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Heterologous Expression of Yeast Prepro-$\alpha$-factor in Rat $GH_3$ Cells

  • Lee, Myung-Ae;Cheong, Kwang-Ho;Han, Sang-Yeol;Park, Sang-Dai
    • Animal cells and systems
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    • 제4권2호
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    • pp.157-163
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    • 2000
  • Yeast pheromone a-factor is a 13-amino acid peptide hormone that is synthesized as a part of a larger precursor, prepro-$\alpha$-factor, consisting of a signal peptide and a proregion of 64 amino acids. The carboxy-terminal half of the precursor contains four tandem copies of mature $\alpha$-factor. To investigate the molecular basis of intracellular sorting, proteolytic processing, and storage of the peptide hormone, yeast prepro-$\alpha$-factor precursors were heterologously expressed in rat pituitary $GH_3 cells. When cells harboring the precursor were metabolically labeled, a species of approximately 27 kD appeared inside the cells. Digestion with peptide: N-glycosidase F (PNG-F) shifted the molecular mass to a 19 kD, suggesting that the 27 kD protein was the glycosylated form as in yeast cells. The nascent polypeptide is efficiently targeted to the ER in the $GH_3 cells, where it undergoes cleavage of its signal peptide and core glycosylation to generate glycosylated pro-a-factor. To look at the post ER intracellular processing, the pulse-labelled cells were chased up to 2 hrs. The nascent propeptides disappeared from the cells at a half life of 30 min and only 10-25% of the newly synthesized, unprocessed precursors were stored intracellularly after the 2 h chase. However, about 20% of the pulse-labeled pro-$\alpha$-factor precursors were secreted into the medium in the pro-hormone form. With increasing chase time, the intracellular level of propeptide decreased, but the amount of secreted propeptide could not account for the disappearance of intracellular propeptide completely. This disappearance was insensitive to lysosomotropic agents, but was inhibited at $16^{circ}C or 20^{\circ}C$, suggesting that the turnover of the precursors was not occurring in the secretory pathway to trans Golgi network (TGN) or dependent on acidic compartments. From these results, it is concluded that a pan of these heterologous precursors may be processed at its paired dibasic sites by prohormone processing enzymes located in TGN/secretpry vesicles producing small peptides, and that the residual unprocessed precursors may be secreted into the medium rather than degraded intracellularly.

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금속이온 흡착 및 분리를 위한 킬레이트 시약-침윤수지에 관한 연구 (제1보). 8-Hydroxyquinoline-침윤수지 (Studies on the Chelating Agent-Impregnated Resins for the Adsorption and Separation of Metal Ions (Ⅰ). 8-Hydroxyquinoline-Impregnated Resins)

  • 이대운;이택혁;박광하
    • 대한화학회지
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    • 제27권5호
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    • pp.353-360
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    • 1983
  • 8-hydroxyquinoline의 Amberlite XAD-7 수지에 대한 최적 흡착조건의 매질용액은 pH 6.0~9.0의 30% MeOH 수용액이다. 이 매질 용액에서 XAD-4 및 XAD-7 수지에 대한 8HQ의 침윤량은 각각 3.81${\times}$10-2mmol 8HQ/g, XAD-4 resin와 2.60${\times}$10-2mmol 8HQ/g, XAD-7 resin이었다. 8HQ-XAD-4 및 8HQ-XAD-7 침윤수지는 pH 6.0-10.0 영역에서 안정하였으며, 특히 8HQ-XAD-4 수지의 경우에는 흡착된 금속이온의 회수에 사용되는 용리액인 HCl의 농도가 증가할 수록 안정도가 증가하였다. 8HQ-XAD 침윤수지에 대한 Cu(II), Cd(II), Ni(II), 및 Fe(III) 금속이온의 흡착은 pH 6.0~10.0 영역에서 최대 흡착을 보였으며, 금속이온의 흡착몰비(금속이온 : 8HQ)는 Cu(II), Cd(II), Ni(II)의 경우에는 1:2이었으며, Fe(III)의 경우는 1:3으로 나타났다. 8HQ-XAD 침윤수지에 흡착된 금속이온은 5M HCl로 용리하였을 때 정량적으로 회수되었으며, 8HQ-XAD-4 침윤수지는 5M HCl을 용리액을 사용하였을 때 침윤양의 감소없이 5회 이상 재사용이 가능하였다.

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KHz 반복률에서의 Ti:sapphire 이득 스위칭 레이저 발진과 펨토초 처프펄스 재생 증폭 (Kilohertz Gain-Switched Ti:sapphire Laser Operation and Femtosecond Chirped-Pulse Regenerative Amplification)

  • 이용인;안영환;이상민;서민아;김대식
    • 한국광학회지
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    • 제17권6호
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    • pp.556-563
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    • 2006
  • 1kHz 반복률의 펨토초 펄스를 방출하는 안정된 Ti:sapphire 처프펄스 재생 증폭 시스템의 자체제작 및 최적화를 위해 시스템을 구성하는 각 요소들의 특성을 세부적으로 분석하였다. 사용된 증폭 공진기를 kHz 영역에서 반복률 변환 가능한 이득스위칭 레이저 구조로 변환하여 펄스 생성시간, 펌프출력에 따른 방출출력 특성 및 파괴여부, 펄스의 길이 및 파장가변 영역 등의 다양한 발진특성을 측정 분석하고, 이 결과를 기반으로 증폭 공진기를 설계하였으며, 내부에 설치된 포켈셀의 작동시간, 증폭 시 펄스의 공진횟수 등을 고려하여 증폭단을 최적화하였다. 증폭기의 종자펄스로는 자체제작된 커 렌즈 모드잠금 Ti:sapphire 레이저로부터 방출되는 50fs 펄스가 사용되었다. 종자펄스는 3개의 거울로 구성된 재생 증폭공진기에 입사되기 전에 펄스늘림기를 통해 120ps로 확대되었으며, 증폭 후 펄스길이의 재압축을 통해 815nm 영역에서 85fs, $320{\mu}J$의 극초단 펄스를 방출하는 1kHz 처프펄스 재생 증폭기를 제작하였다.

황남대총 남분출토 태환이식의 성분분석과 그 특징 (Ingredient analysis of 태환이식 excavated from 황남대총 남분 and the characteristics)

  • 주진옥;강대일
    • 보존과학연구
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    • 통권27호
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    • pp.129-143
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    • 2006
  • 황남대총 남분에서 출토된 3쌍의 금제태환이식을 상대로 과학적 조사를 실시하였다. 태환이식의 주환인 태환은 사용된 금판의 수량에 따라 제작기법이 크게 4가지로 구분될 수 있는데 황남대총 남분출토 3쌍의 태환을 확인해 본 결과 3가지의 기법을 확인할 수 있었기에 이는 기술적인 발전에 의한 것이 아니라 제작하고자 하는 금속의 성분에 따라 각기 방법을 달리 하였음을 알 수 있다. 그리고 태환의 성분분석 결과 쌍임에도 많은 차이를 보였으니 한쪽은 금은 합금으로, 또 다른 쪽은 99.5%의 순은(Ag(에 금아말감을 이용한 금도금으로 되었다. 또 다른 한쌍은 33.0%라는 많은 량의 은(Ag)이 합금되어 다른 금제이식에 비해 황금색이 아닌 붉은 색을 띠고 있었다. 이번에 조사된 금제 태환이식에는 모두 소량의 구리(Cu)가 모두 함유된 것으로 나타났다.위와 같은 쌍임에도 불구하고 제작기법의 상이, 중량 및 금속의 성분에 있어서 상당한 차이를 보이고 있음은 황남대총 남분에서 출토된 금제 태환이식이 제작기간의 촉박함에 의한 급조임을 의미한다고 할 수 있다. 앞으로 지역적인 제한에서 벗어나 여러 지역과의 비교분석 즉 자연과학적인 방법을 통한 태환이식의 성분 및 제작기법을 검토한다면 유추가 아닌 과학적인 근거를 기초로 기존에 알 수 없었던 다양한 고대의 금속공예기술과 사회상을 파악하는데 큰 역할을 할 수 있을 것이다.

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자외선과 MMS에 의한 절제회복, 염색체이상, 자매염색분체 교환 및 복제억제 현상에 미치는 Ara-C의 영향 (Effects of Ara-C on UV and MMS-induced Excision Repair, Chromosome Aberrations, Sister Chromatid Exchanges and Replication Inhibition)

  • Park, Kyung-Hee;Park, Sang-Dai
    • 한국동물학회지
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    • 제23권4호
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    • pp.203-218
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    • 1980
  • DNA회복합성과 염색체이상, 자매염색분체 교환 및 복제억제 현상과의 연관성을 추구하기 위해서 $HF_1$, CHO 및 $HeLa S_3$ 세포를 재료로 자외선 또는 MMS를 처리하기전 또는 후에 ara-C를 처리하여 그 효과를 비교 검토하였다. (1) Ara-C는 자외선 및 MMS에 의한 DNA회복합성을 억제하였으며 이 억제효과는 ara-C를 후 처리한 경우 더욱 현저하였다. (2) Ara-C는 자외선이나 MMS에 의한 염색체 이상율을 증가시켰다. 특히 MMS 처리후 ara-C를 처리한 실험군에서는 염색체이상율이 상승효과를 보였는데 이는 염색분체 절단이 증가된 때문이었다. (3) Ara-C는 염색체이상에서와는 달리 자외선이나 MMS에 의한 자매염색분체 교환율을 증가시키지 않았다. 이는 특히 MMS군에서 전처리한 경우에 뚜렷하였다. (4) Ara-C를 처리하면 DNA합성율이 즉시 감소했다가 회복되었다. 그러나 ara-C와 자외선 EH는 MMS를 복합처리하면 DNA 합성양상이 처음에는 ara-C의 영향처럼 보이다가 뒤에는 자외선 또는 MMS에 의한 반응과 같이 나타났다. 이같은 결과들은 ara-C가 DNA 상해요인이 아님에도 염색체이상 또는 염색체분체교환 유발요인으로 작용함을 나타내며, DNA 회복기작이 염색체이상, 자매염색분체교환 및 복제억제 현상과 직접적인 상관성이 없음을 시사하는 것이다.

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시험관내에서 돼지회충(Ascaris suum) 함자충란(L2)의 인공배양 (In vitro cultivation for development of Ascaris suum from the decoated and embryonated eggs(second-stage larva))

  • 지차호;박승준
    • 대한수의학회지
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    • 제38권1호
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    • pp.107-117
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    • 1998
  • The cultivation for development of Ascaris suum from the second-stage larvae($L_2$) embryonated egg and the third-stage of rat-derived larvae($L_3$) recovered from lung of rats were performed to use the screening test of anthelmintics in vitro. The preparations of larvae for cultivation were that the artificially-hatched $L_2$ incubated the embryonated eggs of Ascaris suum in 0.1% formalin solution at $25^{\circ}C$ for 28 days and the rat-derived larvae($L_3$) recovered from the lung of rat infected with the embryonated eggs of Ascaris suum on 7 days after infection(DAI). The cultivation for development of Ascaris suum from the embryonated eggs($L_2$) and the rat-derived larvae($L_3$) for 14 days in RPMI medium 1640(with 5% bovine calf serum) were as follows : 1. The sizes of the liberated larvae($L_2$) which were artificially hatched from embryonated eggs with glass beads(diameter 5mm) were $190{\sim}250{\mu}m$ on 1 days in culture(DIC). The second-stage larvae were molted into third-stage larvae(early $L_3$; $250{\sim}300{\mu}m$) and the features of these larvae were first observed such as cephalic cuticle, esophageal lumen and anus etc. on 5 DIC and the sizes of late third-stage larvae were $250{\sim}450{\mu}m$ on 10 DIC. The sizes of early fourth-stage larvae($L_4$) were $500{\sim}700{\mu}m$ and the features of these larvae were more pronounced in internal organs on 15 DIC. 2. The sizes of third-stage larvae($L_3$) recovered from the lung of rats were $1,340{\sim}1,370{\mu}m$ and the feartures of cephalic cuticle, esophageal lumen, intestine, rectum, anus were visualized by inverted microscope on 1 DIC. The fourth-stage larva($L_4$) completed by third ecdysis were recognizable and sizes of early fourth-stage larvae were developed as $1,400{\sim}2,200{\mu}m$ on 5 DIC. The sizes of middle fourth-stage of larva were $1,900{\sim}2,300{\mu}m$ and the thickened epithelial rectum was observed on 10 DIC. The rectum and anus of late fourth-stage larva($L_4$ $2,500{\sim}3,200{\mu}m$) had developed completely in RPMI medium 1640 on 15 DIC.

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광 촉매 이산화 티타늄의 개 피부에 대한 항균효과 (The antibacterial effect of photo-catalytic titanium dioxide on canine skin)

  • 장화석;김지은;정다정;이정선;최치봉;김휘율
    • 대한수의학회지
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    • 제46권3호
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    • pp.279-284
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    • 2006
  • Photo-catalytic products have been widely used at home and hospital to prevent bacteria, virus and fungus. Activities of anti-bacteria, anti-viruses and anti-fungi are based upon direct contact of crystals and particles of titanium dioxide with pathogens, into which titanium is catalyzed by photo. Those antimicrobial activities of the photo-catalytic titanium dioxide have been proved in vitro. However, in vivo tests of those activities have not been carried out on dog skin. Aim of this study was to evaluate the antimicrobial activities of the catalytic titanium dioxide in vivo. Ten beagle dogs were divided into two groups. One group was sprayed with 10ml of titanium dioxide(1 mg/ml) whereas the other was not. The treated dogs were exposed under the sunlight for 120 min. A set of three hairs was taken 15, 30, 60 and 120 min after the exposure and the bacteria contaminated in hairs were amplified in, Muller Hilton broth at $35^{\circ}C{\pm}1$ for 3 h. The supernatant of the bacterial culture was diluted 1 : 10 in phosphafe-buffered saline. One milliliter of the diluents was transferred into triphenyltetrazolium medium(TTC) and incubated at $35^{\circ}C{\pm}1$ for 2 days. The number of bacteria was counted. The number of bacteria colonies was decreased compared to control group. To further investigate the longevity effect of titanium dioxide, the dogs were kept in indoor without sun light for 6 and 12 h, 1, 2, 3, 7, 14 days after exposure of the chemical during each 15, 30, 60 min. The number of bacteria colony in 1ml was counted. The number of bacterial colonies was decreased. Treated group is exposured by sun light during 15 min, the longevity effect of titanium dioxide is continued by 1 week. Treated group is exposured by sun light during 30, 60 min, the longevity effect of titanium dioxide is continued over 2 weeks. These data indicated that the photo-catalytic titanium dioxide may be used for prevent bacteria on dog skin.

마취된 개의 자발호흡상태에서 일측폐환기 및 양측폐환기가 심순환기 및 호흡기계에 미치는 영향 (Cadiorespiratory effects of isoflurane-anesthetized dogs with closed chest during spontaneous two-lung and one-lung ventilation)

  • 송영성;장화석;김혜진;김순신;최준철;양희택;정다정;김휘율
    • 대한수의학회지
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    • 제45권2호
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    • pp.279-285
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    • 2005
  • One-lung ventilation (OLV) is the isolation and selective ventilation of one lung field. OLV allows the collapse of lung lobes on the side of the thoracic surgical approach to facilitate observation of intrathoracic structures and to achieve lung immobility. OLV be achieved by endotracheal intubation with double lumen tubes or bronchial blockers. In this study, cardiopulmonary consequences of two-lung ventilation (TLV), OLV and Re-TLV (TLV after OLV) were evaluated in 5 dogs. The dogs were anesthetized with mask induction and maintained with isoflurane in oxygen. Tidal volume and respiratory rates were set to maintain end-tidal $CO_2$ at $40{\pm}2mmHg$ during instrumentation. Following instrumentation, the dogs were placed in right lateral recumbency and induced spontaneously respiration state. Effect of TLV on hemodynamic and pulmonary variables were recorded. Then, the left bronchus was obstructed by endotracheal intubation with double lumen endotracheal tube to achieve OLV state and recording was continued. After OLV, double lumen endotracheal tube was extubated, and standard endotracheal tubes was intubated again. In this study, spontaneous OLV caused significant decrease in $PaO_2$, arterial oxygen saturation, mixed-venous oxygen saturation, and increase in $PaCO_2$. Especially, a significant elevation in $PaCO_2$ and respiratory acidosis were remarkable findings. So spontaneous ventilation in OLV affected gas exchange and hemodynamic function.

1,5,3,7-Diazadiphosphocine-1,5-Dicarboxylic Acids의 합성과 반응 (Synthesis and Reaction of 1,5,3,7-Diazadiphosphocine-1,5-Dicarboxylic Acids)

  • 조승환;송주현;이도훈;이용균;박유미;최순규;한정태;정대일
    • 생명과학회지
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    • 제17권7호통권87호
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    • pp.910-914
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    • 2007
  • 본 연구는 MRI 조영제나 새로운 생리활성 물질을 개발키 위해 paraformaldehyde와 hypophosphorous acid를 아미노산인 glycine 혹은 glutamic acid와 함께 반응시켜 3,7-dihydroxy-3,7-dioxoperhydro-1,5,3,7-diazadiphos-phocme-1,5-diacetic acid 1 와 3,7-dihydrexy-3,7-dioxoperhydre-1,5,3,7-diazadiphos-phocme-1,5-di- (2-glutaric acid)3을 합성하였다. 그러나 aspartic acid에 의한 2-[5-(1,2-dicarboxy-ethyl)-3,7-dihydroxy-3,7-dioxo-315.715-[1,5,3,7]diazadiphosphocan-1-yl]-succinic acid 2는 얻지 못했다. 합성 된 3,7-dihydroxy-3,7-dioxoperhydro-1,5,3,7-dia-zadiphosphocine-1,5-diacetic acid 1을 산 촉매에 의한 에스테르화반응시켜 화합물 3,7-dihydroxy-3,7-dioxoper-hydro-1,5,3,7-diazadiphosphocine-1,5-diacetic acid methyl ester 4, 3,7-dihydroxy-3,7-dioxoperhydro-1,5,3,7-dia-zadiphosphocine-1,5-diacetic acid ethyl ester 5, 그리고 3,7-dihyoxy-3,74dioxoperhyo-1,5,3,7-diazadiphosphocine-1,5-diacetic acid propyl ester 6을 합성하였다. 계속해서 다양한 반응을 통해 새로운 화합물을 합성할 것이며 생리활성검색도 실시할 예정이다.

집단 사육 되는 토끼에서 호발하는 피부병에 관한 병인론적 연구 (An Etiologic Study of Rabbit Dermatitis at Large Rabbit Farms in South Korea)

  • 김성호;이재훈;장화석;강은희;정다정;김휘율
    • 생명과학회지
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    • 제19권11호
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    • pp.1499-1505
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    • 2009
  • 본 실험은 2007년 8월에서 9월 동안, 집단 사육되는 토끼에서 피부병을 유발한 주 병원체를 확인하고 역학적인 특성을 조사하기 위해 실시되었다. 총 10개의 농장에서 임상적으로 피부병이 명확한 토끼들을 선별하여 실험에 공시하였다. 40마리의 토끼 피부병변에서 모발 및 피부 조직 520개를 채취하여 진균학적, 세균학적, 기생충학적으로 검사를 실시하였다. 피부사상균, 세균성 피부염 그리고 기생충성 피부염의 발병율은 각각 95%, 92.5% 그리고 7.5%로 나타났다. 진균 배양 결과에서 피부 사상균의 주된 원인체로 Trichophyton mentagrophyte (95%)가 가장 많이 검출되었고, 그 다음으로 Aspergillus s(5%)와 Cryptococcus humilocus (2.5%)가 순차적으로 검출되었다. 세균 배양 결과에서는 토끼의 세균성 피부염을 유발하는 원인체로 Staphylococcus coagulase가 가장 많이 검출되었고, Staphylococcus aureus가 두 번째로 많은 비율을 차지하였다. 이 연구에서는 외부 기생충의 검출은 낮게 나타났으며, Psoroptes cuniculi가 40마리의 토끼 중 3마리에서(7.5%) 검출되었다. 본 실험의 결과는 토끼 피부병 치료와 연구에 관련한 기초 정보를 제공할 것이라 판단된다.