• 제목/요약/키워드: Da-Po

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재조합 미생물 바이오센서를 이용한 chlorotoluene과 nitrotoluene 화합물의 검출 (Detection of Chlorotoluene and Nitrotoluene Compounds by Recombinant Microbial Biosensors)

  • 이다영;조재호;임운기;신혜자
    • 생명과학회지
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    • 제24권1호
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    • pp.54-60
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    • 2014
  • 방향족 화합물은 독성 환경오염물질로 생태계와 인간의 건강에 해로운 영향을 미친다. 그중 chlorotoluene과 nitrotoluene 화합물은 수생생물에 독성을 나타내며 인간의 피부, 눈, 호흡기를 자극한다. 본 연구에서는 폐수의 chlorotoluene과 nitrotoluene 화합물을 저렴하고 간단하게 검출하고자 재조합 미생물 바이오센서를 개발하였다. BTEX (benzene, toluene, ethylbenzene, xylene) 분해 조절 유전자 xylR를 Po' (upstream activating sequences를 제거한 DmpR 조절단백질 promoter Po) 또는 Pu (XylR 고유의 프로모터)::lacZ 유전자(${\beta}$-galactosidase 유전자)의 upstream에 연결한 플라스미드를 제작한 후, E. coli $DH5{\alpha}$에 형질 전환하였다. 유도 화합물 존재 하에서, 아가로스에 고정된 이 재조합 바이오센서 세포는 유도 화합물에 의해 ${\beta}$-galactosidase를 발현하고 기질인 chlorophenol red ${\beta}$-D-galactopyranoside (CPRG)를 분해하여 1~2시간에 붉은색을 나타내었다. BTEX 화합물 중, 특이적으로 o-, m-, p-chlorotoluene ($0.1{\mu}M-100 mM$) 그리고 o-, m-, p-nitrotoluene (0.1 mM-100 mM)에서 높은 반응을 나타내었으며 Po'가 Pu보다 높은 반응성을 보여주었다. 아가로스에 고정된 바이오센서는 $4^{\circ}C$에서 21일간 보존 후에도 활성의 큰 변화 없이 안정하였으며, chlorotoluene과 nitrotoluene 화합물들로 spike된 전처리 하지 않은 폐수 시료 중에서도 좋은 반응을 보여 주어 폐수 중 chlorotoluene과 nitrotoluene 화합물의 간단한 초기 검출에 활용될 수 있음을 제시하였다.

전통 메주로부터 분리한 Bacillus subtilis PCA 20-3 유래 Protease 의 정제 (Purification of a Protease Produced by Bacillus subtilis PCA 20-3 Isolated from Korean Traditional Meju)

  • 임성일;유진영
    • 한국식품과학회지
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    • 제31권6호
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    • pp.1635-1641
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    • 1999
  • 재래식 메주로부터 분리한 Bacillus subtilis PCA203이 생산하는 protease를 분리 정제하였다. 먼저 효소 생산용 배지$(0.2%\;soytone,\;2%\;soluble\;starch,\;0.1%\;(NH_4)_2SO_4,\;0.1%\;CaCl_2,\;0.01%\;yeast\;extract,\;0.1%\;K_2HPO_4,\;0.1%\;KH_2PO_4)$를 이용하여 $30^{\circ}C$에서 20시간 배양한 다음, 원심분리하여 상징액을 분획한 후, 80% 포화 황산암모늄에 의한 염석과 CM Sephdex C-50 및 Sephadex G-100을 이용하여 비활성도 76.0 unit/mg, 수율 2.7%, 정제배수 7.6배로 효소를 정제하였다. 정제 단백질의 YMC-pack protein-RP column chromatography에 의한 순도검증에서 순도가 95% 이상인 것으로 나타났다. SDS-PAGE 분석에서 주 밴드의 분자량은 약 31.5 kDa이었고 아미노산 조성은 alanine, glycine, serine, valine의 함량이 많았으며 분자량 31,500 Da를 기준으로 하였을 경우 본 protease의 잔기수는 321잔기였다. RP-HPLC로 분획한 main peak의 N-terminal amino acid sequence를 확인한 결과 $Val^1-Pro^2-Tyr^3-Gly^4-Val^5-Ser^6-Gln^7-Gly^8-Lys^9-Ala^{10}$인 것으로 밝혀졌다.

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균일막 형성을 위한 항공기 부품용 타이타늄의 양극산화 최적 공정

  • 이다영;한아영;정나겸;최진섭
    • 한국표면공학회:학술대회논문집
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    • 한국표면공학회 2018년도 춘계학술대회 논문집
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    • pp.66.2-66.2
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    • 2018
  • 금속의 양극산화 공정(anodizing)은 전해질 내 금속에 인위적으로 전위를 가해 금속 표면에 얇은 산화막(oxide layer)을 형성하여 금속의 내식성, 내마모성을 증가시키는 공정이다. 타이타늄은 가볍고 단단하여 산업분야에 유용하게 사용되며 이와 같은 양극산화 공정을 통해 내식성, 내마모성을 크게 높일 수 있다. 본 연구에서는 항공기 부품용 타이타늄의 최적 양극산화 조건을 찾기 위해 전압의 파형, 전해액의 조성에 따라 양극산화 실험을 진행하였다. SEM, AFM, EDS, 분광측색계, 색채색차계 등을 이용하여 각 조건에 해당하는 타이타늄의 산화막($Tio_2$)의 두께, crack 형태, pore 형태, 균일도, 표면 조도, 내전압, 색 수치를 분석하였다. 그 결과 전압 DC 140 V, 주성분이 KOH $Na_3PO_4{\cdot}12H_2O$인 전해액으로 이루어진 양극산화 조건에서 가장 균일하고 색 재현성이 우수한 타이타늄의 산화막($Tio_2$)을 형성하였다.

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Competition between Phase Separation and Crystallization in a PCL/PEG Polymer Blend Captured by Synchronized SAXS, WAXS, and DSC

  • Chuang Wei-Tsung;Jeng U-Ser;Sheu Hwo-Shuenn;Hong Po-Da
    • Macromolecular Research
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    • 제14권1호
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    • pp.45-51
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    • 2006
  • We conducted simultaneous, small-angle, X-ray scattering/differential scanning calorimetry (SAXS/DSC) and simultaneous, wide-angle, X-ray scattering (WAXS)/DSC measurements for a polymer blend of poly($\varepsilon$-caprolactone)/poly(ethylene glycol)(PCL/PEG). The time-dependent SAXS/DSC and WAXS/DSC results, measured while the system was quenched below the melting temperature of PCL from a melting state, revealed the competitive behavior between liquid-liquid phase separation and crystallization in the polymer blend. The time-dependent structural evolution extracted from the SAXS/WAXS/DSC results can be characterized by the following four stages in the PCL crystallization process: the induction (I), nucleation (II), growth (III), and late (IV) stages. The influence of the liquid-liquid phase separation on the crystallization of PCL was also observed by phase-contrast microscope and polarized microscope with 1/4$\lambda$ compensator.

시나리오 기반의 생태마을 계획 및 설계 지원 GIS도구 개발 (Development of a Scenario-based GIS Tool for Planning and Design of Eco-Village)

  • 박성우;김두순;안경모
    • KIEAE Journal
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    • 제13권3호
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    • pp.41-49
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    • 2013
  • A tool to assist in designing an eco-village was developed using GIS(Geographical Information System) and RS(Remote Sensing) data and images. The difficulties of using GIS by untrained designers are resolved by simplifying the usage and making it a user friendly scenario-based tool, so that the designers with limited knowledge in GIS can use as a design tool. For this task, Da-Mu-Po, a village in Pohang, Gyeongbuk was picked as a site to test the design tool; through planning and designing as an eco friendly village, we tested the flexibility and usability of our newly developed design tool. From this experiment we also introduced test version of stand-alone GIS design tool by constructing program scenario and GUI(Graphic User Interface).

Biochemical analysis of a high-molecular-weight protease from Streptomyces tendae JC412

  • Seong, Chi-Nam;Nam, Doo-Hyun;Kim, Sung-Jun;Cho, Sueung-Sik;Han, Ji-Man;Kim, Joon-Ho;Lee, Hyo-Jung;Yoo, Jin-Cheol
    • 대한약학회:학술대회논문집
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    • 대한약학회 2002년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2
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    • pp.333.1-333.1
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    • 2002
  • Streptomyces tendae JC412 secreted two forms of protease(ST -1 and ST -2) when grown in OSY medium (oatmeal 1.5%. soybean meal 2%. dried yeast 1 %) supplemented with glucose(0.5%) and KH2PO4(0.05%). Initial pH of the culture medium was adjusted to 10.0 with NaOH and incubated at $27^{\circ}C$ on a rotary shaking incubator (180rpm). High- molecular-weight protease ST-1 was heat labile. whereas low molecular protease ST-2(22.000 Da) was reported to be heat stable. (omitted)

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Bacillus subtilis가 생산하는 Phytase의 정제 및 특성 (Purification and Characterization of Phytase from Bacillus subtilis)

  • 고현정;추인호;정건섭
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제34권1호
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    • pp.40-46
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    • 2006
  • 단위 동물의 사료 내 phytate 인의 효율적 이용으로 배출되는 인의 양을 줄여 환경오염을 감소시키기 위해 phytate의 분해활성이 뛰어난 phytase 효소 분비 미생물을 탐색하기 위하며 우분으로부터 phytate 분해활성이 뛰어난 phytase를 생산하는 균주를 분리하였다. 분리균주를 동정한 결과, API 50 CHB test에 의해 B. circulans로 분류되었고, 16S rRNA sequencing 결과, B. subtilis로 동정되어 Bacillus sp. CF 5-26으로 명명하였다. 효소생산을 위한 최적배지 조성은 10% rice bran extract, 0.1%, whey protein powder, $0.01%\;CaCl_{2},\;0.01%\;KH_{2}PO_4$ 이었다. Bacillus sp. CF 5-26이 생산하는 phytase는 ethanol 침전, Sephadex G-100, CM Sepharose CL-6B, Sephacryl S-100-HR column chromatography를 통하여 정제도 20.3배, 수율 5.6% 정제되었고, SDS-PAGE에서 분자량 66 kDa의 단일 band를 확인하였다. 정제된 phytase는 pH 5.0, 7.0, 11.0에서 안정하였으며, $100^{\circ}C$에서 1시간 처리하였을 때 50%의 잔존활성을 보였다. 기질 특이성은 inositol polyphosphate인 sodium phytate 분해활성이 뛰어났으며, tripolyphosphate와 pyrophosphate에도 약간의 활성을 보였다. Bacillus sp. CF 5-26이 생산하는 phytase의 sodium phytate에 대한 Km은 0.64 mM 이었고, Vmax는 $4.41{\mu}mol/min$ 이었다.

Bacillus subtilis JS-17이 생산하는 Collagenase의 정제 및 특성 (Purification and Characterization of Bacillus subtilis JS-17 Collagenase.)

  • 임경숙;손승희;강호영;전홍기
    • 생명과학회지
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    • 제15권4호
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    • pp.657-663
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    • 2005
  • Collagnase는 천연 collagen의 triple-stranded helix를 분해할 수 있는 protease로서 조직의 수복과 재생 과정에서 collagen의 재형성과 세포의 이동에 아주 중요한 역할을 하고, 숙주 감염시에는 collagen 기질을 빠르게 분해함으로써 감염을 돕는다. 본 연구에서는 일반가정에서 식용하는 김치로부터 collagenase를 생산하는 균주를 분리하여 Bacillus subtilis로 동정하였으며 이를 Bacillus subtilis JS-17이라 명명하였다. Bacillus subtilis JS-17이 생산하는 collagenase의 최적 생산 조건은 $1.5\%$ fructose, $1\%$ yeast extract, $0.5\%\;K_2HPO_4,\;0.4\%\;KH_2PO_4,\;0.01\%\;MgSO_4{\cdot}4H_2O,\;0.1\%\;citrate,\;0.1\%\;CaCl_2(pH\;7.0)$의 배지에서 $30^{\circ}C$, 200 rpm으로 72시간 동안 배양하는 것이다. 최적 조건에서 Bacillus subtilis JS-17이 생산하는 collagenase를 Amberlite IRA-900 column chromatography, Sephacryl S-300 HR column chromatography, DEAE-Sephadex A-30 column chromatography를 거쳐 분리 정제하고, 얻어진 정제 효소의 특성에 대하여 검토하였다. 정제된 collagenase의 비활성은 growth medium에서 192.1 units/mg였고, $1.1\%$의 수율로 얻어졌으며 분자량은 28 kDa이었다. 정제된 collagenase는 $55^{\circ}C$까지는 $100\%$의 활성을 유지하였고 $65^{\circ}C$에서도 $60\%$ 정도의 활성을 유지하였다. 또한 pH $6.0\~9.8$에서 $60\%$ 이상의 활성을 유지하였다. 정제된 collagenase는 metalloprotease inhibitor인 EDTA와 O-phenanthroline에 의해 효소 활성이 감소하였을 뿐만 아니라 Ammoninum persulfate, L-cysteine, N-ethylmaleimide, SDS, $NaN_3$, NaF, $KMnO_4$, PMSF에 대해서도 활성이 감소하였다. 정제된 collagenase를 여러 가지 기질에 대해 효소 활성을 비교한 결과 collagen (type I)에 대해 기질 특이성을 가지고 있었다.

Peniophora sp. JS17 유래 멜라닌 탈색 효소 생산을 위한 배지 조성의 최적화 (Optimization of Media Composition on the Production of Melanin Bleaching Enzyme from Peniophora sp. JS17)

  • 손민정;김연희;남수완;전숭종
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제47권2호
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    • pp.250-258
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    • 2019
  • 삼림지역의 고목에서 분리한 Peniophora sp. JS17 균주는 사람 머리카락 유래 멜라닌을 탈색하는 세포 외 분비효소를 생산했다. JS17 균주는 laccase 및 manganese peroxidase 활성을 나타냈지만 lignin peroxidase 활성은 나타내지 않았다. 본 균주를 회분배양한 결과 멜라닌 탈색 활성은 laccase 활성으로부터 유래하는 것으로 확인되었다. Peniophora sp. JS17 균사체로부터 멜라닌 탈색 효소를 생산하기 위한 배지 조건을 조사하였다. 다양한 합성 배지 중에서 minimal medium (2% glucose, 0.2% malt extract, 0.1% $KH_2PO_4$, 0.4% $MgSO_4{\cdot}7H_2O$)이 가장 높은 laccase 활성을 나타내었다. Laccase 생산에 대한 배양 조건을 최적화하기 위하여 minimal medium의 조성 중에서 탄소원 및 질소원에 대한 영향을 조사하였다. 다양한 탄소원 및 질소원 중에서 각각 2% xylose 및 0.4% tryptone의 경우에 가장 높은 laccase 활성을 나타내었다. Ammonium sulfate 침전 및 Hitrap Q Sepharose column을 이용하여 정제한 효소는 SDS-PAGE에서 약 70 kDa의 분자량 부근에 2종류의 isozyme 형태로 존재 하였다. 멜라닌 탈색율은 HBT 및 syringaldehyde의 존재하에서 48시간 만에 각각 77% 및 55%를 나타내었고, mediator가 없는 조건에서는 9%의 멜라닌 탈색율을 나타내었다.

개에서 Staphylococcus pseudintermedius에 의해 발생한 심내막염 증례 (Staphylococcus pseudintermedius-induced Aortic and Tricuspid Bacterial Endocarditis in a Dog)

  • 김준환;송루희;이다미;이현석;조호성;신기욱;박진호;박철
    • 한국임상수의학회지
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    • 제29권3호
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    • pp.255-258
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    • 2012
  • 14년령의 중성화한 암컷 시츄가 식욕부진, 침울, 호흡곤란으로 전북대학교 수의과대학 동물병원에 내원하였다. 2주전 유선종양 제거 수술을 받았으며 내원 당시 신체검사에서 구강 내 심한 치은염, 치태 및 치석을 관찰하였다. 청진상 좌측 심기저부에서 이완기 잡음이 들렸으며 우측 심첨부에서는 수축기성 잡음이 들렸다. 심혈관 초음파 검사 결과 삼첨판과 대동맥 판막의 변성과 함께 혈액의 역류를 관찰 할 수 있었다. 세균성 심내막염을 진단하고 그 원인체를 알기 위해 혈액배양을 실시 하였다. 혈액배양 검사 결과가 나오기 전에 항생제를 포함하여 이뇨제와 베나제프릴을 사용하였으며 환자는 잘 관리 되었다. 혈액배양 검사 결과 staphylococcus pseudintermedius가 배양 되었다. 하지만 1주일 후 환자는 급성으로 발생한 폐수종에 의해 사망하였다.