토양 및 지하수 복원 과정에서 벤젠과 에틸렌이 혼합되어 배출될 경우 이를 biofilter에 의해 처리한 결과, 에틸렌은 생분해가 잘 되지 않는 화합물인데도 불구하고 체류시간이 10~15분에서는 96%이상 높은 생물학적 처리를 보여 biofilter운전 가능성이 제시되었다. 2~15분 체류시간에서 혼합 VOCs중 벤젠은 모든 조건에서 100% 제거되었다. 체류시간이 15분일 경우 벤젠과 에틸렌의 최대 제거능은 각각 4.3과 1.4g/$\textrm{m}^3$hr로서 벤젠이 에틸렌에 비해 3배 정도 컸다. 체류시간이 작을수록 에틸렌 분해율 감소로 인하여 이산화탄소 발생도 감소함을 발견하였으며 벤젠과 에틸렌이 모두 제거되는 운전에서 최고 이산화탄소 발생률은 3,169 [mg-$CO_2$/(g-${C_2}{H_4}$+${C_6}{H_6}$)]이었다. 벤젠 산화 미생물은 Bacillus mycoides와 Pseudomonas fluorescens로 동정되었고, 에틸렌 산화 미생물은 Pseudomonas putida와 Pseudomonas fluorescens로 각각 동정되었다.
The isolated microorganisms, Pseudomonas stutzeri, Raoultella planticola (Klebsiella), Serratia fonticola from petroleum contaminated soil were enriched on benzene, toluene, ethylbenzene, o-xylene as carbon and energy sources, respectively. And the degradation characteristics of BTEX was observed in the mixed BTEX substrates. We found that the BTEX in mixed substrates were degraded more than 50% by three isolated microorganisms. Among three isolated microorganisms, the highest degradation rate was observed in Pseudomonas stutzeri, but the degradation rate was different according to microorganisms. In order to increase the degradation efficiency, we applied the co-culture of isolated three microorganisms. The mixture rate of pseudomonas stutzeri : Raoultella planticola (Klebsiella) : Serratia fonticola was follows ; 1:2:1, 1:1:2, and 2:1:1, respectively. In two co-culture of 1:2:1 and 1:1:2, degradation rate was lower than isolated microorganisms. However, degradation rate became higher than isolated microorganisms and the degradation rate of benzene, toluene, and ethylene was more than 95% in co-culture of 2:1:1. The degradation rate increased through the co-culture of isolated microorganisms, however, the growth rate decreased. This was resulted from the substrate competition between microorganisms. The co-culture of microorganisms is a effective method to increase the degradation efficiency of BTEX and the co-culture mixing rate is a important factor for determination of degradation efficiency.
Four naphthalene-degrading bacteria (Pseudomonas sp. strains O1, W1, As1, and G1) were isolated feom pollutant-contaminated sites. Examination of their substrate utilization and analyses of key naphthalene-catabolic regulatory genes revealed that the pathway and regulation of naphthalene-degradation in all four strains resemble those of NAH7 from P. putida G7. Superoxide anion production, superoxide dismutase activity, and catalase activity during their growth on naphthalene-amended medium increased significantly, compared with those with glucose-amended medium. Addition of ascorbate, an antioxidant, or ferrous iron ($Fe^{2+}$) increased the growth rates of all tested microorganisms on naphthalene. Northern blot and HPLC analyses showed that both nahA gene expression and naphthalene degradation increased under those conditions. Our data suggest that naphthalene degradation can impose severe oxidative stress, and defenses against oxidative stress would play an important role in the metabolism of naphthalene.
Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), including naphthalene, are widely distributed in nature. Naphthalene has been regarded as a model PAH compound for investigating the mechanisms of bacterial PAH biodegradation. Pseudomonas sp. AS1 isolated from an arseniccontaminated site is capable of growing on various aromatic compounds such as naphthalene, salicylate, and catechol, but not on gentisate. The genome of strain AS1 consists of a 6,126,864 bp circular chromosome and the 81,841 bp circular plasmid pAS1. Pseudomonas sp. AS1 has multiple dioxygenases and related enzymes involved in the degradation of aromatic compounds, which might contribute to the metabolic versatility of this isolate. The pAS1 plasmid exhibits extremely high similarity in size and sequences to the well-known naphthalene-degrading plasmid pDTG1 in Pseudomonas putida strain NCIB 9816-4. Two gene clusters involved in the naphthalene degradation pathway were identified on pAS1. The expression of several nah genes on the plasmid was upregulated by more than 2-fold when naphthalene was used as a sole carbon source. Strains have been isolated at different times and places with different characteristics, but similar genes involved in the degradation of aromatic compounds have been identified on their plasmids, which suggests that the transmissibility of the plasmids might play an important role in the adaptation of the microorganisms to mineralize the compounds.
Phenol is frequently present as the hazardous pollutant in petrochemical and pesticide industry wastewater. Because of its high toxicity and carcinogenic potential, a proper treatment is needed to reduce the hazards of phenol carrying effluent before being discharged into the environment. Phenol biodegradation with microbial consortium offers a very promising approach now a day's. This study focused on the formulation of phenol degrading bacterial consortium with three bacterial isolates. The bacterial strains Bacillus cereus strain VCRC B540, Bacillus cereus strain BRL02-43 and Oxalobacteraceae strain CC11D were isolated from detergent contaminated soil by soil enrichment technique and was identified by 16s rDNA sequence analysis. Individual cultures were degrade 100 μl phenol in 72 hrs. The formulated bacterial consortium was very effective in degrading 250 μl of phenol at a pH 7 with in 48 hrs. The study further focused on the analysis of the products of biodegradation with Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FT/IR) and Gas Chromatography-Mass Spectroscopy (GC-MS). The analysis showed the complete degradation of phenol and the production of Benzene di-carboxylic acid mono (2-ethylhexyl) ester and Ethane 1,2- Diethoxy- as metabolic intermediates. Biodegradation with the aid of microorganisms is a potential approach in terms of cost-effectiveness and elimination of secondary pollutions. The present study established the efficiency of bacterial consortium to degrade phenol. Optimization of biodegradation conditions and construction of a bioreactor can be further exploited for large scale industrial applications.
In the present investigation, we attempted to design a protocol to develop a hybrid protein with better bioremediation capacity. Using in silico approaches, a Hybrid Open Reading Frame (Hybrid ORF) is developed targeting the genes of microorganisms known for degradation of organophosphates. Out of 21 genes identified through BLAST search, 8 structurally similar genes (opdA, opd, opaA, pte RO, pdeA, parC, mpd and phnE) involved in biodegradation were screened. Gene conservational analysis categorizes these organophosphates degrading 8 genes into 4 super families i.e., Metallo-dependent hydrolases, Lactamase B, MPP and TM_PBP2 superfamily. Hybrid protein structure was modeled using multi-template homology modeling (3S07_A; 99%, 1P9E_A; 98%, 2ZO9_B; 33%, 2DXL_A; 33%) by $Schr{\ddot{o}}dinger$ software suit version 10.4.018. Structural verification of protein models was done using Ramachandran plot, it was showing 96.0% residue in the favored region, which was verified using RAMPAGE. The phosphotriesterase protein was showing the highest structural similarity with hybrid protein having raw score 984. The 5 binding sites of hybrid protein were identified through binding site prediction. The docking study shows that hybrid protein potentially interacts with 10 different organophosphates. The study results indicate that the hybrid protein designed has the capability of degrading a wide range of organophosphate compounds.
Microbial activity of biofilm formed on the surface of gravels from intertidal zone was estimated using an aerobic respirometer system, and compared with that of suspended marine microorganisms contained in a near shore water. The maximum oxygen uptake rate of the suspended marine microorganisms was 0.15mg O$_2$/L/hr, indicating the potential of purification of polluted near shore water. For the gravels from the intertidal zone, the maximum uptake rate of oxygen was affected by the vertical positions, but their gross value was 0.77mg O$_2$/L/hr, which was around 5.1 times higher than the purification potential of polluted near shore water by the microorganisms contained in the near shore water. The nitrogen removed by the gravels from the intertidal zone and the marine microorganisms was about 1/20-1/39 times of the total consumption of oxygen, which was similar to that of the phosphate. The gravel intertidal zone contained lots of particulate organics, over than that in the near shore water, and this was confirmed from the large difference between total oxygen consumption and the removed soluble COD in the microbial activity test. This indicates that the gravel intertidal zone plays an important role in controlling the non-point source pollutants from land, as well as self-purification of polluted near shore water by trapping and degrading the particulate organics.
Microbial activity of biofilm formed on the surface of gravels from intertidal zone was estimated using an aerobic respirometer system, and compared with that of suspended marine microorganisms contained in a near shore water, The maximum oxygen uptake rate of the suspended marine microorganisms was 0.15mg$O_2$/L/hr, indicating the potential of purification of polluted near shore water. For the gravels from the intertidal zone, the maximum uptake rate of oxygen was affected by the vertical positions, but their gross value was 0.77mg $O_2$/L/hr, which was around 5.1 times higher than the purification potential of polluted near shore water by the microorganisms contained in the near shore water. The nitrogen removed by the gravels from the intertidal zone and the marine microorganisms was about 1/20-1/39 times of the total consumption of oxygen, which was similar to that of the phosphate. The gravel intertidal zone contained lots of particulate organics, over than that in the near shore water, and this was confirmed from the large difference between total oxygen consumption and the removed soluble COD in the microbial activity test. This indicates that the gravel intertidal zone plays an important role in controlling the non-point source pollutants from land, as well as self-purification of polluted near shore water by trapping and degrading the particulate organics.
Rhodococcus sp. 3-2 strain has been reported to degrade benzimidazole-based pesticides, such as benomyl and carbendazim. Therefore, this study aimed to optimize culture medium composition and culture conditions to achieve cost-effective and efficient large-scale production of the Rhodococcus sp. 3-2 strain. The study identified that the optimal media composition for mass culture comprised 0.5% glucose, 0.5% yeast extract, 0.15% NaCl, 0.5% K2HPO4, 0.5% sodium succinate, and 0.1% MgSO4. Additionally, a microbial agent was developed using a 1.5-ton fermenter, with skim milk (20%), monosodium glutamate (15%), and vitamin C (2%) as key components. The storage stability of the microbial agent has been confirmed, with advantages of low temperature conservation, which helps to sustain efficacy for at least six months. We also assessed the benomyl degradation activity of the microbial agent within field soil. The results revealed an over 90% degradation rate when the concentration of viable cells exceeded 2.65 × 106 CFU/g after a minimum of five weeks had elapsed. Based on these findings, Rhodococcus sp. 3-2 strain can be considered a cost-effective microbial agent with diverse agricultural applications.
합성세제 분해능이 월등한 Pseudomonas putida 와 프탈산에스테르를 분해하는 Arthobacter spp. 의 세포융합을 통해 합성세제와 프탈산에스테르의 분해능을 모두 갖는 융합균주를 개발하였다. Ampicillin-Lysozyme-EDTA 에 의한 각 균주의 원형진체 생성율은 98.4%-99.9% 이었고 원형질체의 재생율은 5-8%이었다. Fusogen으로 40%PEG4000 을 이용하였을 때 효과적으로 융합이 이루어졌으며 융합율은 $1.8{\times}10^{4}$-2.9{\times}10^{4}$ 이었다. 선별된 융합체는 프탈산에스테르와 ABS 를 모두 분해하였으며 ABS 의 분해능은 모균주보다 약 20% 정도 분해능이 증가하였고 DEHP 의 분해능은 모균주와 비슷한수준이었으나 모균주보다 더 빨리 기질을 분해하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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