0.1%)/EDTA (0.02%) solution. Thus, the yield of primary cultured ORS cells could be increasd three times higher. Furthermore, a total of 2.0 $\times$ 10$^{7}$ cells was obtained in a serum-free medium. while a modified E-medium with mitomycin C-treated feeder tells produced a total of 6.3 $\times$ 10$^{7}$ Cel1s over 17 days When Starting With 7.5 $\times$ 10$^4$cells. Finally, We Confirmed the effectiveness of our ORS tell isolation method by presenting their ability for reconstructing the bioartificial skin epithelium in vitro

• Radiation Oncology Journal
• /
• 제12권2호
• /
• pp.129-141
• /
• 1994

Intracellular ions which have a major role in cellular function have been reported to affect repair of radiation damage. Recently it has been reported that ouabain sensitizes A549 tumor cellls but not CCL-120 normal cells to radiation. Ouabain inhibits the $Na^+-K^+$-pump rapidly thus it increases intracellular Na concentration, Vanadate which is distributed extensively in almost all living organisms is known to be a $Na^+-K^+$-ATPase inhibitors, This study was performed to see any change in radiosensitivity of tumor cell by vanadate and any role of $Na^+-K^+$ATPase in radiosensitization. Experiments have been carried out by pretreatment with vanadate in human cell line(A549, JMG) and mouse cell line(L1210, spleen). For the cell survival MTT assay was performed for A549 and JMC cells and frypan blue dye exclusion test for L120, and spleen cells. Measurements of $Na^+-K^+$-ATPase activity in control, vanadate treated cell, radiation treated cell (9 Gy for A549 and JMG, 2 Gy for L1201, spleen), and combined $10^{-6}M$ vanadate and radiation treated cells were done. The results were summerized as fellows. 1. L1210 cell was most radiosensitive, and spleen cell and JMG cell were intermediate, and A549 cell was least radiosensitive. 2. Mininum or no cytotoxicity was seen with vanadate below concentration of $10^{-6}M$. 3. In A549 cells there was a little change in radiosensitivity with treatment of vanadate. However radiation sensitization was shown in low dose level of radiation i. e. 2- Gy. In JMG cells no change in radiosensitivity was noted. Both L1210 and spleen cell had radiosensitization but change was greater in tumor cell. 4. $Na^+-K^+$-ATPase activity was inhibited significantly in tumor cell by treatment of vanadate. 5. Radiaiton itself inhibited $Na^+-K^+$-ATPase activity of tumor cell with high $Na^+-K^+$-ATPase concention. Increase in radiosensitivity by vanadate was closely associated with orginal $Na^+-K^+$-ATPase contents. From the above results vanadate had little cytotoxicity and it sensitized tumor cells to radiation. Inhibitory effect of vanadate on $Na^+-K^+$-ATPase activity might be one of the contributing factors for radiosensitization to tumor cells which has greater enzyme activity than that of normal cell. It was suggested vanadate could be used as a potential radiosensitizer for tumor cells.

• Toxicological Research
• /
• 제25권2호
• /
• pp.71-78
• /
• 2009

We investigated the pathogenesis of liver tissue damage during the lipid peroxidation and fibrogenesis with the observation of correlations between the parameters of collagen synthesis (and deposition) and lipid peroxidation in liver fibrosis (cirrhosis) rats. Rats were randomly divided into two groups, normal and $CCl_4$-thiopental sod. intoxicated group. And the one group was treated intragastrically with the mixture of $CCl_4$-thiopental sod. 3 times per week for 3 weeks. The liver tissue and sera were used for the measurement of hydroxyproline (HYP), malonedialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD). Biochemical parameters such as aspartate transaminase (AST), alanine transaminase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), total-bilirubin and blood urea nitrogen (BUN) were measured. Additionally, the expression of collagen ${\alpha}1$(III) and $\beta$-actin mRNA was observed by RTPCR. The histological change in liver tissue was also observed by Masson's trichrome and H&E staining. Correlation analysis was carried by Spearman's rho method. All biochemical parameters except total-bilirubin were significantly higher in the $CCl_4$-thiopental sod. treated group than that of the normal group (p < 0.01). In the $CCl_4$-thiopental sod. treated group, Hyp as a parameter of collagen synthesis (deposition) and MDA as a metabolite of lipid peroxidation, were significantly elevated by 1.98 and 2.11 times higher than that of the normal group (p < 0.001) respectively. The activity of SOD in the $CCl_4$-thiopental sod. treated group is decreased significantly by 44.8% (p < 0.001). And collagen ${\alpha}1$(III) mRNA was more expressed in the $CCl_4$-thiopental sod. treated group than that of the normal group. However, the expression of $\beta$-actin mRNA is showed similar in both of groups. A good correlation was observed between the content of hyp and MDA concentration (r = 0.70, n = 40) in the two groups. And the correlation between the levels of hyp and SOD (r = -0.71, n = 25) is also reliable. However, no correlation were observed between MDA concentration and SOD (r = -0.40, n = 25) in the two groups. Elevated levels of MDA in $CCl_4$-thiopental sod. treated rats indicated enhancement of lipid peroxidation, which is accompanied by a decrease in SOD activity. Moreover, we could confirm that the parameters of collagen synthesis (and deposition) is in good correlation with the metabolite of lipid peroxidation (MDA) and the lipid peroxidation antagonizing enzyme (SOD). Hence, we propose that (1) lipid peroxidation and collagen synthesis (and deposition) could be enhanced by intragastrically application of $CCl_4$-thiopental sod. during a short terms. And (2) the intoxication of $CCl_4$-thiopental sod. could be used for monitoring of lipid peroxidation and collagen synthesis (and deposition) for test of antioxidant and antifibrotic agent.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제47권4호
• /
• pp.515-521
• /
• 2019

본 연구는 고지방 식이로 유발된 비만 모델의 지질 및 항산화 관련 효소의 대사에 대하여 와송 열수 추출물의 섭취를 통한 효과를 확인하였다. 정상군을 제외하고 나머지 군은 8주 동안 고지방식이를 공급하여 비만 상태로 유도하였으며, 9주에서 14주까지 고지방식이에 와송 열수 추출물이 2.5%, 5% 첨가된 식이를 자유 급식하였다. 그 결과, 고지방 식이군 대비 와송 추출물 섭취군에서 간과 폐의 무게가 감소되었으며, H&E 염색상에서도 lipid droplet이 현저하게 감소되는 것을 관찰할 수 있었다. 또한, 간조직내의 총 콜레스테롤과 중성지방과 같은 지질 함량이 유의성 있게 줄어들었다. 와송 추출물의 항산화제로서의 능력을 확인한 결과 DPPH 라디컬 소거능의 활성을 증가하였고, ROS 형성량은 탁월하게 감소되었다. 산화스트레스를 감소시키는 SOD와 CAT와 같은 항산화 효소의 활성이 와송 추출물의 고농도 섭취군에서 정상군에 근접하게 회복되었다. 결론적으로 와송 추출물의 섭취는 간내 지질대사를 조절하고 항산화 효소를 활성화시켜 비만 치료를 위한 생리활성물질로 유용하게 활용 가능할 것으로 생각된다.

• 대한소아치과학회지
• /
• 제47권1호
• /
• pp.93-98
• /
• 2020

Lesch-Nyhan 증후군은 hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase 결핍으로 인해 발생한 purine 대사 장애의 열성 유전 질환이다. 이 증후군은 신경 장애, 행동 장애 및 과요산혈증(hyperuricemia) 등의 증상이 나타난다. 특징적으로 자해 습관은 2 - 3세경 시작되는데, 구강 주위 조직이나 손, 발을 물어 뜯는 양상이 나타난다. 이 증례는 2세 7개월의 Lesch-Nyhan 증후군 환아의 자해습관을 반 고정식 립 범퍼를 이용하여 차단한 증례를 보고하는 바이다. 반 고정식 립 범퍼는 전통적인 인상채득 방식을 필요로 하지 않고 내원 당일 치료해 줄 수 있는 장점이 있으며, 보호자에 의해 탈, 부착이 가능하여 환아의 구강위생 관리에 용이하였다. 장치 장착 2 개월 후, 치아 주위 조직이 회복되고 연속성이 유지되는 양호한 결과를 보였다. 장치 장착 11개월 후, 양호한 회복양상이 유지되었으며 추가적인 외상이나 자해행동의 악화는 관찰되지 않았다. 따라서, semi-fixed lip bumper는 Lesch-Nyhan syndrome 환아의 자해습관을 차단하기 위한 interim appliance로 사용하는데 유용할 것으로 사료된다.

• 미생물학회지
• /
• 제48권4호
• /
• pp.293-297
• /
• 2012

극지의 다양한 환경으로부터 분리되어 극지연구소 PAMC(Polar and Alpine Microbial Collection)에 보관중인 169개 균주들을 0.4% colloidal chitin이 첨가된 ZoBell 고체배지에서 배양하여 chitinase 활성을 균주 27개를 선별하였다. 그 중 PAMC 21693 균주는 저온에서 pNP-$(GlcNAc)_1$를 기질로 사용했을 때 가장 큰 활성을 보였고, $4-37^{\circ}C$의 온도 범위 중 $4^{\circ}C$에서 가장 높은 개체수 증가율을 보였다. PAMC 21693의 chitinase 유전자를 클로닝한 결과 2,619 bp의 ORF를 포함하는 총 2,857 bp의 염기서열을 확보하였다. 대장균에서 chitinase 유전자의 재조합 단백질을 발현한 결과 분자량 96 kDa의 재조합 단백질을 확인할 수 있었다. 본 논문에서는 극지 미생물 유래 저온활성 chitinase들의 생물공학 분야에서의 이용가능성을 제시하였다.

• 한국식품영양과학회지
• /
• 제18권4호
• /
• pp.435-443
• /
• 1989

Pichia pastoris의 배양조건과 배지의 탄소원에 따른 alcohol-oxidase의 생성기능과 alcohol-oxidase의 기질특이성을 실험하기 위하여 P. pastoris CBS 2612와 P. pastoris CBM 10의 2균주에 대하여 실험하였다. 배양조건에 따른 효소생성은 glucose를 탄소원으로 첨가한 mineral salt medium에서 균체를 정상기까지 배양하여 methanol이 함유된 배지에서 재배양하는 2단계 배양법의 경우가 균체를 직접 methanol배지에 배양한 경우보다 효율적이었으며 생성된 총효소량도 전자의 경우가 후자에 비해 약 1.7배 정도 많았다. 다음 탄소원에 따른 효소생성능을 비교하였다. 먼저 직쇄alcohol을 탄소원으로 사용한 경우 methanol을 제외한 ethanol, propanol, butanol 그리고 pentanol에서는 효소가 생성되지 않았고 또한 이 직쇄alcohol을 methanol과 혼합한 경우에도 극미량의 생성에 그쳤다. 여러가지 탄소화합물(glucose, xylose, lactose, glycerol, galactose, saccharose, sorbose, lactic acid, acetic acid)을 탄소원으로 사용하면 methanol에 의해 생성된 효소량보다 훨씬 작았으나 이들을 methanol과 혼합 사용하면 효소생성량은 급격히 증가하였고, 특히 xylose, lactose 그리고 lactic acid의 경우는 methanol 단독 사용시보다 오히려 다량 생성되었다. 시험 2균주 중에서도 어떤 경우에서든지 P. pastoris CBS 2612가 alcohol-oxidase 생성능이 더 좋은 것으로 나타났다. 효소의 기질특이성은 효소를 기질에 반응시킬때는 교반을, 그리고 효소 활성측정은 alcohol-oxidase가 methanol을 분해하여 생성한 formaldehyde를 직접 정량 하였을 경우 탄소쇄가 7개 이하인 직쇄alcohols과 불포화alcohols, 그리고 일부2급alcohols(isobutyl alcohol, isoamyl alcohol)에도 특이성이 있었다.

• 한국식품위생안전성학회지
• /
• 제33권3호
• /
• pp.193-199
• /
• 2018

본 연구에서는 유전자 변형 옥수수(GM 옥수수)에 특이한 단크론성 항체를 개발하고 이에 대한 특성을 확인하는 연구를 수행하고자 하였다. 먼저 형질전환 대장균으로부터 PAT 단백질을 발현시킬 수 있는 시스템을 확립하였고, 재조합 PAT 단백질을 대량 생산하여 항원으로 사용하였다. 준비된 항원을 면역한 결과 재조합 PAT 단백질의 항원성은 매우 높은 것으로 확인되었으며, 세포융합과 클로닝을 통해 12 종의 hybridoma를 확립하였고 western blot 결과 10 종의 hybridoma가 재조합 PAT 단백질과 강한 반응성을 나타내었다. 10종의 hybridoma가 생산하는 항체가 실제 GM 옥수수에 반응하는지를 추가의 western blot으로 분석한 결과 2종의 단크론성 항체(PATmAb-7 and PATmAb-12)가 재조합 PAT 단백질뿐만 아니라 실제 GM 옥수수 중 PAT와 반응하는 것으로 확인되었다. 항체를 대량 생산하고 정제한 후 2종의 항체는 SDS-PAGE 상에서 대표적인 항체의 분리패턴(heavy와 light chain)을 나타내었고, 전형적인 $IgG_1$과 ${\kappa}$ type으로 확인되었다. 정제된 단크론성 항체는 특성을 조사한 결과 다른 GMO에서 발현될 수 있는 재조합 단백질과 non-GM 옥수수 추출물에는 반응성이 없고 PAT 단백질에만 특이적으로 반응하는 것을 확인할 수 있었다. PATmAb-7 를 이용한 간접효소면역분석법의 검출한계는 0.3 ng/mL 수준으로 기준의 유전자변형 콩 면역분석법과 비교했을 때 높은 민감도를 나타내었다. 이상의 결과로 볼 때 개발된 2종의 항체(PATmAb-7 and PATmAb-12)는 GM 옥수수에서 발현되는 PAT 단백질에 특이적으로 반응하는 항체로 확인되었고, 2종의 항체를 이용한 면역분석법과 바이오센서의 개발 가능성을 제시할 수 있었다.

• Pediatric Infection and Vaccine
• /
• 제25권3호
• /
• pp.132-140
• /
• 2018

목적: 뎅기바이러스 감염 환자 발생은 해외 여행이 증가함에 따라 증가하고 있다. 최근 감염 경험이 없는 사람에게 백신을 접종하면 이후 야생 뎅기바이러스 감염 시 중증 뎅기열 증상을 보일 수 있다고 연구된 바 있다. 따라서, 본 연구는 한국의 다양한 연령군에서 뎅기바이러스에 대한 혈청역학을 연구하였다. 방법: 건강한 영아 98명(2개월-1세), 청소년 152명(13-19세), 성인 90명(20-50세) 및 노인 106명(65세 이상)에서 수집한 혈청 총 446명을 대상으로 하였다. 각 연령군의 뎅기바이러스 immunoglobulin G (IgG) 항체 검사를 ELISA을 통해 측정하였다. 또한 뎅기바이러스 IgG 항체 검사에서 양성 또는 equivocal을 보이는 혈청에 한하여 일본뇌염 바이러스의 IgG 항체를 검사하였다. 결과: 총 446명 검체 중, 청소년군에서 1명(0.2%)만 뎅기바이러스 항체 검사에서 양성으로 나왔다. Equivocal은 14명(3.1%)으로, 청소년군 10명과 노인군 4명이 해당하였다. 뎅기바이러스 IgG 양성이 나온 1명에서 일본뇌염 바이러스 또한 IgG 양성으로 나왔다. 뎅기바이러스 IgG equivocal이 나온 14명에서는 일본뇌염 바이러스 IgG 양성이 6명, equivocal이 3명이었고 음성은 5명이었다. 결론: 한국인에서 뎅기바이러스에 대한 항체 보유율은 매우 낮았다. 본 연구는 향후 뎅기열 예방을 위한 보건 정책 수립에 중요한 자료가 될 수 있을 것이며 향후 지속적인 혈청면역 평가도 필요할 것이다.