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능성어(Epinephelus septemfasciatus) immunoglobulin M에 대한 단클론 항체 생산 (Production of monoclonal antibodies to immunoglobulin M of sevenband grouper (Epinephelus septemfasciatus))

  • 김시우;김종오;공경희;오명주;김위식
    • 한국어병학회지
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    • 제34권1호
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    • pp.111-115
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    • 2021
  • Immunoglobulin M (IgM) of sevenband grouper (Epinephelus septemfasciatus) was purified by mannan-binding protein (MBP) affinity column. The purified IgM had an apparent molecular weights of 76 (heavy chain) and 28 (light chain) kDa in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Eight hybridoma clones secreting monoclonal antibodies (mAbs) against sevenband grouper IgM were established. Antibody detection enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with bovine serum albumin (BSA, antigen) and the 8 mAbs revealed that optical density (OD) values were clearly different between sera from BSA-immunization and non-immunization of sevenband grouper. These results suggest that the produced mAbs in this study are specifically reacted with IgM of sevenband grouper.

In utero exposure to 2.3', 4.4', 5- Pentachlorobiphenyl (PCB 118) alters postnatal reproductive development in female rat

  • Kim, Soon-Sun;Rhee, Gyu-Seek;Kim, So-Hee;Sohn, Kyung-Hee;Kwack, Seung-Jun;Lee, Rhee-Da;Park, Chul-Hoon;Kil, Kwang-Sup;Choi, Kwang-Sik;Park, Kui-Lea
    • 대한약학회:학술대회논문집
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    • 대한약학회 2002년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2
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    • pp.296.2-296.2
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    • 2002
  • Our previous study demonstrated that 2.3', 4.4'. 5- Pentachlorobiphenyl (PCB 118) showed an antiestrogenic activity in vitro and in vivo. In the present study. we examined the effect of PCB 118 on postnatal reproductive development in female rats. PCB 118 (0.001. 0.01 or 0.1 mg/kg/day) was administered to pregnant female SD rats from gestation day (GO) 6 to 18 via subcutaneous injection. and developmental parameters such as vaginal opening were determined. PCB 118 significantly delayed vaginal opening of female offsprings at dose of 0.1 ${\mu}g$/kg/day. whereas had no effects on body weights. In addition. in utero treatment of PCB 118 caused significant decreases in serum levels of E2, T3 and T4 in female oftsprings at certain doses on postnatal day (PND) 22. Our data of results indicate that in utero exposure to PCB 118 may postnatal reproductive development in female rat through its antiestrogenic activity.

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Effect of 50 ㎛ class granules on the Injection Behavior of Brushite Bone Cement Prepared via Pre-dissolution Route

  • Mun, Da Hye;Lee, Sang Cheon;Oh, Kyung-Sik
    • 한국분말재료학회지
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    • 제27권6호
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    • pp.468-476
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    • 2020
  • The bone cement used for vertebroplasty must be sufficiently injectable. The introduction of granules reduces the amount of liquid required for liquefaction, implying that higher fluidity is achieved with the same amount of liquid. By employing β-tricalcium phosphate granules with an average diameter of 50 ㎛, changes in injectability are observed based on the paste preparation route and granular fraction. To obtain acceptable injectability, phase separation must be suppressed during injection, and sufficient capillary pressure to combine powder and liquid must work evenly throughout the paste. To achieve this, the granules should be evenly distributed. Reduced injection rates are observed for dry mixing and excessive granular content, owing to phase separation. All these correspond to conditions under which the clustered granules weakened the capillary pressure. The injected ratio of the paste formed by wet mixing displayed an inverted U-type shift with the granular fraction. The mixture of granules and powder resulted in an increase in the solid volume fraction, and a decrease in the liquid limit. This resulted in the enhancement of the liquidity, owing to the added liquid. It is inferred that the addition of granules improves the injectability, provided that the capillary pressure in the paste is maintained.

내독소처치 흰쥐에서 Tumor Necrosis Factor-$\alpha$치 상승에 따른 폐손상 악화 및 35 kDa 단백질 합성 (Lung Injury Indices Depending on Tumor Necrosis Factor-$\alpha$ Level and Novel 35 kDa Protein Synthesis in Lipopolysaccharide-Treated Rat)

  • 최영미;김영균;권순석;김관형;문화식;송정섭;박성학
    • Tuberculosis and Respiratory Diseases
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    • 제45권6호
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    • pp.1236-1251
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    • 1998
  • 연구배경 : 급성폐손상의 병태생리학적 기전에는 염증세포들이 분비하는 다양한 염증성 매개물질들이 매우 중요한 역할을 한다. 이중 특히 tumor necrosis factor-$\alpha$ (TNF-$\alpha$) 는 다른 염증세포들의 화학주성 및 각종 염증성 매개물질 분비에 영향을 미치는 proin-flammatory cytokine으로 작용하는 한편, 직접적으로 세포손상을 야기시키는 세포독성 cytokine으로도 작용하는데, 급성폐손상에서 TNF-$\alpha$와 폐조직 손상과의 직접적인 관련성에 대해서는 아직 구체적으로 확인된 바가 많지 않다. 또한, 최근에 생체내 방어기전으로 스트레스 단백질에 대한 관심이 높아지면서, 단핵구에 내독소를 처치하거나, 동물에 내독소를 투여하기 전에 미리 스트레스 단백질을 합성시킨 경우, 내독소에 의한 손상을 감소시켜 준다는 연구가 보고되었지만, 내독소 자극 자체만으로 스트레스 단백질 합성이 유도되는지는 아직 분명하지 않다. 이에 저자들은 내독소 유도성 급성 폐손상에서 TNF-$\alpha$ 분비와 폐조직 손상을 포함한 일련의 염증반응과의 관계를 분석하고, 생체내 내독소 자극에 대하여 폐포대식세포에서 스트레스 단백질을 포함한 새로운 단백질 합성이 유도되는지 여부를 분석하고자 하였다. 연구방법 : 흰쥐의 기관내로 내독소를 투여한 후 시간별로 기관지폐포세척액내 TNF-$\alpha$농도, 염증세포 백분율 변화, 병리조직학적 소견을 관찰하고, 또한 각 시간대의 폐포대식세포에서 sodium dodesyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis와 inducible heat stress protein72에 대한 면역화학염색을 시행하여 단백질 합성양상을 분석하는 한편, 폐포대식세포에 다양한 농도의 내독소 자극과 열처리를 가한 후, 배양상층액에서 tumor necrosis factor-a 농도를 측정하고, 폐포대식세포의 단백질 합성양상을 분석하였다. 연구결과 : 내독소 투여 후 tumor necrosis factor-$\alpha$는 첫 1시간째부터 현저하게 증가하여 (p< 0.0001) 3시간째 최고치에 이르렀고 6시간째는 감소하기 시작하여 12시간째는 정상 대조군 수준으로 감소하였다. 내독소 투여 후 염증세포 백분율의 변화는 2시간째부터 시작하여 6시간째 최고에 이르러 12시간째까지 지속하였으며, 장시간째에 정상 대조군 수준으로 회복하였다. 병리조직학적 소견상 폐손상 지표 점수는 내독소 투여후 6시간째 최고치에 이르러 24 시간째까지 지속하였다. 내독소 투여 후 분리한 폐포대식세포에서 첫 1시간째부터 장시간째까지 정상 대조군에서는 관찰할 수 없던 35kDa의 새로운 단백질 띠가 관찰되었으며, 면역화학염색상 inducible heat stress protein72는 관찰되지 않았다. 내독소 자극을 가하지 않은 정상 대조세포군에 비해 내독소 자극을 가한 세포군의 배양상층액에서 tumor necrosis factor-$\alpha$ 농도가 유의하게 높았으며 (p<0.001), 내독소 자극만 가한 세포군에 비해 열충격 전처치후 내독소 자극을 가한 세포군의 배양상층액에서 tumor necrosis factor-$\alpha$ 농도가 10 ${\mu}g/ml$ 내독소 자극군만 제외하고 모두 유의하게 감소하였다 (p<0.05). 내독소 자극만 가한 세포군은 10 ${\mu}g/ml$의 고농도에서만 35 kDa 의 단백질 띠가 합성되었고 inducible heat stress protein72는 관찰되지 않았다. 열충격 전처치후 내독소 자극을 가한 세포군은 모두 inducible heat stress protein72가 관찰되었다. 결 론 : 기관내 내독소 투여에 의한 급성 폐손상에서 tumor necrosis factor-$\alpha$는 폐손상 정도와 밀접한 관련이 있다. 또한 내독소 자극에 의해서는 폐포대식세포에서 inducible heat stress protein72 합성이 유도되지 않으며, 35 kDa의 새로운 단백질 합성이 유도되었는데, tumor necrosis factor-$\alpha$ 농도 및 병리조직소견과의 관계를 볼 때, 급성 폐손상에 있어 35 kDa 단백질이 방어적인 역할을 담당하지는 않을 것으로 보이며, 이에 대해서는 향후 더 연구가 필요할 것으로 생각된다.

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낙동강 원수를 대상으로 Al염계 및 Fe염계 응집제를 이용한 고도응집의 적용 (Application of Enhanced Coagulation for Nakdong River Water Using Aluminium and Ferric Salt Coagulants)

  • 문신득;손희종;염훈식;최진택;정철우
    • 대한환경공학회지
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    • 제34권9호
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    • pp.590-596
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    • 2012
  • 고도응집 공정은 DBP 전구물질인 NOM을 제거하는 최적기법이다. 본 연구에서는 낙동강 원수를 대상으로 $FeCl_3$, alum, PSOM 및 PACl 응집제를 대상으로 고도응집 공정의 적용시 가장 효과적인 응집제와 응집조건을 DOC, THMFP, HAAFP 및 제타전위 변화를 중심으로 평가하였다. 탁도 제거율은 고도응집을 적용시 기존응집에 비해 제거율의 상승은 없었으며, 일정 응집제 주입량 이상에서는 제거율이 더욱 저하되었으나 DOC, THMFP 및 HAAFP 제거율은 응집제 종류별로 기존응집에 비해 각각 13~18%, 9~18% 및 9~18% 정도 증가하였다. 응집 pH 변화에 따른 탁도 제거특성은 $FeCl_3$와 PACl이 pH 4~10 범위에서 비교적 높은 탁도 제거율을 나타내었고 alum과 PSOM의 경우는 pH 5~8의 범위에서 안정적인 제거율을 나타내었다. DOC는 4종의 응집제 모두 pH 5~7 범위에서 안정적인 제거율을 나타내었다. 고도응집 공정을 적용시 1 kDa 이하 및 10 kDa 이상의 용존 유기물질의 제거율은 각각 11~21% 및 16% 정도 기존응집 공정에 비해 증가하였으며, 소수성 및 친수성 유기물질의 제거율은 각각 27~38% 및 11~15% 정도 증가하였다. 낙동강 원수의 고도응집에 가장 효과적인 응집제로는 $FeCl_3$로 나타났으며, 다음으로 PSOM, PACl 및 alum 순이었다.

Microsatellite Marker를 활용한 토종닭 브랜드 집단 간의 유전적 다양성 분석 (Comparison for Genetic Diversity between Korean Native Commercial Chicken Brand Groups using Microsatellite Markers)

  • 이학교;오재돈;박찬호;이건우;이준헌;전광주;공홍식
    • 한국가금학회지
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    • 제37권4호
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    • pp.355-360
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    • 2010
  • 본 연구는 국내에 보급되고 있는 대표적인 토종닭 브랜드인 한협3호와 농촌진흥청에서 개발된 브랜드인 우리맛닭, 두 브랜드 집단 간의 유전적 특성을 분석하여 향후 브랜드간의 차별화 전략을 구체화 하는데 있어 기초 자료로 활용하고자 실시하였다. 토종닭 실용계인 우리맛닭(W) 152수와 한협3호(H) 150수, 총 302수를 선발하여 공시재료로 활용하였으며, 다형성이 확인된 10종의 MS marker를 선발하여 활용하였다. 분석 결과, 두 브랜드의 평균 대립유전자의 수는 9.3으로 확인되었으며, 우리맛닭의 평균 대립유전자의 수는 8.4개, 한협3호는 7.2개로 우리맛닭이 보유한 대립유전자의 수가 많은 것으로 확인되었다. 반면, 기대되는 이형접합도(Ex H)와 관측된 이형접합도(Ob H)는 한협3호가 우리맛닭에 비해 높은 것으로 확인되었다. 두 브랜드 집단을 대상으로 각각의 MS marker의 유전자형을 분석하여 브랜드별 기대되는 이형접합도(expected heterozygosity: Ex H)와 관측된 이형접합도(observed heterozygosity: Ob H) 및 PIC(polymorphism information content)값을 계산하였다. 두 브랜드 집단 간의 유전적 유연관계를 분석 결과, DA distance는 0.132, 그리고 standard genetic distance는 0.199로 확인되었다. 두 브랜드 집단 간의 유전적 구조에 따라 각 개체들이 어떻게 분포되어 있는가를 확인한 결과, 두 집단에 속한 개체들은 크게 두 개의 그룹으로 나뉘어 분포하고 있음을 확인할 수 있었다. 두 집단 간의 유전적 거리는 비교적 가깝지만 각 개체들간의 유전적 구조를 분석한 결과, 확연히 구분되는 유전적 특성을 지니고 있음을 확인하였다.

Human Brain Pyridoxal-5'-phosphate Phosphatase: Production and Characterization of Monoclonal Antibodies

  • Kim, Dae-Won;Eum, Won-Sik;Choi, Hee-Soon;Kim, So-Young;An, Jae-Jin;Lee, Sun-Hwa;Sohn, Eun-Joung;Hwang, Seok-Il;Kwon, Oh-Shin;Kang, Tae-Cheon;Won, Moo-Ho;Cho, Sung-Woo;Lee, Kil-Soo;Park, Jin-Seu;Choi, Soo-Young
    • BMB Reports
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    • 제38권6호
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    • pp.703-708
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    • 2005
  • We cloned and expressed human pyridoxal-5'-phosphate (PLP) phosphatase, the coenzymatically active form of vitamin $B_6$, in Escherichia coli using pET15b vector. Monoclonal antibodies (mAb) were generated against purified human brain PLP phosphatase in mice, and four antibodies recognizing different epitopes were obtained, one of which inhibited PLP phosphatase. The binding affinities of these four mAbs to PLP phosphatase, as determined using biosensor technology, showed that they had similar binding affinities. Using the anti-PLP phosphatase antibodies as probes, we investigated their cross-reactivities in various mammalian and human tissues and cell lines. The immunoreactive bands obtained on Western blots had molecular masses of ca. 33 kDa. Similarly fractionated extracts of several mammalian cell lines all produced a single band of molecular mass 33 kDa. We believe that these PLP phosphatase mAbs could be used as valuable immunodiagnostic reagents for the detection, identification, and characterization of various neurological diseases related to vitamin $B_6$ abnormalities.

Immunohistochemical Studies of Human Ribosomal Protein S3 (rpS3)

  • Choi, Soo-Hyun;Kim, So-Young;An, Jae-Jin;Lee, Sun-Hwa;Kim, Dae-Won;Won, Moo-Ho;Kang, Tae-Cheon;Park, Jin-Seu;Eum, Won-Sik;Kim, Joon;Choi, Soo-Young
    • BMB Reports
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    • 제39권2호
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    • pp.208-215
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    • 2006
  • The human ribosomal protein S3 (rpS3) was expressed in E. coli using the pET-I5b vector and the monoclonal antibodies (mAbs) were produced and characterized. A total of five hybridoma cell lines were established and the antibodies recognized a single band of molecular weight of 33 kDa on immunoblot with purified rpS3. When the purified rpS3 was incubated with the mAbs, the UV endonuclease activity of rpS3 was inhibited up to a maximum of 49%. The binding affinity of mAbs to rpS3 determined by using a biosensor technology showed that they have similar binding affinities. Using the anti-rpS3 antibodies as probes, we investigated the cross-reactivities of various other mammalian brain tissues and cell lines, including human. The immunoreactive bands on Western blots appeared to be the same molecular mass of 33 kDa in all animal species tested. They also appear to be extensively cross-reactive among different organs in rat. These results demonstrated that only one type of immunologically similar rpS3 protein is present in all of the mammalian brain tissues including human. Furthermore, these antibodies were successfully applied in immunohistochemistry in order to detect rpS3 in the gerbil brain tissues. Among the various regions in the brain tissues, the rpS3 positive neurons were predominantly observed in the ependymal cells, hippocampus and substantia nigra pars compacta. The different distributions of rpS3 in brain tissues reply that rpS3 protein may play an important second function in the neuronal cells.

파스튜렐라 (A:3)외막 단백질 H의 유전자 클론닝$\cdot$발현 및 면역혈청 생산 (Molecular Cloning and Expression of a Gene for Outer Membrane Protein H in Pasteurella multocida (A:3) : Production of Antisera against the OmpH)

  • 김영환;황헌;이석찬;박은석;유선동;이정민;양주성;권무식
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제33권4호
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    • pp.274-280
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    • 2005
  • Pasteurella. multocida 균은 광범위한 질병을 야기시키는 악성 감염원으로 알려져 있다. 그람 음성균의 동종 및 이종간에 의한 감염에 대한 강력한 백신 후보 물질로써 OmpH라고 불리는 porin 단백질이 고려되어 왔다. 이 OmpH가 이번 연구에서 분리 및 정제되었다. 선도 단백질을 제거한 재조합 OmpH 단백질은 pRSET A발현벡터를 이용하여 40kDa로 발현되었으며, 친화성 크로마토그래피 정제되었다. OmpH에 대한 면역혈청을 얻기 위해, 한마리의 실험용 쥐에 한번에 50ug의 단백질을 복강 주사를 통해 2회에 걸쳐 주사했다. 항 OmpH 면역혈청의 증가는 ELISA로 측정되었다. 이번 실험에서 확인된 면역혈청의 증가는 OmpH단백질이 병원성 파스튜렐라 균이 일으키는 가금 콜레라를 예방하기 위한 백신의 강력한 후보임을 보여주고 있다.

동백나무 추출물의 혈전용해 효소활성 (Fibrinolytic Enzyme Activity of Extract from Camellia japonica L.)

  • 임채영;이숙영;표병식;김선민
    • 한국약용작물학회지
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    • 제14권4호
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    • pp.195-201
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    • 2006
  • 미생물 및 동물에 비해 식물에서는 혈전용해효소에 대한 연구가 매우 부족한 실정이며, 기존의 혈전용해효소가 가지는 혈전에 대한 비특이적, 부작용, 고가 등의 단점을 해결할 수 있는 새로운 혈전용해효소의 개발을 위하여 동백의 종자, 종피, 유엽 그리고 성엽으로부터 추출된 수용성 단백질의 혈전용해활성을 조사하였다. 각각의 동백부위로부터 추출된 조효소 용액은 기존 혈전 용해효소인 plasmin과 양성 대조군으로 하여 비교하여 fibrin agarose plate로 확인한 결과 fibrin clot을 효과적으로 분해하였다. 그 중 단백질 분해효소의 활성이 다른 부위보다 20-33배로 높았던 동백종자와 종피의 수용성 추출물의 혈전용해활성은 양성 대조군인 plasmin과 비교하여 1.6-2.0배의 높은 활성을 나타내었다. 전체 수용성 단백질은 30-80%황산암모늄을 이용하여 농축하였으며 혈전용해효소는 fibrin zymography를 수행하여 확인하였다. SDS-PAGE에 의하여 동백유엽의 혈전용해효소 분자량을 측정한 결과 45 kDa으로 단일 polypeptide임을 확인하였으며, 각종 pretense 저해제에 의한 영향을 조사한 결과 PMSF,그리고 TLCK에 강력하게 저해되는 것으로 보아 동백유엽의 혈전용해효소는 trypsin과 유사한 serine protease의 하나로 생각되었다. 그러나 EDTA와 DTT처리에 의해서는 효소활성의 저해가 두드러지게 나타나지 않고 오히려 증진된 양상을 확인할 수 있었다. 또한, 효소 활성에 미치는 pH 및 온도의 효과는 약간의 산성쪽에 가까운 pH 5.5와 $30^{\circ}C$에서는 최적의 활성을 나타내었으며, $45^{\circ}C$ 이상의 온도에서는 효소활성이 급격히 감소하였다. 이상의 모든 결과로 볼 때 동백유엽의 혈전용해효소는 trypsin과 유사한 serine protease에 속하는 혈전용해효소임을 확인할 수 있었다.