Degradation of deoxyribonucleic acid(DNA) and ribonucleic acid(RNA) by cell-free extract of mixed rumen protozoa of buffalo rumen was investigated. DNA was observed to be degraded rapidly during an initial incubation period of 2 hr with simultaneous appearance of degradation products. RNA on the other hand recorded a rapid degradation during an initial incubation period of 1 hr. RNA degradation products appeared upto an incubation period of 2 hr. DNA was observed to degrade into oligo- and mononucleotides. pyrimidine nucleosides, purine nucleoside adenosine and bases xanthine, hypoxanthine and thymine. Degradation products of RNA comprised of pyrimidine nucleosides, purine nucleoside, adenosine and bases xanthine, hypoxanthine and uracil besides oligo- and mononucleotides.
The CRISPR-Cas system is a well-established RNA-guided DNA editing technique widely used to modify genomic DNA sequences. I used the CRISPR-Cas9 system to change the second and third nucleotides of the triplet $T{\underline{CT}}$ of human TNSFSF9 in HepG2 cells to $T{\underline{AG}}$ to create an amber stop codon. The $T{\underline{CT}}$ triplet is the codon for Ser at the $172^{nd}$ position of TNSFSF9. The two substituted nucleotides, AG, were confirmed by DNA sequencing of the PCR product followed by PCR amplification of the genomic TNFSF9 gene. Interestingly, sequencing of the cDNA of transcripts of the edited TNFSF9 gene revealed that the $T{\underline{AG}}$ had been re-edited to the wild type triplet $T{\underline{CT}}$, and 1 or 2 bases just before the triplet had been deleted. These observations indicate that CRISPR-Cas9-mediated editing of bases in target genomic DNA can be followed by spontaneous re-editing (correcting) of the bases during transcription.
The internal regions of nuclear small subunit rRNA from 6 plaeurotus species and 5 Pleurotus ostreatus strains were amplified by PCR and sequenced. The DNA sequences of 8 Pleurotus strains (P. ostreatus NFFA2, NFFA4501, NFFA4001, KFFA4001, KFCC11635, P florida, P. florida, P. sajor-cuju, P. pulmonarius, and P. spodoleucus) were idential, but P. cornucopiae differed from them in two bases out of 605 bases. However, p[hylogenetic analysis of the sequences by DNA-distance matrix and UPGMA methods showed that P. ostreatus NFFA2m1 and NFFA2m2, known as mutants of P. ostreatus NFFA2, belonged to anther group of Basidiomycotina, which is close to the genus Auricularia. The difference of the SSU rDNA sequences of P. cornucopiae from other Pleurotus species tested corresponds to the difference of mitochondrial plasmid type present in Pleurotus species as observed by Kim et al. (1993, Korean J. Microbiol. 31, 141-147).
열목어를 비롯한 산천어, 시마연어, 연어, 무지개송어 등 우리나라 연어아과 어류의 집단구조분석을 위한 기초자료를 얻기 위하여, 미토콘드리아 ribosomal RMA 유전자 영역의 염기서열변이를 비교${\cdot}$분석하였다. 미토콘드리아 DNA의 125 rRNA(945 bases, 열목어 의 경우 946 bases), Valine transfer RNA (72 bases), 및 16S rRNA(1513 bases) 등 3개의 유전자 영역에 걸쳐, 최대 2531 bases의 염기서열을 PCR/direct sequencing하여 얻었는데, 모든 염기변이중 전이가 월등히 우세하게 나타났으며, 종내${\cdot}$종간변이율은 모두 $0.5{\%}$이하로 낮게 나타나, 다른 영역에 비해 rRNA 유전자 영역에서의 염기서열이 매우 보존적임을 보여주었다. 또한, 미토콘드리아 rRNA 유전자 염기서열은 연어류의 속 (genus)단계 이상에서 집단분류표지인자로 유용하게 쓰일 수 있으리라 사료되어진다. 미토콘드리아 rRNA 염기서열자료를 기초로 구성된 phylogenetic tree를 통해 이들 종간의 진화적인 유연관계를 살펴본 결과, 시마연어가 무지개송어보다는 연어와 더 근연인 것으로 나타났으며, 열목어는 가장 유연이 먼 종임을 확인할 수 있었다.
A. nidulans의 $tRNA^{Arg}$의 염기순서를 효소절단 방법으로 결정하였다. 이 방법으로 염기순서를 결정한 결과 다음과 같았다. 5'GGCCGGCUGGCCCAAXUGGCAAGGCXUCUGAXUACGAAXCAGGAGAUUGCAXXXXXGAGCXXUXXGUCGGUCACCA3'. 위의 결과로 플로버잎 구조를 만들어본 결과 안티코돈이 ACG인 $tRNA^{Arg}$으로 판명되었고. 이 결과는 아미노산 부하검사(charging test)의 결과와 일치하였다. 이 tRNA의 유천자의 염기순서 결과와 비교하여 염기순서의 정확성을 검증하였고, minor base분석을 통하여 전 염기순서를 추정하였다.
The internal regions of nuclear small subunit rRNA from 6 plaeurotus species and 5 Pleurotus ostreatus strains were amplified by PCR and sequenced. The DNA sequences of 8 Pleurotus strains (P. ostreatus NFFA2, NFFA4501, NFFA4001, KFFA4001, KFCC11635, P florida, P. florida, P. sajor-cuju, P. pulmonarius, and P. spodoleucus) were idential, but P. cornucopiae differed from them in two bases out of 605 bases. However, p[hylogenetic analysis of the sequences by DNA-distance matrix and UPGMA methods showed that P. ostreatus NFFA2m1 and NFFA2m2, known as mutants of P. ostreatus NFFA2, belonged to anther group of Basidiomycotina, which is close to the genus Auricularia. The difference of the SSU rDNA sequences of P. cornucopiae from other Pleurotus species tested corresponds to the difference of mitochondrial plasmid type present in Pleurotus species as observed by Kim et al. (1993, Korean J. Microbiol. 31, 141-147).ishement of silencing at the HMR/hsp82 locus can occur in G1-arrested cells. Cell cycle arrest at G1 phase was achieved by treatment of early log a cell cultures with .alpha.-factor mating pheromone, which induces G1 arrest. The result suggests that passage through S phase (and therefore DNA replication) is nor required for re-establishing silencer-mediated repression at the HMNRa/HSP82 locus. Finally, to test whether de nono protein synthesis is required for re-establishment of silencer-mediated repression, cells were pretreated with cycloheximide (500 /.mu.g/ml) 120 min. It was apparent that inhibiting protein synthesis delays, but does not prevent, re-establishment of silencer-mediated repression. Altogether, these results indicate that re-establishment of silencer-mediated repression is not dependent on the DNA replication and has no requirement for protein synthesis.
Resveratrol (RES) and genistein (GEN) are the dietary natural products known to possess chemopreventive property and also the ability to repair DNA damage induced by mutagens/carcinogens. It is believed that the therapeutic activity of these compounds could be primarily due to their interaction with nucleic acids but detailed reports are not available. We here explore the interaction of these drugs with nucleic acids considering DNA and RNA as a potential therapeutic target. The interaction of RES and GEN has been analysed in buffered solution with DNA [saline sodium citrate (SSC)] and RNA [tris ethylene diammine tetra acetic acid (TE)] using UV-absorption and Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy. The UV analysis revealed lesser binding affinity with nucleic acids at lower concentration of RES (P/D = 5.00 and 10.00), while at higher drug concentration (P/D = 0.75, 1.00 and 2.50) hyperchromic effect with shift in the ${\lambda}_{max}$ is noted for DNA and RNA. A major RES-nucleic acids complexes was observed through base pairs and phosphate backbone groups with K = $35.782\;M^{-1}$ and K = $34.25\;M^{-1}$ for DNA-RES and RNA-RES complexes respectively. At various concentrations of GEN (P/D = 0.25, 0.50, 0.75, 1.00 and 2.50) hyperchromicity with shift in the ${\lambda}_{max}$ from 260 $\rightarrow$ 263 om and 260 $\rightarrow$ 270 nm is observed for DNA-GEN and RNA-GEN complexes respectively. The binding constant (from UV analysis) for GEN-nucleic acids complexes could not be obtained due to GEN absorbance overlap with that of nucleic acids at 260 nm. Nevertheless a detailed analysis with regard to the interaction of these drugs (RES/GEN) with DNA and RNA could feasibly be understood by FTIR spectroscopy. The NH band of free DNA and RNA which appeared at $3550-3100\;cm^{-1}$ and $3650-2700\;cm^{-1}$ shifted to $3450-2950\;cm^{-1}$ and $3550-3000\;cm^{-1}$ in DNA-RES and RNA-RES complexes respectively. Similarly shifts corresponding to $3650-3100\;cm^{-1}$ and $3420-3000\;cm^{-1}$ have been observed in DNA-GEN and RNA-GEN complexes respectively. The observed reduction in NH band of free nucleic acids upon complexation of these drugs is an indication of the involvement of the hydroxyl (OH) and imino (NH) group during the interaction of the drugs and nucleic acids (DNA/RNA) through H-bonded formation. The interaction of RES and GEN with bases appears in the order of G $\geq$ T > C > A and A > C $\geq$ T > G. Further interaction of these natural compounds with DNA and RNA is also supported by changes in the vibrational frequency (shift/intensity) in symmetrical and asymmetrical stretching of aromatic rings of drugs in the complex spectra. No appreciable shift is observed in the DNA and RNA marker bands, indicating that the B-DNA form and A-family conformation of RNA are not altered during their interaction with RES and GEN.
E. coli의 $tRNA^{phe}$내에는 세 개의 psiudouridine 염기들이 존재한다. 이 $tRNA^{phe}$내의 pseudouridine 염기들의 기능을 연구하기 위하여 부위특이적 돌연변이를 이용하여 $tRNA^{phe}$ 유전자의 염기를 다른 염기로 치환시켰다. E. coli $tRNA^{phe}$ 유전자들 중 하나인 phe W 유전자내에서 32번에 해당하는 T 염기를 C 염기로 39번 T 염기를 C 염기로 Kunkel이 개발한 부위특이적 돌연변이 방법을 사용하여 각각 치환시켰다. DNA 염기서열을 결정함으로써 돌연변이체를 확인하였으며, 이들 돌연변이 유전자를 함유한 재조합 플라스미드를 이용하여 돌연변이된 phe W 유전자들의 E. Coli NP37($pheS^{-ts}$)에 대한 complementation 활성을 조사하였다. 32번 위치가 변이된 pheW 유전자 뿐만아니라 39번 위치가 변이된 phe W 유전자를 함유한 E. coh NP37들은 모두 non-permissive temperature에서 자라지 못하였다. 이 결과는 변이된 pheW 유전자들이 E. coli NP37을 complementation 할 수 없으며, 또 pseudouridine 염기들이 생체내에서 E. coli $tRNA^{phe}$의 활성에 필수적이라는 것을 의미한다.
본 논문에서는 4개의 유전자 핵염기 C, U(T), A, G를 행렬로 표시하고, $4{\times}4$ RNA(ribose nucleic acid)에서 $8{\times}8$ DNA(deoxyribose nucleic acid)로의 행렬 구조에 대해 서술한다. BCHJM (block circulant Hadamard-Jacket matrix)에 의해 DNA 이중나선 구조(double helix)를 해석한다. 직교 BCHJM은 비대칭 쌍 상보성(complementary)을 보이고 있다. 블록순환(block circulant) RNA 쌍 손상(damage) 신뢰성(reliability)은 기존 이중나선 보다 우수함을 보이고 있다. k=4, N=1인 경우 블록 순환 상보 쌍 신뢰도는 93.75%이고, k=4, N=4인 경우 신뢰도는 98.44%로 기존 이중나선의 경우 보다 4.69% 개선된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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