dbcAMP에 의해 성숙이 억제된 생쥐난자의 수정능을 조사하기 위해 본 실험을 행하였다. dbcAMP로 일시 성숙이 억제되었던 난자를 배양액내에서 정자와 섞고 24시간 배양한 후 발생한 2세포기의 배아형성, 정자의 관입, 전액형성을 조사하여 2세포기로 배아발생이 진척된 것을 수정율의 기준으로 정하였다. dbcAMP를 처리하지 않은 난자는 약 53.3%의 수정율을 보였으며,dbcAMP가 함유되 배양액에서 배양한 후 기본 배양액에서 성숙시킨 난자들의 수정율은 dbcAMP의 처리시간에 비례하여 낮으나, 정자의 관입은 정상적으로 일어났다. 전자현미경적 관찰에 의하면 dbcAMP 처리는 난자의 미세구조에 어떠한 변화도 야기하지 않았다. 따라서 dbcAMP를 사전처리하여 성숙을 억제한 난자라할지라도 어느 정도의 수정능력을 보유하고 있다고 사료된다.
Purpose: DBC2 (Deleted in Breast Cancer 2) has been indicated to be a tumor suppressor gene in many cancers including lung adenocarcinoma recently. In this study, we aimed to explore the expression status of DBC2 in different subtypes of lung adenocarcinoma (from pre-invasive to invasive lesions), and to determine if downregulation becomes more marked with pathological progression. Methods: We collected 172 tissue samples from different subtypes of lung adenocarcinoma and investigated the frequency of DBC2 loss by immunohistochemistry. Results: Our results indicated that DBC2 downregulation is a relatively frequent event in lung adenocarcinoma. Moreover, as the adenocarcinoma subtype turns to be more invasive, more downregulation occurred. Conclusion: We conclude that loss of DBC2 expression is an early and progressive event in the pathogenesis of lung adenocarcinoma. Positive DBC2 immunohistochemistry may become an indicator for early stage disease and better prognosis of lung adenocarcinomas.
Deleted in breast cancer-1 (DBC1) contributes to the regulation of cell survival and apoptosis. Recent studies demonstrated that DBC is phosphorylated at Thr454 by ATM/ATR kinases in response to DNA damage, which is a critical event for p53 activation and apoptosis. However, how DBC1 phosphorylation is regulated has not been studied. Here we show that protein phosphatase 4 (PP4) dephosphorylates DBC1, regulating its role in DNA damage response. PP4R2, a regulatory subunit of PP4, mediates the interaction between DBC1 and PP4C, a catalytic subunit. PP4C efficiently dephosphorylates pThr454 on DBC1 in vitro, and the depletion of PP4C/PP4R2 in cells alters the kinetics of DBC1 phosphorylation and p53 activation, and increases apoptosis in response to DNA damage, which are compatible with the expression of the phosphomimetic DBC-1 mutant (T454E). These suggest that the PP4-mediated dephosphorylation of DBC1 is necessary for efficient damage responses in cells.
생쥐난자의 성숙을 억제하는 것으로 알려진 dbcAMP와 progesterone을 동시에 처리하였을 때의 영향을 알아보기 위하여 본 실험을 행한 결과는 다음과 같다. 1) 10 $\\muM$/ml의 dbcAMP 혹은 2 $\\muM$/ml의 progesterone을 단독처리하였을 때에는 난자의 성숙을 억제하지 못했다. 2) 그러나 dbcAMP(10 $\\mug$/ml)와 progesterone(2 \\mug$/ml)을 동시에 배양액에 처리하였을 때에는 난자의 성숙이 억제되었다. 3) 난자를 먼저 4시간동안 위의 두 억제제가 들어있는 배양액에서 배양한 뒤 다시 정상배양액에 옮겨 계속 배양하면 나자들은 대조군에서와 같은 비율로 성숙을 하였다. 위의 결과로 보아 dbcAMP와 progesterone이 동시에 배양액에 존재할 때에는 각각 단독 존재하였을 때 영향이 없는 농도의 dbcAMP와 progesterone으로도 능히 난자의 성숙을 억제 시킬 수 있었으며 이 같은 억제효과는 가역적임을 알게되었다.
절연체기판으로서는 아루미나 세라믹 기판을 사용하고 전극으로서는 copper를 사용 하여 DBC공정으로 접합하여 제조하였다. 접합재료는 전처리과정을 거친다음 불활성기체 분 위기 하에서 1065~1083$^{\circ}C$의 온도로 1~60분 동안 유지시켜 접합하였다. 본 실험에서 접합 된 세라믹기판과 Cu의 계면의 SEM 관찰 결과 안정된 접합면이 생성되었으며 접합강도는 약 116MPa로 양호한 값을 얻었다. 또한 Al2O3/Copper 접합계면을 ESCA를 통하여 분석한 결과 CuAlO2의 화합물의 생성을 확인하였다. 이 DBC공정은 제조공정의 단순화를 실현시켜 대량생산에 적합함으로 전자부품 모듈생산에 유용하게 적용될 수있을것이다.
디메틸술폭시드 용매 중에서 아직 밝혀진 바 없는 불포화계 $N_2O_2$형 거대고리 리간드들을 포함한 우라늄(VI)과 네오디움(III)착물, 그리고 cryptand 222와 DBC 거대고리 리간드를 가지는 네오디움(III)과 우라늄(VI)착물에 대한 직류폴라로그래프적 거동을 조사하였다. 직류폴라로그래피에 의하여 리간드와 착물의 산화 환원성, 가역성, 환원과정에 관여하는 전자수 및 산첨가에 따른 영향 및 산화-환원전극반응의 메카니즘을 알아 보았다. 그리고 착물들의 안정도 상수와 조성비를 알아보았다. immine계 거대고리 리간드를 가지는 네오디움(III)착물의 환원파는 나타나지 않았으나, 우라늄(VI)착물은 6전자 3단계 환원파를 DBC를 가지는 우라늄(VI)착물은 2전자 2단계 환원파를, 그리고 cryptand 222와 DBC를 가지는 네오디움(III)착물은 1전자 1단계 환원파를 각각 나타내었으며 이들 착물들은 확산지배적이며 가역성은 비교적 좋았다. uranyl(II)금속 착이온의 제 1,2단계 환원파는 1전자 환원반응이며 제 3단계 환원파에서는 4전자 환원반응, 그리고 neodymium(III)착물은 1전자 1단계 환원과정을 가진다. DBC와 imine계 거대고리 리간드를 가지는 우라늄(VI)착물은 pH=7.0이상에서, cryptand 222와 DBC를 리간드로 하는 네오디움(III)착물은 pH=4.0 이상에서 안정한 착물을 형성한다. imine계 거대고리 리간드를 가지는 $UO_2\;^{2+}$착물의 안정도 상수값은 $7.008{\sim}7.273$이라는 새로운 안정도 상수값들을 얻었고 이 값들은 Odien-Ntn > Trans Otn-Ntn = Cis Otn-Ntn > Oen-Ntn 순이었다. 그리고 $UO_2(II)$-cryptand 222 및 Nd(III)-DBC 착물의 안정도 상수값은 7.614, 12.669, 4.223이었고 DBC리간드 착물에서는 $UO_2\;^{2+}$착물의 안정도 상수값이 $Nd^{3+}$의 그것보다 크며 $Nd^{3+}-cryptand\;222$ 착물의 안정도 상수가 가장 크다.
Donation-based crowdfunding(DBC) is conducted from voluntary participation by project operators. It requires a different operational strategy than general crowdfunding. However, there is a limited amount of research on the operational strategy of DBC. This study explores the value co-creation(VCC) strategy of DBC and analyzes the operation of DonorsChoose.org. The research questions encompass the following: First, we identify the VCC activities of DBC. Second, we uncover activities of the platform operators that facilitate the participation of project operators in VCC activities. Third, we explore how VCC activities affect project operational performance and platform performance in DBC. By adopting a single case study method on DonorsChoose.org, this study provides meaningful insight and detailed understanding into the VCC in DBC. First, VCC processes of DBC are identified(Co-ideation, Co-design, Co-funding, Co-operation, and Co-evaluation). Also, interactions between platform operators and project operators were defined at each stage. Second, this study confirmed that standardization and simplification of platform operators, support for pre- and post-activity, and high-quality information delivery activities were critical. Third, we confirm that these VCC activities improve VCC operational performance and platform performance. The theoretical significance of this study is that the concept of VCC, previously concentrated on participants with economic drivers(consumers and investors), has been applied to the context of DBC, a form of participation by participants with non-economic drivers(supporters and donors). In addition, this study practically contributes to the practice of VCC strategy among various platform operating strategies in DBC.
自記放射法을 이용하여 dbcAMP와 theophylline이 未成熟卵子의 RNA合成에 미치는 영향을 관찰하였다. 培養中인 未成熟卵子의 RNA合成은 dbcAMP와 theophylline에 의하여 抑制를 받았다. dbcAMP나 theophylline은 培養液(modified Krebs-Ringer bicarbonate solution)內에 100 $\\mu$g/ml 정도 들어 있으며 핵막(germinal vesicle)의 붕괴 되지 못하고 그대로 存在하며 그동안의 RNA合成은 극히 억제된 채로 남아 있다. 그러나 培養을 시작하여 2$\\sim$3時間後, 즉 핵막붕괴가 끝난 다음에 이들 억제물질을 배양액에 添加하면 正常卵子와 같이 성숙분열이나 RNA合成이 억제 됨이 없이 진행된다. 24時間동안 dbcAMP나 theophylline으로 성숙이 억제 되었던 卵子도 이들 억제물질을 제거하면 즉시 成熟分裂이 진행되며 RNA合成도 正常的으로 일어난다. 이런 結果로 미루어 dbcAMP등의 RNA合成 抑制機作에 한 가지 가능성을 추측할 수 있다. 즉 dbcAMP나 theophylline의 처리에 의해 細胞質內 cAMP의 농도가 높아지고 이 cAMP는 핵막붕괴나 染色質의 응집에 관여하는 단백질 合成을 誘導할 mRNA合成을 억제하며 이 때문에 卵子는 핵을 보유한채 그대로 남아 있는 것이다.
생쥐 미성숙 난자를 재료로 하여 난자 성숙 억제제인 dbcAMP 존재하에서 GVBD 난자와의 융합에 따른 체외성숙 양상을 조사하였다. 기본 배양액 내에서 3시간이 경과하였을 때 GVBD 난자와 융합된 미성숙 난자 뿐만이 아니라 미성숙 난자 뿐만이 아니라 미성숙 난자끼리 융합된 것들도 모두 성숙을 재개하였다. 그러나 dbcAMP가 함유된 배양액 내에서 3시간 경과 하였을 때는, 미성숙 난자끼리 융합된 것들은 모두가 GV상태로 성숙이 억제된 채로 있었고 반면에 GVBD 난자와 융합된 미성숙 난자들은 비록 dbcAMP가 존재하더라도 보두 성숙을 재개하였다. dbcAMP가 함유된 배양액 내에서 20시간이 경과하였을 때 미성숙 난자끼리 융합된 것들은 여전히 성숙이 억제되어 있었으나 GVBD 난자와 융합된 미성숙 난자들은, 기본 배양액 내에서 배양된 융합 난자들과 마찬가지로 다수가 하나 혹은 두개의 극체를 형성하는 제2 감수분열 중기에 진입하였다. 두 개의 극체를 방출한 융합난자들 중에는 하나의 세포질 내에 감수분열 중기방추사가 두 곳에서 형성되는 것이 관찰되었다. 이 실험 결과로 보아 이미 성숙이 재개된 난자내에는 난자 성숙 억제제인 dbcAMP의 억제효과보다 더 영향이 큰 난자 성숙 유도 물질이 있으며, 이 물질이 융합하고 있는 미성숙 난자내로 이전하여 dbcAMP에 의해서 그 성숙이 억제된 미성숙 난자의 성숙을 유도한다는 것을 알 수 있다.
To investigate the immunomodulatory roles of cyclic AMP (CAMP) on macrophage- and T lymphocyte-mediated immune responses, CAMP elevating agents were employed and carefully re-examined under the activation conditions of the cells. Various inhibitors tested dose-dependently blocked tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$ production with IC$_{50}$ values ranged from 0.04 to 300 ${\mu}$M. Of the inhibitors, cAMP-elevating agents showed lower cytotoxicity assessed by lactate dehydrogenase (LDH) release, suggesting less toxic and more selective. In particular co-treatment of dbcAMP with a protein kinase C inhibitor staurosporine displayed the synergistic inhibition of TNF-${\alpha}$ production. The modulatory effect of dbcAMP on TNF-${\alpha}$ and nitric oxide (NO) was significantly affected by treatment time of dbcAMP. Thus, post-treatment of dbcAMP (three hours before LPS) abrogated dbcAMP's inhibitory activity and rather enhanced TNF-${\alpha}$ level up to 60%. In contrast, additional NO production was shown at the co-treatment of dbcAMP with LPS. Unlike simultaneous treatment of phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and interferon (IFN)-${\gamma}$co-treatment, the combination of dbcAMP with other NO-inducing stimuli did not show drastic overproduction of NO. cAMP elevating agents also diminished splenocyte proliferation stimulated by concanavalin (Con) A, phytohemaglutinin A (PHA) and lipopolysaccharide (LPS). In addition, dbcAMP but not rolipram strongly suppressed CD8$^+$ T cells (CTLL-2). Finally, cAMP elevating agents were differentially involved in regulating CD98-mediated cell-cell adhesion. Thus, dbcAMP and rolipram significantly enhanced the cell-cell adhesion, whereas forskolin blocked. Therefore, our results suggest that CAMP elevating agents participate in various immune responses mediated by macrophages and T cells with a different fashion depending on cellular environments and activation signals.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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